巢式pcr检测石蜡包埋组织中的着色霉.pdf

中山大学硕上学位论文巢式P C R 检测石蜡包埋组织中的着色霉在诊断着色霉所致C B M 中的应用价值研究目的：1 ．从石蜡包埋组织中获取可用于P C R 扩增的着色霉D N A 2 ．评价单一P C R 和巢式P C R 方法检测着色霉D N A 的灵敏度3 ．比较病理学检查与巢式P C R 两种诊断方法之间的差异4 ．通过比较巢式P C R 方法检测石蜡包埋组织中着色霉与检测尸m 、孢子丝菌的差异，对该方法在诊断C B M 中的应用作出评价材料和方法：提取1 0 例C B M 病人及1 0 例Fm 感染免疫正常W i s t a r 大鼠皮损石蜡包埋组织中的D N A ，基于着色霉r D N AI T S 区域设计特异性引物，采用巢式P C R 方法进行扩增同时提取石蜡包埋的P S M 组织1 0 例，孢子丝菌病组织l O 例，曲霉病、荚膜组织胞浆茵病、念珠菌病、毛霉病组织各l 例作为对照采用基于Pm 、孢子丝菌的1 8 sr D N A 区域的特异性引物，分别对P S M 和孢子丝菌病组织蜡块进行相应的巢式P C R 扩增以S P S S l 6 ．0 软件进行统计结果的比较与分析。

结果：1 ．1 0 例C B M 病人及l O 例Fm 感染免疫正常W i s t a r 大鼠皮损石蜡包埋组织外巢P C R 扩增前者8 例，后者2 例可见1 至数个5 5 0 —9 0 0 b p 条带，内巢P C R扩增前者3 例、后者5 例出现1 1 7 b p 条带2 ．单一P C R 和巢式P C R 检测着色霉D N A 的灵敏度分别为1 ．8 5 2X1 0 3f g ／g l和1 ．8 5 2 ×1 0 ～f g ／肛l ，巢式P C R 比单一P C R 约敏感1 0 5 倍3 ．1 0 例P S M 石蜡包埋组织外巢P C R 均出现6 0 0 b p 条带，内巢P C R 均出现4 0 0 b p条带1 0 例孢子丝菌病石蜡包埋组织外巢P C R2 例出现3 0 5 b p 条带，内巢P C R7 例出现1 5 2 b p 条带4 ．组织病理与巢式P C R 方法诊断C B M 结果差异具有统计学意义，P = - 0 ．0 0 1 中山大学硕～{ 二学位论文巢式P C R 检测石蜡包埋组织中的着色霉巢武P C R 诊断C B M 与诊断P S M 比较结果有统计学差异，P 值为0 ．0 0 2 。

巢式P C R 诊断孢子丝菌病与诊断C B M 、P S M 相比，结果无统计学差异，P 值分别为0 ．2 4 5 ，0 ．2 1 1 结论：1 ．可以从深部真菌病石蜡包埋组织中获得可扩增着色霉D N A 2 ．巢式P C R 比单一P C R 检测着色霉D N A 灵敏度更高3 ．组织病理诊断C B M 优于巢式P C R 方法4 ．巢式P C R 扩增石蜡包埋组织中所提取的D N A 可以快速、特异地诊断C B M ，但诊断C B M 的应用价值不如P S M 关键词：巢式P C R ；诊断；着色霉；石蜡组织中山大学硕．上学位论文巢式P C R 检测石蜡包埋组织中的着色霉N e s t e dP C RA s s a yf o rD e t e c t i o no fF o n s e c a e ai nP a r a f f i nW a xB a c k g o u n d ：E m b e d d e dT i s s u eM a j o r ：D e r m a t o l o g ya n dV e n e r e o l o g yM a s t e rC a n d i d a t e ：Q i nW e iS u p e r v i s o r ：P r o f ．X iL i y a nA b s t r a c tC h r o m o b l a s t o m y c o s i s ( C B M ) i sac l l r o m cs u b c u t a n e o u sg r a n u l o m a t o u sm y c o s i sc a u s e db ys e v e r a lg e n e r ao fd e m a t i a c e o u sf u n g i ．M a n u a lw o r k e r sa r ea th i g hr i s kt h a ng e n e r a lp o p u l a t i o n ，a n dt h ee x p o s u r es i t e sa r eo f t e ni n v o l v e dd u et oa c c i d e m a li n j u r i e s ．C B Mi sm o s tc o m m o n l yf o u n di nt r o p i c a la n ds u b t r o p i c a lz o n e s ．T h i sd i s e a s eh a sb e e nr e p o r ti nm o r et h a nt w e n t yp r o v i n c e so ra u t o n o m o u sr e g i o n si nC h i n a ，a n dZ h a n g q i ui nS h a n d o n ga n dX i n g y a n gi nH e n a na r et h em a j o re p i d e m i ca r e a s ．F o n s e c a e ai st h em a j o rp a t h o g e no fC B M ，i nw h i c hF o n s e c a e ap e d r o s o i ( F 力a n dF o n s e c a e am o n o p h o r a 僻扰) a r et h em a j o rp a t h o g e n i cs p e c i e s ．T h ed i s e a s ed o e s n ’tf o r mac h a r a c t e r i s t i cl e s i o n ．E x i s to fs c l e r o t i cc e l l sl e a dt od i a g n o s eo fC B M ，h o w e v e rt h ep o s i t i v er a t ev a r i e sw i t hd i f f e r e n tc o u r s e so ft h es a m p l ec o l l e c t i o na n dm i c r o s c o p i ce x a m i n a t i o n ．D u et ot h es l o w l yg r o w t ho ft h ep a t h o g e n , c u l t u r ei sn o tt h eb e s tw a yf o rt h ee a r l yd i a g n o s e ，a n dc o n t a m i n a t i o na l s oc a na r i s ed u r i n gt h ec o u r s e ．A sC B Mh a sal o n gc o u r s e ，a 危a t u r eo fs t u b b o r na n de a s yr e c u r r e n c e ，a n da si tc a nl e a dt oa n k y l o s i s ，m y o p h a g i s m ，o s t e o p o r o s i s ，a n de v e ns q u a m o u s —c e l l e dc a r c i n o m a ，s e a r c h i n gf o rar a p i da n ds p e c i f i cd i a g n o s t i cm e t h o dw h i c hl e a dt oa ne a r l yt r e a t m e n ti sa t t r a c t i n gm o r ea n dm o r ea t t e n t i o n ．W i t ht h ed e v e l o p m e n to fm o l e c u l a rb i o l o g y ,P C Ra s s a yh a sg r a d u a l l yb e e nu s e df o rd i a g n o s i n gd i s e a s e s ．T h e r ea r er e p o r t sa b o u t中山大学硕上学位论文巢式P C R 检测石蜡包埋组织中的着色霉d e t e c t i n gt h ep a t h o g e n so fm u c o r , h i s t o p l a s m ac a p s u l a t u ma n dp e n i c i l l i u mm a r n e f f e i僻m ) i nt h ep a r a f f ' mw a xe m b e d d e dt i s s u e sa n dt h es p o r o t r i c h o s i si nt h ef r e s ht i s s u e sb yN e s t e dP C RS Of a r ．I n d e n t i f i c a t i o no fp u r ec u l t i v a t i o no fF o n s c a e ab yP C Rh a sa l s ob e e nr e p o r t ．I no u rs t u d y , N e s t e dP C Rw a su s e df o rd e t e c t i n gF o n s e c a e ai nt h ep a r a f f i nw a xe m b e d d e dt i s s u e s ．F o re v a l u a t i o nt h ev a l u eo ft h i sd i a g n o s t i cm e t h o df o rC B M ，w a xe m b e d d e dt i s s u e so fs p o r o t r i c h o s i sa n dp e n i c i l l i p o s i sm a m e f f e i ( P S M )w e r ea l s od e t e c t e db yN e s t e dP C Ra c c o r d i n gt op r e v i o u s1 R e r a t u r e s ．O b j e c t i v e ：1 ．E x t r a c tF o n s c a e aD N Af o rP C Rf r o mp a r a f f i nw a xe m b e d d e dt i s s u e s ．2 ．E v a l u a t et h es e n s i t i v i t yo fS i n g l e - P C Ra n dN e s t e dP C Rf o rd e t e c t i n gt h eF o n s e c a e aD N A ．3 ．C o m p a r et h ee f f e c t i v i t i e sb e t w e e nP a t h o l o g i c a le x a m i n a t i o。