AriaII操作手册-分选2022年.doc

FACSAriaⅡ中文操作手册FACSAriaⅡ流式细胞仪一、开机预备〔一〕预备液路1. 将流式细胞仪的上盖翻开；2. 开启计算机，等待全部程序载入3. 开主机电源 Mainpower〔右图〕，从电脑桌面上双击翻开 FACSDiva 软件，输入密码 BDIS翻开激光开关 laser power〔依据试验需要进展选择〕；开启试验所需激光器电源4. 确认液流车中各种液体的液面水平〔鞘液、废液、去离子水、漂白剂、乙醇〕，倒空废液或加满其 他液体〔以下图〕5. 从软件的 Cytometer 菜单上选择 Fluidic Startup(射流启动)，点击 OK 确认1将消灭如下窗口：FACSAriaⅡ中文操作手册6. 将液路和气路管道从酒精桶断开，连接到鞘液桶；完成后点 Done；7. 将 Closed-loop 喷嘴〔闭环喷嘴〕插入流淌室；完成后点 Done；会消灭右侧窗口，提示液流开启进展中；8. 到达 100%，移去 Closed-loop 喷嘴，完成后点 Done；9. 依据试验要求，插入直径适宜的喷嘴〔喷嘴直径应当是分选颗粒直径的3-6 倍〕；10. 然后点 OK，完成整个过程；2FACSAriaⅡ中文操作手册11. 从菜单上选择 Sort(分类)>sort setup,确认 setup 模式与喷嘴大小匹配。

〔二〕开液流1. 翻开液流窗口的液流；¨ 点击软件界面上〔如以下图〕的按钮翻开分选液流窗口〔如以下图〕¨ 点击分选液流窗口的按钮3(stream 的前面按钮)，开启液流FACSAriaⅡ中文操作手册2. 翻开分选仓前的门，检查液流液流应为一条细线落入废液槽正中(可通过调整红色标志的键)；〔假设液流不稳，检查流淌室中是否有气泡，将液流关闭，10 秒钟后再开，排解气泡〕3. 关上分选仓前的门〔三〕设定液流断点1. 调整液流震幅〔Ampl〕，使断滴位于窗口上方 1/3 处〔Ampl 不要超过 70，假设超过，检查流淌室是否有气泡；确认鞘液压力和震惊频率是否适宜〕；2. 确认卫星液滴与大液滴融合，应当在断滴的 6 滴之内融合〔红色箭头数起，左图的左侧合格，右侧不合格〕，假设没有融合，重安装喷嘴4二、建立试验模板FACSAriaⅡ中文操作手册1. 在软件界面左侧 Browser 面板下，依次点击 New Folder、Experiment、Specimen〔均可重命名〕，单击 Specimen 左侧“+”符号，显示下方的Tube，点击左侧灰色指示箭头，使之变成绿色〔当前指示〕2. 在软件〔 〕Cytometer 面板上，点击 Parameters 选项卡，选择试验所需荧光通道〔按 Ctrl 键可多项选择〕，并删除多余通道。

选择荧光素名称、信号放大类型〔log/lin〕、信号脉冲类型〔H/A/W〕，5FACSAriaⅡ中文操作手册3. 在( )右侧 worksheet 页面中，画出试验所需模板(斜箭头)：首先画出点图〔双参数：FSC-A 和 SSC-A〕，依据阴性比照〔未染色的细胞〕圈出细胞群 P1；其次画出点图〔双参数：荧光名称〕，利用鼠标右键 Show Populations 选项，选择P1，建立图之间的联系(如以下图)4. 至此，一个简洁的试验模板根本建成现在可以将样本管放在上样台上， 点击上样面板的 load，此时 Acquire Data 自动被激活或手动点击采集把握面板上的 Acqire data 按钮，仪器开头猎取样本数据6FACSAriaⅡ中文操作手册5. 依据试验状况调整 Cytometer 面板中各通道电压，使 FSC/SSC 中信号位于利于观看的位置〔细胞群落在中心位置〕调整阈值〔Threshold〕，去除碎片和噪音信号调整上样速度〔Flow Rate〕〔最大为 10〕7FACSAriaⅡ中文操作手册6. 在 FSC/SSC 中调整门的位置、大小和外形，使之圈住感兴趣细胞群调整荧光通道的电压，使荧光信号位于适宜的位置。

7. 在鼠标右键中翻开数据显示，观看试验的实时结果8. 试验条件调整完毕后，在上样面板中设置 Events To Record 等参数，点击 Record Data，开头保存数据8FACSAriaⅡ中文操作手册〔三〕液流关机预备关机 1．关激激光电源；2．从上样架上移去上样管； 3．关闭液流(stream 的前面按钮)； 4．倒空废液桶；5．加满酒精桶关机1. 从菜单上选择 Cytometer>fluidics shutdown〔关闭〕，会弹出下面窗口2. 从流淌室上移去喷嘴；完成后点 Done3．插入 Closed-loop 喷嘴，完成后点 Done4. 将鞘液桶的液流管和气管分别连接到酒精桶上，点 Done9FACSAriaⅡ中文操作手册从今处断开连接液 流 气管 管酒精桶 鞘液桶 酒精桶 鞘液桶正常运行时 液路关机时5. 依据提示，放上一管 3ml 清洗液，完成后点 Done；6. 清洗完成后，按提示，点 OK7. 关闭流式细胞仪主机电源；8. 退出软件，关计算机清洗外部用软布沾次氯酸钠和蒸馏水清洗分选仓、偏转板、上样架、分选收集架，进展消毒和避开形成盐结晶10每日关机和日常维护FACSAriaⅡ中文操作手册〔一〕日常关机1．关闭液流2. 取下喷嘴，装上 Closed Loop Nozzle。

3. 从菜单上选择 Cytometer> > Cleaning Modes > Clean Flow Cell，会弹出右侧窗口： 放一管无菌水在上样台上 4．完成后，按要求点击 OK；5. 用超纯水清洗 Closed Loop Nozzle6．关闭流式细胞仪主机电源；7. 退出 FACSDiva 软件，关电脑11FACSDiva 软件介绍DIVA 软件界面如下：在①工具栏中，可以显示或隐蔽某个工作窗口1、工作界面工具栏FACSAriaⅡ中文操作手册保存〔Save〕-保存试验模板及数据直接退出软件时，软件将自动保存已建立的试验模板和已猎取的试验数据扫瞄器〔Browser〕-点击可显示或隐蔽扫瞄器窗口多孔板〔Plate〕-显示或隐蔽多孔板试验窗口仪器设置〔Cytometer〕-显示或隐蔽仪器设置窗口属性〔Inspector〕-显示或隐蔽属性窗口12FACSAriaⅡ中文操作手册工作表〔Worksheet〕-显示或隐蔽工作表窗口猎取把握器〔Acquisition Controls〕-显示或隐蔽猎取面板生物指数编辑器〔Biexponential Editor〕-显示或隐蔽生物指数编辑器分选设置〔Sorting〕-显示或隐蔽分选设置2、各窗口介绍2.1 扫瞄器〔Browser〕扫瞄器是创立试验模板和治理试验数据的窗口。

如图：窗口第一栏的扫瞄器工具栏〔Browser toolbar〕中包含了扫瞄器的全部构建模块，点击某个图标即可建立对应的工程从左至右分别是：文件夹〔Folders〕、试验〔Experiments〕 、样本〔Specimens〕 、样本管〔Tubes〕、 样本/ 样本管特异仪器设置〔 Specimen/Tube-specific cytometer settings〕 、分选版面〔Sort layout〕 、总工作表〔Global Worksheet〕、多孔板〔Plate〕 各建的工程均可用鼠标右键菜单重命名2.2 仪器设置窗口〔Cytometer〕13FACSAriaⅡ中文操作手册仪器设置窗口是调整各通道电压、选择信号放大类型、脉冲类型、荧光补偿、阈值、激光延迟的界面2.3 属性窗口〔Inspector〕当鼠标焦点位于某个窗口或图像、数据框时，属性窗口内显示该焦点的相关设置2.4 猎取面板〔Acquisition DashBoard〕在猎取面板中，用户可以把握仪器上样、猎取数据、设置停顿门、设置保存细胞数量14FACSAriaⅡ中文操作手册2.5 分选设置窗口〔Sorting〕分选窗口包括两局部：侧液流窗和断点液流窗► 侧液流窗中可以把握电压开关、测试液流、滤光片、废液抽屉、调整侧液流角度、液流聚焦、调整液滴延迟。

► 断点液流窗可以开、关液流，开启断点监视〔Sweet Spot〕、调整振幅〔Ampl〕、震荡频率〔Freq〕、设置 Drop1 和 Gap值2.6 工作表窗口〔Worksheet〕在工作表窗口中，用户可以创立试验模板，包括直方图、散点图的绘制、各种门的创立以及进展数据分析15FACSAriaⅡ中文操作手册试验模板建立常见问题问题 1：在选择通道参数时，待选项中没有自己要选的荧光名称1. 翻开 Cytometer 菜单下的 View Configurations〔视图设置〕选项。