南农传染病实习报告范本.doc

实习报告学院:动物医学院课 程:传染病学实习班级:动医09X班学号: 1XX09XXX 姓 名:大猪妖指导教师:王先炜职称:副教授实习时间20XX5月27日至 20XX6月1日实习地点逸夫楼401720XX6月9日XX农业大学教务处制实习报告一、实习目的1. 以副猪嗜血杆菌病和蓝耳病为模型,学习传染病的临床诊断、猪体剖检的方法,结合病理变化,对患病猪进行初步诊断；2. 通过对感染猪体内病毒和细菌的分离鉴定,学习掌握细菌性猪病、病毒性猪病的实验室诊断方法3. 掌握畜禽传染病的临床诊断技术4. 掌握畜禽传染病实验室诊断方案的设计、诊断试剂的准备和检测结果分析判定5. 掌握畜禽细菌与病毒混合感染的病原分离与鉴定技术6. 掌握细菌药敏试验指导畜禽临床用药二、 实习安排时间地点内容周一5月27日白天逸夫楼4017诊断试剂的配制；器皿的准备以及灭菌的处理周二5月28日白天逸夫楼4017病猪的临床诊断；病料的采取与处理；细菌的涂片检查与分离培养周三5月29日白天逸夫楼4017病毒的分离接种〔病料过滤和接种细胞；分离细菌镜检和增殖周四5月30日晚上逸夫楼4017细菌的生化试验、药敏试验和细菌鉴定；观察接种细胞周五5月31日江浦农场参观学习周六6月1 日下午逸夫楼4017病毒细胞病变观察、菌落鉴定三、 实习内容第一天：王先炜老师讲解本周传染病学实习的主要内容,传染病临床诊断的主要方法,实验器材的准备,实习过程中的注意事项以及实习分组安排,将第一大组所有同学再分为三大组, 9小组。

准备实验器材,配制试剂观察动物发病情况检测病毒检测细菌病料匀浆反复冻融平板划线分离、肉汤接种细胞接种纯培养药敏实验生化试验病毒的初步鉴定细胞病变观察实验准备〔一灭菌消毒用品：手术刀片、手术刀柄、剪刀、大镊子、小镊子、剪刀、黄色枪头一盒、用锡箔纸包好小滤器〔一组3至5个、玻璃匀浆器、1.5mL离心管、PCR管〔二其他用品：解剖盘、酒精灯、酒精棉球、解剖刀、记号笔、注射器、染色缸、乳胶手套、接种环、载玻片、细菌涂布棒、倒置显微镜等三） 试剂及配制1. TSA平板：每个组2—3块,全部9组一起配,按10组量配置,高压后然后分装 每块TSA平板的成分：TSA 2g去离子水 50mL121℃,15-20min,冷却至50℃左右,加入1.25mL的小牛血清,0.625mLNAD2. TSB液体培养基成分：全部小组依旧一起配制,高压后然后分装, 每管液体培养基的成分：蛋白胨 0.04g蛋白示 0.04g酵母提取物 0.05gTSB 0.25g去离子水 0.01L混匀后可分装小试管内〔每管3mL 121℃,15-20min用之前每只试管加1μL血清,1μLNAD血清：用前要灭能〔56℃, 40min3. 生理盐水：0.45g NaCI 加入50mL去离子水,然后高压灭菌4. 细胞维持液：在50ml的DMEM液中加入1ml的血清和1ml的双抗〔青、 链霉素；〔四 倒TSA平板将TSA溶液高压后冷却至60℃左右,加入1.25mL的小牛血清,0.625mLNAD。

然后将平板边沿用酒精灯外焰烧一下后,将TSA倒入平板中,铺满标记好班级,组号,名称和时间第二天：猪体剖解、细菌学检查和病毒学检查病料取样王老师给每一大组安排了一位研究生给我们及时的指导〔一外部检查观察被毛和营养状况,检查四肢、眼结膜的颜色、皮肤等有无异常,下颌淋巴结是否有肿胀现象,肛门附近有无粪便污染等触诊：下颌淋巴结,腹股沟淋巴结,髂下淋巴结（二） 宰杀,固定和剖腹检查1. 宰杀：劲动脉放血致死因为猪对麻醉药不敏感,故不使用麻药,直接放血致死2. 固定：猪体取背卧位,先切断肩胛骨内侧和髋关节周围的肌肉〔以部分皮肤与躯体相连,将四肢向外摊开,以保持尸体仰卧位置3. 腹腔剖开从剑状软骨后方沿腹壁正中线由前向后至耻骨联合切开腹壁,再从剑状软骨沿左右两侧肋骨后缘切开至腰椎横突将其向两侧分开,腹腔脏器即可全部露出按照脾、肠、胃、肾的次序检查,并逐一取出腹腔脏器,观察脏器有无病变4. 胸腔剖开：打开胸腔后先看心包膜有无粘连、是否有纤维状物渗出,看左右肺的大小、质地、颜色等5. 注意事项：a) 剖检过程中要注意个人防护,剖检人员必须带手套,防止手划伤感染b) 如病猪已经死亡,要及时进行尸体剖检c) 剖检中要做记录,将每项检查的各种异常现象详细记录下来,以便根据异常现象做出初步诊断。

〔三部分细菌学实验和病毒学病料处理1． 细菌的分离培养：取病猪肺脏〔冰冻组织需充分解冻,用酒精棉球点燃消毒肺脏表面,无菌手术刀切口,将接种环伸入于肺脏肺泡内,无菌划线接种TSA平板具体操作如下：a) 右手执笔式持接种环,在酒精灯火焰上灼烧接种环,待冷；b) 左手抓紧琼脂培养基平皿,用手掌将平皿的底固定,用手指将平皿的盖略抬起一些,进行接种或者,将平皿盖放在试验台上,尽量直立平皿靠近酒精灯火焰；c) 右手接种环在琼脂的一端涂布,划线时,接种环与琼脂表面是30°-40°的角度轻轻接触,利用腕力动作,切忌划破琼脂表面；d) 接种完毕,盖好平皿盖,在平皿底玻璃上用记号笔注明接种时间,接种者等,然后将平皿的底朝上,放置在37°温箱内培养24-48小时〔培养后可出现多种菌落,注意区分不同培养时间点不同类型菌类形态2．组织触片和染色观察：a) 触片：取一小块肺脏组织,在洁净的载玻片上轻轻地作2～3 个压迹,制成触片；b) 干燥：将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精灯上高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯而变形；c) 固定：在酒精灯处快速的来回通过2-3秒钟,并不时以载玻片背面接触皮肤,不觉过烫为宜〔不超过60℃,放置待冷后,进行染色；d) 初染：在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴,使染色液覆盖涂片,染色约1min；e) 水洗：用洗瓶中自来水冲洗,直至洗下的水呈无色为止；f) 媒染：用100-1000μL移液枪吸取约300μL碘液滴在涂片薄膜上,使染色液覆盖涂片,染色约1min；g) 水洗：用洗瓶中自来水冲洗,直至洗下的水呈无色为止； h) 脱色：斜置载玻片,滴加95%乙醇脱色,至流出的乙醇不现紫色为止,大约需时20-30S,随即水洗；i) 复染：滴加沙黄染液1-2滴,使染色液覆盖触片约1min；j) 水洗：斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止；k) 干燥、观察：用吸水纸吸掉水滴,待标本片干后置显微镜下,用低倍镜观察,发现目的物后滴一滴浸油在玻片上,用油镜观察细菌的形态及颜色,紫色的是革兰氏阳性菌,红色的是革兰氏阴性菌。

3．病毒学病料处理a> 临床上各种疾病的症状非常相似,而且极易发生混合感染,因此确诊需 依赖于实验室的诊断病毒性疾病的实验室检验的大致程序如下：临床标本→分离培养→初步鉴定→最后鉴定b> 用剪刀剪取病变明显的肺脏部位,置于小青瓶或平皿中,用小剪刀剪成大小约1mm3的碎块,然后加入等量灭菌生理盐水或PBS,置于玻璃匀浆器中进行匀浆,组织匀浆液倒入小青瓶中,置于-20℃冰箱冻存备用c> 王老师帮助我们反复冻融三次<四> 实验结果1. 剖解记录表格时间：2013-5-28地点：逸夫楼4017组号： 第五组品种： 乳猪性别：公年龄： 不详外部检查体表被毛粗乱,体形消瘦；可站立,眼结膜颜色正常；腰臀皮肤可见芝麻到绿豆大的红点,肛门附近无粪便污染状况,耳朵、胸、腹、背、四肢：全身有不同体积的瘀血斑,可视粘膜发绀,关节有轻微肿胀,站立姿势不稳,肛门周围有少量粪便污染触诊下颌淋巴结肿胀,发红,颜色不均,质地较硬,有结节状结构腹股沟淋巴结肿胀,横切断面也有出血点,肺门淋巴结肿胀,腹股沟淋巴结肿胀,发红,颜色不均,质地较硬,表面凹凸不平呈结节状变化类似,髂下淋巴结,肿胀明显,表面更不平整脏器剖检胸腔肺脏有淡红色轻度肉质病变,但不肿胀,表面不光泽,不平整。

心脏无明显病变,肝正常肺门淋巴结颜色变红,有肿胀变化和结节状结构腹腔各个肠断和肝组织基本正常,脾呈紫黑色,边缘卷褶皱,有萎缩,光泽低,表面不是特别平整肾表面有点状出血点,被膜松软,光泽低, 2. 镜检结果可能由于细菌含量较低,所以只能看见肺组织细胞,未能见到副猪嗜血杆菌,后来对于副猪嗜血杆菌的阳性培养液进行涂片镜检观察,可以见到红色的细短杆菌肺组织细胞猪肺组织涂片镜检〔X40副猪嗜血杆菌阳性副猪嗜血杆菌涂片镜检〔X40第三天：病毒的分离接种〔病料过滤和接种细胞；分离细菌镜检和增殖〔一细菌菌落观察,并且挑取单个菌落到TSB液体培养基中具体步骤：在接菌之前,加入100μL辅酶A和100μL小牛血清,挑取疑似菌落〔HPS为无色或淡灰色,半透明小菌落接到TSB培养基中,放到摇床,37℃培养24h明天观察二） 病毒部分：1. 病料的无菌处理a> 将保存的组织悬液反复冻融三次后加入EP管中,12000rpm离心15min,取上清b> 将灭菌的小滤器置于无菌的小青瓶上,用注射器吸取离心后的上清,将注射器与滤器相接,用力压注射器活塞,使上清通过滤器,滤液即为无菌的含有病毒的组织上清,置于-20℃冰箱冻存备用或接种细胞。

2． 细胞接种a) 镜检观察待细胞板上细胞铺满单层,弃去细胞板中的营养液；b) 在细胞板中加入过滤后的组织上清液200μL,同时设定阴阳性对照c) 使其铺满细胞表面,置于37℃二氧化碳培养箱孵育半小时；d) 弃去组织滤液,在细胞中加入细胞维持液500μL,37°C二氧化碳培养箱培养,每天观察细胞生长情况和有无细胞病变〔三 结果1. 接种剖解猪的肺脏的病料的培养皿上没有长菌,长的也是污染的菌,因为菌落形态较大,白色2. 接种阳性病料的板子长了三个菌落,一个较大,可能是杂菌,另外两个较小,疑似副猪嗜血杆菌,所以就用这两个菌落接入TSB液体培养基中3. 另外一块板子上长得菌落稍大,并且在光下,45度角,可见蓝色荧光,所以也来接种鉴定一下4. 编号1的是阳性疑似副猪,编号2、3为疑似巴氏杆菌的培养,待明天上午观察结果第四天：细菌的生化试验、药敏试验和细菌鉴定以及观察接种细胞(一) 上午观察TSB培养基中细菌生长情况(二) 晚上观察病毒液接种的细胞,是否有细胞病变三) 细菌的药敏试验1. 用涂布棒将1号与3号细菌接种于TSA平板上,将各种抗菌药物圆纸片〔任选7种分别贴于培养基表面,各片距离要相等,37℃培养,培养24h检查。

2. 药敏试纸片种类：头孢噻肟、头孢曲松、阿米卡星、青霉素G、氨苄西林、头孢唑啉、诺氟沙星、环丙沙星、阿莫西林、阿奇霉素、庆大霉素、新霉素、氯霉素、红霉素、林可霉素、复方新诺明我们小组选择的是环丙霉素、红霉素、诺氟沙星、阿莫西林、林可霉素、复方新诺明、阿奇霉素。