预处理 聚酰胺柱子.docx

新买的聚酰胺取聚酰胺以 90-95%乙醇浸泡，不断搅拌，除去气泡后装入柱中用 3-4 倍体积的 90-95%乙醇洗脱，洗至洗脱液透明并在蒸干后无残渣（或极少残渣）再依次用 2-2.5 倍体积 5%NaOH 水溶液、1 倍体积的蒸馏水、2-2.5 倍体积的 10%醋酸水溶液洗脱，最后用蒸馏水洗脱至 pH 中性，备用1、装柱：一般将颗粒状聚酰胺混悬于水中，使其充分膨胀，然后装柱，让聚酰胺自由沉降；当用非极性溶剂系统时候，则用组分中低级性的溶剂装柱2、稀释适当浓度上样：一般每 100ml 聚酰胺上样 1.5-2.5g，样品先用洗脱溶剂溶解，浓度为 20%-30%水溶性化合物直接上样；若提取物水溶性不好，则用挥发性有机溶媒溶解、拌适量聚酰胺、挥干或减压蒸干、干法装入柱顶3、水洗：先用水洗脱4、醇洗：在水中递增乙醇浓度至浓乙醇溶液，或氯仿、氯仿-甲醇，递增甲醇至纯甲醇洗脱若仍有物质未被洗脱，可用稀氨水或稀甲酰胺溶液洗脱，分段收集5、找到最佳吸附比：先小量试验找到最佳吸附比6、放大：根据小试及最佳吸附比进行放大试验7、聚酰胺的回收：使用过的聚酰胺一般用 5%氢氧化钠溶液洗涤，然后水洗，再用 10%醋酸液洗，然后用蒸馏水洗至中性，即可。

聚酰胺柱层析的不足：比如机械强度不大，粒度不均匀，分离时流速较慢一些小分子杂质混入的问题 采用的解决方案有：1.装柱前先过筛2.装柱时用 5%甲醇或 10%盐酸预先除去小分子杂质3.与硅藻土混合制粒以增加机械强度anyluk (站内联系 TA)很简单：找一根中等大小的柱子，对于装多样聚酰胺，不必拘泥于课本教材上说的那么严格，大概有 40 厘米长或者 30 厘米长内径大于 5 厘米小于 10 厘米的柱子，拿聚酰胺袋直接装就是了，边装边用洗耳球在柱顶敲打，以便装实，看装的差不多了，在把你所拌的样品装上，离磨口有 2-3 厘米即可，放一层棉花，套上即可然后用水洗 2-3 个体积，各部位都可洗脱 3-4 个柱体积，即可如果洗不干净，多洗几个柱体积，随机变化下来就是 10%或者 30%，40% 50% ，70%90%，乙醇水梯度洗脱，至于如何选梯度，自己决定，，收集各部分，浓缩即可。