第03章细胞生物学研究方法.ppt

第三章第三章 细胞生物学研究方法细胞生物学研究方法细胞生物学研究思路胞生物学研究思路进行初步观察进行初步观察形成可验证的假说形成可验证的假说设计对照试验设计对照试验收集资料收集资料解释结果解释结果作出合理结论作出合理结论查阅已查阅已有知识有知识Caenorhabditis elegansDrosophila melanogasterArabidopsis thaliana生物学研究模式生物生物学研究模式生物生物学研究模式生物生物学研究模式生物微生物细胞微生物细胞病毒病毒孟加拉斑马鱼孟加拉斑马鱼荧光斑马鱼荧光斑马鱼全身透明斑马鱼全身透明斑马鱼不同物种享有共同分子机制不同物种享有共同分子机制第三章第三章 细胞生物学研究方法细胞生物学研究方法  细胞形态结构的观察方法细胞形态结构的观察方法  细胞组分的分析方法细胞组分的分析方法  细胞培养、细胞工程与显微操作技术细胞培养、细胞工程与显微操作技术第一节第一节 细胞形态结构的观察方法细胞形态结构的观察方法  光学显微镜技术（光学显微镜技术（light microscopylight microscopy））  电子显微镜技术电子显微镜技术 (Electro microscopy)(Electro microscopy)  扫描探针显微镜（扫描探针显微镜（Scanning Probe MicroscopeScanning Probe Microscope）） 扫描隧道显微镜扫描隧道显微镜 (scanning tunneling microscope )(scanning tunneling microscope ) 一、光学显微镜技术（一、光学显微镜技术（light microscopylight microscopy) 普通复式光学显微镜技术普通复式光学显微镜技术 荧光显微镜技术荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy） 激光共焦扫描显微镜技术激光共焦扫描显微镜技术（Laser Confocal Microscopy） 相差显微镜相差显微镜（phase-contrast microscope） 微分干涉显微镜微分干涉显微镜（differential interference contrast microscope, DIC） 录像增差显微镜技术录像增差显微镜技术（（video-enhance microscopyvideo-enhance microscopy））普通复式光学普通复式光学显微微镜光镜样本制作光镜样本制作分辨率是指区分开分辨率是指区分开两个质点间的最小两个质点间的最小距离。

距离￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿荧光光显微微镜技技术（Fluorescence Microscopy）原理与应用原理与应用 直接荧光标记技术直接荧光标记技术 间接免疫荧光标记技术间接免疫荧光标记技术 在光镜水平用于特异蛋白质在光镜水平用于特异蛋白质 等生物大分子的定性定位：等生物大分子的定性定位： 如绿色荧光蛋白如绿色荧光蛋白(GFP)(GFP)的应用的应用 荧光显微镜技术原理荧光显微镜技术原理体视荧光显微镜体视荧光显微镜微管呈绿色、微丝红色、核蓝色 直接荧光标记技术直接荧光标记技术现代生物学的北斗星2008年度诺贝尔化学奖年度诺贝尔化学奖 授予美国科学家下村修、马丁-查尔菲，华裔化学家钱永健，他们因为发现和发展绿色荧光蛋白(GFP)而获奖的多种颜色荧光的大肠杆菌组成的“钱氏实验室”字样 ￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿激光激光共焦共焦扫描描显微微镜技技术（（Laser Scanning Confocal Microscopy））激光共焦扫描显微镜技术原理激光共焦扫描显微镜技术原理应用：应用： 1. 排除焦平面以外光的干扰，增强图像反差排除焦平面以外光的干扰，增强图像反差和提高分辨率和提高分辨率(1.4—1.7)，高品质的荧光成像，高品质的荧光成像; 2. 多维观察多维观察,重构样品的三维结构重构样品的三维结构; 3. 可进行一二三标记可进行一二三标记; 4. 动、静态观察；动、静态观察； 5. 定性与定量分析。

定性与定量分析 实￿￿例美国哈佛大学的吉恩·里维特(Jean Livet)使用共焦显微技术(confocal microscopy)，拍摄了一只基因工程小鼠的脑干组织切片(厚340μm)即“脑虹”技术，Brainbow)美国北卡罗来纳大学惠明顿分校的索尼娅·派奥特(Sonja Pyott)拍摄到了小鼠内耳毛细胞 .毛细胞为绿色，与毛毛细胞为绿色，与毛细胞有突触联系的细胞为红色，蓝色细胞有突触联系的细胞为红色，蓝色的则是细胞核的则是细胞核相差显微镜（相差显微镜（phase-contrast microscope））将光程差或相位差转换成振幅差，可用于观察活细胞将光程差或相位差转换成振幅差，可用于观察活细胞 微微分分干干涉涉显显微微镜镜（（differential-interference microscope））偏振光经合成后，使样品中厚度上的微小区别转化成偏振光经合成后，使样品中厚度上的微小区别转化成 明明暗暗区区别别，，增增加加了了样样品品反反差差且且具具有有立立体体感感适适于于研研究活细胞中较大的细胞器究活细胞中较大的细胞器A comparison of yeast cells that were growing on the vaginal epithelium seen with different types of LM.a)under bright-field;b)phase-contrast;c)DIC录像增差显微镜技术（录像增差显微镜技术（video-enhance microscopy）） 计算机辅助的计算机辅助的DIC显微镜可在高分辨率下研究活显微镜可在高分辨率下研究活细胞中的颗粒及细胞器的运动。

细胞中的颗粒及细胞器的运动二、二、 电子显微镜技术电子显微镜技术 电子显微镜的基本知识电子显微镜的基本知识电镜与光镜的比较电镜与光镜的比较电镜与光镜光路图比较电镜与光镜光路图比较电子显微镜的基本构造电子显微镜的基本构造 主要电镜制样技术主要电镜制样技术负染色技术负染色技术冰冻蚀刻技术冰冻蚀刻技术超薄切片技术超薄切片技术电镜三维重构技术电镜三维重构技术 扫描电镜扫描电镜（Scanning electron microscope，SEM） SPM(Scanning probe microscope)电镜与光与光镜的比的比较 显微镜分辨本领光源透镜真空成像原理LMTEM200nm100nm0.1nm可见光（400-700） 紫外光（约200nm)电子束（0.01-0.9）玻璃透镜玻璃透镜电磁透镜不要求真空不要求真空要求真空1.33x10-5～1.33x10-3Pa利用样品对光的吸收形成明暗反差和颜色变化利用样品对电子的散射和透射形成明暗反差电镜与光与光镜光路光路图比比较电子子显微微镜的基本构造的基本构造主要主要电镜制制样技技术 超薄切片技术超薄切片技术 用于电镜观察的样本制备用于电镜观察的样本制备示意图示意图 负染色技术负染色技术（（Negative staining）与）与金属投影金属投影 染色背景，衬托出样品的精细结构染色背景，衬托出样品的精细结构冰冻蚀刻技术（冰冻蚀刻技术（Freeze etching）） （（技术示意图技术示意图）） 冰冰冻冻断断裂裂与与蚀蚀刻刻复复型型：：主主要要用用来来观观察察膜膜断断裂裂面面的的蛋蛋白白质质颗颗粒粒 和膜表面结构。

和膜表面结构 快速冷冻快速冷冻深度蚀刻技术深度蚀刻技术（（quick freeze deep etchingquick freeze deep etching））电镜三维重构技术电镜三维重构技术电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合而形成的电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合而形成的 具有重要应用前景的一门新技术具有重要应用前景的一门新技术电镜三维重构技术与电镜三维重构技术与X-X-射线晶体衍射技术及核磁共振射线晶体衍射技术及核磁共振 分析技术相结合，是当前结构生物学分析技术相结合，是当前结构生物学（（Structural BiologyStructural Biology）） ——主要研究生物大分子空间结构及其相互关系的主要实验手段主要研究生物大分子空间结构及其相互关系的主要实验手段 Examples of negtively stained and metal-shadowed specimens.Electron micrographs of a tobacco rattle virus after negtive staining with potassium phosphotungstate(a) or shadow casting with chromium(b).扫描描电镜原理与应用原理与应用：：电电子子“探探针针”扫扫描描，，激激发发样样品品表表面面放放出出二二次次电电子子，，探测器收集二次电子成象。

探测器收集二次电子成象 CO 2临界点干燥法防止引起样品变形的表面张临界点干燥法防止引起样品变形的表面张 力问题力问题扫扫描描电电镜镜外外观观三、三、 扫描隧道显微镜扫描隧道显微镜Scanning Probe Microscope,SPM (80年代发展起来的检测样品微观结构的仪器年代发展起来的检测样品微观结构的仪器) 包括：包括：STMSTM、、AFMAFM、磁力显微镜、摩擦力显微镜等、磁力显微镜、摩擦力显微镜等原理原理：扫描探针与样品接触或达到很近距离时，即产生彼此间相互作用力，如：扫描探针与样品接触或达到很近距离时，即产生彼此间相互作用力，如 量子力学中的隧道效应（隧道电流）、原子间作用力、磁力、摩擦力等，量子力学中的隧道效应（隧道电流）、原子间作用力、磁力、摩擦力等， 并在计算机显示出来，从而反映出样品表面形貌信息、电特性或磁特性等并在计算机显示出来，从而反映出样品表面形貌信息、电特性或磁特性等 装装置置：：扫扫描描的的压压电电陶陶瓷瓷，，逼逼近近装装置置，，电电子子学学反反馈馈控控制制系系统统和和数数据据采采集集、、处处理理、、显显示示系统。

系统特点：特点：（（1 1）可对晶体或非晶体成像，无需复杂计算，且分辨本领高可对晶体或非晶体成像，无需复杂计算，且分辨本领高 （侧分辨率为（侧分辨率为0.10.1～～0.2nm0.2nm，纵分辨率可达，纵分辨率可达0.01nm0.01nm）；）；（（2 2）可实时得到样品表面三维图象，可测量厚度信息；）可实时得到样品表面三维图象，可测量厚度信息； （（3 3）可在真空、大气、液体等多种条件下工作；非破坏性测量可在真空、大气、液体等多种条件下工作；非破坏性测量4 4）可连续成像，进行动态观察）可连续成像，进行动态观察用途：纳米生物学研究领域中的重要工具用途：纳米生物学研究领域中的重要工具, ,在原子水平上揭示样本表面的结构在原子水平上揭示样本表面的结构 透透射射电镜外外观 透射透射电镜下的下的细胞胞活活细细胞胞工工作作站站可可实实现现在在细细胞胞水水平平上上的的定定性性和和定定量量分分析析、、活活细细胞胞图图像像处处理理、、活活细细胞胞动动态态示示踪踪在在分分子子水水平平，，可可做做到到基基因因定定位位定定量量表表达达的的动动态态分分析析、、蛋蛋白白质质合合成成降降解解运运输输和和相相互互作作用用的的动动态态研研究究、、细细胞胞骨骨架架的的代代谢谢动动力力学学测测定定和和细细胞胞周周期期各各时时相相的的动动态观察等。

态观察等现现在在市市场场上上使使用用的的活活细细胞胞工工作作站站由由高高级级自自动动倒倒置置显显微微镜镜、、活活细细胞胞长长时时间间孵孵育育系系统统、、Z Z轴轴微微光光切切系系统统（（数数码码共共聚聚焦焦系系统统））、、单单色色仪仪、、高高灵灵敏敏冷冷CCDCCD、、图图像像软软件件工工作作站站组组成成还还需需要要加加热热控控制制器器；；温温度度控控制制器器；；CO2CO2控控制制器器；；CO2CO2培培养养箱箱用用于于培培养养状状态态下下细细胞胞动动态态的的研研究究仪仪器器可可以以自自动动聚聚焦焦、、单单细细胞胞追追踪踪、、多多位位点点成像成像速度高、图像清晰度高成像速度高、图像清晰度高四、活细胞工作站四、活细胞工作站用途：1、活细胞荧光标记蛋白的长时程失踪观察2、活细胞运动分化形态示踪观察3、荧光共定位4、荧光共振能量转移（FRET）5、荧光图像处理、测量第二节第二节 细胞组分的分析方法细胞组分的分析方法  离心分离技术离心分离技术  细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法细胞内核酸、蛋白质、酶、糖与脂类等的显示方法  特异蛋白抗原的定位与定性特异蛋白抗原的定位与定性  细胞内特异核酸的定位与定性细胞内特异核酸的定位与定性  放射自显影技术放射自显影技术  定量细胞化学分析技术定量细胞化学分析技术一、一、 离心分离技术离心分离技术 用途：于分离细胞器与生物大分子及其复合物用途：于分离细胞器与生物大分子及其复合物 差速离心差速离心：分离密度不同的细胞组分：分离密度不同的细胞组分 密度梯度离心密度梯度离心：精细组分或生物大分子的分离：精细组分或生物大分子的分离差速离心差速离心 A 等速度沉降等速度沉降 B 等密度沉降等密度沉降 密度梯度离心密度梯度离心 二、二、 细胞内核酸、蛋白质、细胞内核酸、蛋白质、 酶、糖与脂类等的显示方法酶、糖与脂类等的显示方法原理原理：：利用一些显色剂与所检测物质中一些利用一些显色剂与所检测物质中一些 特殊基团特异性结合的特征，通过显特殊基团特异性结合的特征，通过显 色剂在细胞中的定位及颜色的深浅来色剂在细胞中的定位及颜色的深浅来 判断某种物质在细胞中的判断某种物质在细胞中的分布和含量分布和含量。

Feulgen Staining三、特异蛋白抗原的定位与定性三、特异蛋白抗原的定位与定性 免疫荧光技术免疫荧光技术：：快速、灵敏、有特异性，但其分辨率有限快速、灵敏、有特异性，但其分辨率有限 （（图图）） 蛋白电泳蛋白电泳(SDS-PAGE)(SDS-PAGE) 与免疫印迹反应与免疫印迹反应(Western-Blot)(Western-Blot) 免疫电镜技术免疫电镜技术：：免疫铁蛋白技术免疫铁蛋白技术免疫酶标技术免疫酶标技术免疫胶体金技术免疫胶体金技术 应应用用：：通通过过对对分分泌泌蛋蛋白白的的定定位位，，可可以以确确定定某某种种蛋蛋白白的的分分泌泌动动态态；；胞胞内内酶酶的的研研究究；；膜膜蛋蛋白白的的定定位位与与骨骨架架蛋蛋白白的的定位等定位等四、细胞内特异核酸的定位与定性四、细胞内特异核酸的定位与定性 光镜水平的原位杂交技术光镜水平的原位杂交技术 （同位素标记或荧光素标记的探针）（同位素标记或荧光素标记的探针） 电镜水平的原位杂交技术电镜水平的原位杂交技术 （生物素标记的探针与抗生物素抗体相连的胶体金标记结合）（生物素标记的探针与抗生物素抗体相连的胶体金标记结合）　　　　　　 PCR技术技术 人类染色体端粒人类染色体端粒DNA的荧光原位杂交照片的荧光原位杂交照片 五、放射自显影技术五、放射自显影技术原理及应用：原理及应用：利利用用同同位位素素的的放放射射自自显显影影，，对对细细胞胞内内生生物物大大分分子子进行定性、定位与半定量研究；进行定性、定位与半定量研究；实现对细胞内生物大分子进行动态研究和追踪。

实现对细胞内生物大分子进行动态研究和追踪步骤步骤：：前体物掺入细胞（标记：持续标记和脉冲标记）前体物掺入细胞（标记：持续标记和脉冲标记） ———放射自显影放射自显影六．定量细胞化学分析技术六．定量细胞化学分析技术 细胞显微分光光度术细胞显微分光光度术（（Microspectrophotometry））利用细胞内某些物质对特异光谱的吸收，测定这些物质利用细胞内某些物质对特异光谱的吸收，测定这些物质 （如核酸与蛋白质等）在细胞内的含量如核酸与蛋白质等）在细胞内的含量 包括：包括： 紫外光显微分光光度测定法紫外光显微分光光度测定法 可见光显微分光光度测定法可见光显微分光光度测定法 流式细胞仪流式细胞仪（（Flow Cytometry））主要应用主要应用：：用于定量测定细胞中的用于定量测定细胞中的DNADNA、、RNARNA或某一特异蛋白的含量；或某一特异蛋白的含量；测定细胞群体中不同时相细胞的数量；测定细胞群体中不同时相细胞的数量；从细胞群体中分离某些特异染色的细胞；从细胞群体中分离某些特异染色的细胞；分离分离DNADNA含量不同的中期染色体。

含量不同的中期染色体 流式细胞术流式细胞术 第三节第三节 细胞培养、细胞工程与细胞培养、细胞工程与显微操作技术显微操作技术 细胞的培养细胞的培养  细胞工程细胞工程 一、细胞的培养一、细胞的培养  动物细胞培养动物细胞培养 类型：原代培养细胞（类型：原代培养细胞（primary culture cellprimary culture cell）） 继代培养细胞（继代培养细胞（sub-culture cellsub-culture cell））  细胞系细胞系（（cell linecell line）） 有限细胞系，永生细胞系有限细胞系，永生细胞系  细胞株（细胞株（cell straincell strain）） 植物细胞植物细胞 类型类型： 原生质体培养原生质体培养 （体细胞培养）（体细胞培养） 单倍体细胞培养（花药培养）单倍体细胞培养（花药培养）  非细胞体系（非细胞体系（cell-free systemcell-free system）） 细胞细胞悬浮悬浮液液1010代代细胞细胞5050代代细胞细胞无限传无限传代代原代培养原代培养传代培养传代培养细胞系细胞系有限与无有限与无限细胞系限细胞系如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？多数组织细胞固定在表面多数组织细胞固定在表面生长和分裂。

生长和分裂随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变遗传物质改变Hela细胞（左）、CHO细胞（右）的培养获得细胞获得细胞细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体植物体培养结果培养结果或细胞产物或细胞产物快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、动物葡萄糖、动物血清血清蔗糖、植物激蔗糖、植物激素素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较植物细胞和动物细胞培养的比较动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用•（（1 1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干 扰素、单克隆抗体等扰素、单克隆抗体等•（（2 2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮•（（3 3）用于检测有毒物质）用于检测有毒物质•（（4 4）用于生理、病理、药理等方面的研）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据究，为治疗和预防疾病提供理论依据这只老鼠身上的这只老鼠身上的“人耳人耳”是由我国科是由我国科学家曹谊林教授利学家曹谊林教授利用细胞工程技术复用细胞工程技术复制出来的。

制出来的 二、细胞工程二、细胞工程 细细胞胞融融合合（（cell fusion））与与细细胞胞杂杂交交（（cell hybridization））技技术术单克隆抗体（单克隆抗体（monoclone antibodymonoclone antibody）技术）技术细胞拆合与显微操作技术细胞拆合与显微操作技术物理法结合显微操作技术物理法结合显微操作技术( (图图1 1、、图图2 2) )化学法结合离心技术化学法结合离心技术制备核体（制备核体（karyoplastkaryoplast）和胞质体（）和胞质体（cytoplastcytoplast）其它技术其它技术 遗传分析（遗传分析（mutant, knock out, knock in）） 对细胞生命活动的研究成为当今生命科学发展的瓶颈对细胞生命活动的研究成为当今生命科学发展的瓶颈主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用用 途途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振荡、电刺激）荡、电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性细胞融合的原理细胞融合的原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目比较项目比较项目（一）植物、动物细胞融合的比较（一）植物、动物细胞融合的比较细胞融合细胞融合单克隆抗体技术单克隆抗体技术( (二二) )单克隆抗体单克隆抗体提出问题：提出问题：长期以来，人期以来，人们为了了获得抗体，采用的是得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到把某种抗原反复注射到动物体内，然后从物体内，然后从动物血清中物血清中分离出所需抗体的方法。

用分离出所需抗体的方法用这种方法种方法获得的抗体，不得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反度低，反应不不够灵敏单克隆抗体的概念单克隆抗体的概念（（1）为什么用小鼠骨髓瘤细胞与）为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B淋淋巴细胞融合？巴细胞融合？思考思考：：（（2）单克隆抗体制备过程中应）单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞用哪些细胞 工程技术手段？工程技术手段？（（3）制备过程为何要经过两次筛选）制备过程为何要经过两次筛选？？单克隆抗体有何克隆抗体有何应用？用？ 主要用于疾病的诊断、治疗和预防与常主要用于疾病的诊断、治疗和预防与常规抗体相比，具有规抗体相比，具有特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高的优点如；各种癌症、肝炎病毒、如；各种癌症、肝炎病毒、SARS病毒、细菌病毒、细菌及血吸虫等数百种疾病的诊断；在疾病治疗方及血吸虫等数百种疾病的诊断；在疾病治疗方面，单克隆抗体犹如人体卫士，能识别面，单克隆抗体犹如人体卫士，能识别““自己自己””与与““异己异己””，一旦发现，一旦发现 致病因素便与之结致病因素便与之结合将其杀死若在单抗上带上抗癌药物制成合将其杀死。

若在单抗上带上抗癌药物制成““生物导弹生物导弹””，将药物定向带到癌细胞所在部位，，将药物定向带到癌细胞所在部位，既消灭了癌细胞又不会伤害健康细胞既消灭了癌细胞又不会伤害健康细胞 绝大多数的单克隆抗体绝大多数的单克隆抗体(mAb)是用小鼠开发的，是用小鼠开发的，虽然可作为研究和诊断的工具，但它们至少在一定程虽然可作为研究和诊断的工具，但它们至少在一定程度上不是理想的治疗剂，因为它们在人类中有免疫原度上不是理想的治疗剂，因为它们在人类中有免疫原性也就是说，小鼠抗体引入到病人体内，将被病人性也就是说，小鼠抗体引入到病人体内，将被病人的免疫系统识别为外源物质，并将发生有损治疗抗体的免疫系统识别为外源物质，并将发生有损治疗抗体利用的人抗鼠抗体利用的人抗鼠抗体(HAMA)应答已经通过将这些鼠应答已经通过将这些鼠的抗体人源化或直接制备人的的抗体人源化或直接制备人的mAb来解决 最近，通过用人免疫球蛋白基因取代小鼠免疫球最近，通过用人免疫球蛋白基因取代小鼠免疫球蛋白基因创建了产生人抗体的小鼠因此，当小鼠被蛋白基因创建了产生人抗体的小鼠因此，当小鼠被免疫时它直接制造出对该抗原的人的抗体，并且产生免疫时它直接制造出对该抗原的人的抗体，并且产生这些抗体的这些抗体的B细胞可与骨髓瘤细胞融合，产生制造人细胞可与骨髓瘤细胞融合，产生制造人mAb的杂交瘤。

的杂交瘤单克隆抗体技术的改进单克隆抗体技术的改进2007年3月26日，在韩国首都首尔，克隆狼在笼子内休息 （三）细胞拆合与显微操作技术（三）细胞拆合与显微操作技术（三）细胞拆合与显微操作技术（三）细胞拆合与显微操作技术卵细胞卵细胞C母绵羊子宫母绵羊子宫Ａ母绵羊Ａ母绵羊Ｂ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞乳腺细胞细胞质细胞质细胞核细胞核细胞核移植细胞核移植胚胎移植胚胎移植早期胚胎早期胚胎多莉羊多莉羊分娩分娩卵裂卵裂融合后的卵细胞融合后的卵细胞细胞拆合技术细胞拆合技术妊娠妊娠多多莉莉羊羊的的培培育育过过程程细胞核细胞核移植移植三、生物芯片三、生物芯片1.定义 指采用光导原位合成或微量点样等方法，将指采用光导原位合成或微量点样等方法，将大量生物大分子（如核酸片段、多肽分子）等样品有序的大量生物大分子（如核酸片段、多肽分子）等样品有序的固定于支持物（如玻片、硅片、尼龙膜等）的表面，组成固定于支持物（如玻片、硅片、尼龙膜等）的表面，组成密集二维分子排列，然后与已标记得待测生物样品中靶分密集二维分子排列，然后与已标记得待测生物样品中靶分子，通过特定的仪器（如激光共聚焦扫描显微镜或子，通过特定的仪器（如激光共聚焦扫描显微镜或CCDCCD））对杂交信号的强度进行快速、并行、高效的检测分析，从对杂交信号的强度进行快速、并行、高效的检测分析，从而判断样品中靶分子数量的技术。

而判断样品中靶分子数量的技术生物芯片生物芯片2.类型基因芯片蛋白质芯片细胞芯片组织芯片生物芯片生物芯片3.应用 基因表达水平的监测 基因诊断 药物筛选 个性化治疗 测序 生物信息与研究对细胞生命活胞生命活动的研究成的研究成为当今生命科学当今生命科学发展的瓶展的瓶颈细胞生命活动细胞生命活动突变体分析突变体分析突变体分析蛋白修饰分蛋白修饰分析基因表达基因表达多肽定性分析多肽定性分析生物信息学生物信息学序列测定序列测定双向电泳分析双向电泳分析DNA分离与克隆分离与克隆机器人技术机器人技术 (robotics) 功能基因组学功能基因组学蛋白质分离与制备蛋白质分离与制备 蛋白质组学蛋白质组学。