实验一双向免疫扩散试验.doc

实验一-双向免疫扩散试验实验一 双向免疫扩散试验一、实验目的1、娴熟掌握免疫扩散法的操作步骤2、掌握抗血清效价的测定和特异性抗体的剖析技术二、实验原理在必定条件下，抗原能与相应的抗体互相作用，发生免疫积淀反响免疫扩散法就是使抗原与抗体在琼脂糖凝胶中自由扩散而相遇， 进而形成抗原抗体复合物， 因为此复合物分子量增大并产生齐集，不再持续扩散而形成肉眼可见的带状或线状积淀带抗原抗体复合物的积淀带是一种特异性的半浸透性屏障，它能够阻挡免疫学性质与其相像的抗原抗体分子通过，而同意那些性质不相像的分子持续扩散，这样由不一样抗原或不一样抗体所形成的积淀带各有各的地点，进而能够分别和判定混淆系统利用琼脂糖凝胶作为扩散介质是因为必定浓度的琼脂糖凝胶，其内部为多孔网状并且孔径很大，能够同意大分子物质 （分子量自十几万到几百万以上） 自由经过因为大部分抗原和抗体的分子量都在 20万以上，所以它们在琼脂糖凝胶中几乎能够自由扩散并且琼脂糖凝胶又拥有优秀的化学稳固性、含水量大、透明度好、根源方便、办理简单等长处，所以是免疫积淀检测技术中最理想的扩散介质双向免疫扩散法测准时将加热熔解的琼脂或琼脂糖浇至玻片上，等琼脂凝结后，打多个小孔，将抗原和抗体分别加入小孔内， 使抗原和抗体在琼脂板上互相扩散。

当二个扩散圈相遇，如抗原和抗体呈特异性的联合且比率适合时， 将会形成抗原抗体复合物的积淀， 该积淀可在琼脂中体现一条不透明的白色积淀线 假如抗原与抗体没关， 就不会出现积淀线， 所以能够经过该试验，用特异性抗体判定抗原，或反之用已知抗原判定抗体三、实验仪器和试剂1、仪器设备载玻片、打孔器和挑针、湿盒、恒温箱、三角瓶、移液管、微量移液器2、试剂和资料（ 1）生理盐水（ 2）1.2%琼脂胶：称取1.2g琼脂糖，加100mL生理盐水，加热溶解（3）抗原及相应免疫血清：抗原为人 IgG，抗体为羊抗人 IgG免疫血清四、实验步骤1、制备琼脂玻片：将已加热熔解的 1.2%琼脂5mL，快速倾入干净干燥的载玻片上，室温自然冷却凝结2、打孔：在凝结的琼脂糖胶上用打孔器或吸嘴按图 1打梅花孔（孔径约3mm，孔距4mm），用针/头当心挑去琼脂为便于辨别加样方向或划分不一样的组， 可在琼脂糖胶边沿打上小孔或切角标志打孔完成，将载玻片在酒精灯火焰上方过几遍，可防备漏液3、稀释免疫血清：取 5支0.5mL的离心管，各加入 10μL生理盐水如图 2所示，取10μL免疫血清加入 1号管中，吸打使其与生理盐水混匀， 即为1︰2稀释血清；再从1号管汲取1︰2稀释血清10μL加入2号管中，吸打混匀，即为1︰4稀释血清；重复操作，获取1︰8、1︰16和1︰32倍比稀释血清。

图2倍比稀释免疫血清4、加样：以上方孔为第 1孔，按顺时针方向分别称为 2、3、4、5和6孔抗原加入中心孔，倍比稀释的免疫血清加入四周孔，留 1孔加生理盐水，以作空白比较，每孔加样10μL5、温育：将琼脂糖胶置于湿盒（饭盒垫上纱布， 加蒸馏水湿润）中， 37℃温育12-24h6、结果察看：察看抗原抗体产生的白色积淀线免疫血清的滴度以必定抗原浓度下出现白色积淀线的最高稀释度来表示五、注意事项1、制备琼脂玻片刻，用移液管向玻片加上琼脂时，要一次性快速达成，防备形成气泡或在移液管中凝结，影响操作或结果2、打孔时，其余六个孔要尽量围着中间孔呈圆形平均散布2、注意记录琼脂糖胶的标志和加样次序六、结果剖析试验结果如右图所示:从图中我们能够看到一条白色积淀线，说明以人 IgG与羊抗人IgG免疫血清相关，在琼脂糖凝胶中自由扩散而相遇，进而形成抗原抗体复合物而这条线沿着各孔边沿曲折，且随着血清浓度从第一孔到第五孔递减，第六孔为生理盐水，其颜色从第一孔到第五孔渐渐变浅，到第六孔消逝这切合试验原理，证明试验操作成功七、问题议论1、为何将载玻片在酒精灯火焰上方过几遍，可防备漏液？答：因为加温能够使琼脂溶解， 关闭住打孔可能产生的渺小裂缝， 免得试剂随裂缝漏出影响实验结果判断物业安保培训方案为规范保安工作，使保安工作系统化 /规范化,最后使保安具备知足工作需要的知识和技术，特拟订本教课教材纲领。

一、课程设置及内容 所有课程分为专业理论知识和技术训练两大科目此中专业理论知识内容包含：保安理论知识、消防业务知识 、职业道德、法律知识、保安礼仪、救护知识作技术训练内容包含：岗位操作引导、勤务技术、消防技术、军事技术二．培训的及要求培训目的1）保安人员培训应以保安理论知识、消防知识、法律知识教课为主，在教课过程中，应要修业员全面熟知保安理论知识及消防专业知识，在工作中的操作与运用，并基本掌握现场保护及办理知识 2）职业道德课程的教课应依据不一样的岗位元而予以不一样的内容，使保何在各自不一样的工作岗位上都能养成拥有本职业特色的优秀职业道德和行为规范）法律知识教课是理论课的主要内容之一，要求所有保安都应熟知国家相关法律、法例，成为懂法、知法、守纪的公民，运用法律这一有力武器与违纪犯法分子作斗争工作进口门卫保卫，定点保卫及地区巡逻为主要内容，在平时管理和发生突发事件时能够运用所学的技术保护企业财富以及自己安全2、培训要求1）保安理论培训经过培训使保安熟知保安工作性质、地位、任务、及工作职责权限，同时全面掌握保安专业知识以及在详细工作中应注意的事项及一般状况处理的原则和方法2）消防知识及消防器械的使用经过培训使保安熟知掌握消防工作的目标任务和意义，熟知各样防火的举措和消防器械设备的操作及使用方法，做到防患于未燃，保护企业财富和职工生命财富的安全。

3) 法律知识及职业道德教育经过法律知识及职业道德教育，使保安建立法律意识和优秀的职业道德观点，能够运用法律知识正确办理工作中发生的各样问题；加强保安人员敬业爱岗、无私奉献更好的为企业服务的精神4) 工作技术培训。