血片制作与染色.ppt

疟原虫血片的制作与染色河北省疾病预防控制中心 寄生虫病防治所 甄素娟主要内容• 厚薄血膜的制作 • 制作血膜的注意事项 • 吉氏染色液的配制 • 血膜的染色 • 影响染色的因素 • 病例标本采集 • 考试内容 • 考核评分表血片制作薄血膜:借推片将血液薄薄地涂在载玻片上，使每 个血细胞平铺 厚血膜:是把较多的血液涂成圆形，血膜中血细胞 重叠，原虫较为集中采血时间• 间日疟和三日疟可在发作后任何时间采血，但 在发作后6 ～8小时内最佳； • 恶性疟应在发作开始后不久作血检 • 患者在开始发作时血检可能查不到疟原虫，应 在第二次发作时再作血检,以免漏检取血部位以耳垂较为合适，也可在手 指末端采血，先用75%酒精 棉球消毒取血部位（冬季用 手捻动耳垂使其充血后再行 消毒），待干后，以左手拇 指和食指夹住被检者手指尖 稍下方或轻轻捻转耳垂边缘 ，右手持消毒刺针，迅速刺 入取血部位1～2毫米深，然 后用左手大拇指、食指和右 手中指协同挤出血滴※将玻片分为6等分，第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部 ※作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜 各1个血膜的位置• 薄血膜：取洁净的载玻片2 张，1张做载片，以左手拇指 ，食指夹持载玻片两端，用 另一张载玻片（最好为磨口 边缘）做推片，用右手大拇 指和食指夹持推片侧缘中部 用推片一端边缘的中点从取 血部分取约1µl的血量（相当 于1/4火柴头大小），使血滴 与平置的载玻片接触，并形 成25～35℃夹角，待血液向 两侧扩展约2厘米长度时， 均匀而迅速地向左推出约2.5 厘米长舌状血膜。

涂片操作）厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取4 ～ 5µl血 量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片 接触，再由里向外一个方向旋转，转4 ～ 6圈，涂 成直径0.8 ～ 1厘米大小圆形厚血膜，血膜厚薄均 匀，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见5 ～ 10个白细 胞为宜薄血膜 厚血膜 标记处标记处标准的血涂片厚薄血膜的标准 ●厚血膜血量适宜，不宜过多或过少●薄血膜平整,无皱折和空泡.红细胞单层排列血膜编号• 血膜制成后，立即用特种蜡笔或水笔 于玻片面上写上受检者的号码，以防 出错，待薄血膜干后再用铅笔于薄血 膜中写上受检者的个人编号编号由 省里统一，具体各县市区的编码见技 术手册附件地市名称（编编 号）县县（市、区）名称（编编号）血片编编号邯郸郸市（HD）丛台区（01）、邯山区（02）、复兴区（03）、馆陶县（04）、魏县（05）、大名县（06）、曲周县（07）、 丘县（08）、鸡泽县（09）、广平县（10）、肥乡县（11）、磁县（12）、永年县（13）、邯郸县（14）、峰峰 矿区（15）、临漳县（16）、武安市（17）、成安县（18）、涉县（19）各县县（市、 区）从 XXXX001至 XXXX999 根据工作需 求分配编编号 区间间邢台市（XT）桥东区（01）、桥西区（02）、沙河市（03）、临城县（04）、临西县（05）、隆尧县（06）、内丘县（07） 、巨鹿县（08）、任县（09）、宁晋县（10）、邢台县（11）、广宗县（12）、南宫市（13）、柏乡县（14）、 南和县（15）、新河县（16）、平乡县（17）、威县（18）、清河县（19）石家庄市（SJ）长安区（01）、新华区（02）、桥东区（03）、桥西区（04）、裕华区（05）、正定县（06）、井陉县（07） 、赵县（08）、赞皇县（09）、平山县（10）、晋州市（11）、新乐市（12）、高邑县（13）、鹿泉市（14）、 辛集市（15）、行唐县（16）、藁城市（17）、灵寿县（18）、无极县（19）、井陉矿区（20）、栾城县（21） 、元氏县（22）、深泽县（23）衡水市（HS）桃城区（01）、深州市（02）、阜城县（03）、饶阳市（04）、故城县（05）、冀州市（06）、武强县（07） 、安平县（08）、枣强县（09）、景县（10）、武邑县（11）沧沧州市（CZ）运河区（01）、新华区（02）、泊头市（03）、海兴县（04）、肃宁县（05）、东光县（06）、青县（07）、 吴桥县（08）、黄骅市（09）、沧县（10）、献县（11）、河间市（12）、任丘市（13）、盐山县（14）、南皮 县（15）、孟村县（16）保定市（BD）南市区（01）、北市区（02）、新市区（03）、满城县（04）、容城县（05）、定兴县（06）、曲阳县（07） 、定州市（08）、安新县（09）、安国市（10）、涿州市（11）、高碑店市（12）、蠡县（13）、徐水县（14） 、高阳县（15）、唐县（16）、顺平县（17）、博野县（18）、清苑县（19）、阜平县（20）、望都县（21）、 易县（22）、雄县（23）、涞水县（24）、涞源县（25）廊坊市（LF）安次区（01）、广阳区（02）、香河县（03）、文安县（04）、永清市（05）、固安县（06）、霸州市（07） 、大城县（08）、三河市（09）、大厂县（10）唐山市（TS）路南区（01）、路北区（02）、丰润区（03）、丰南区（04）、开平区（05）、东矿区（06）、遵化市（07） 、滦南县（08）、乐亭县（09）、迁西县（10）、玉田县（11）、迁安市（12）、唐海县（13）、滦县（14）秦皇岛岛市（QH）海港区（01）、山海关区（02）、北戴河区（03）、卢龙县（04）、青龙县（05）、昌黎县（06）、抚宁县（ 07）承德市（CD）双桥区（01）、双滦区（02）、营子区（03）、围场县（04）、丰宁县（05）、兴隆县（06）、宽城县（07） 、隆化县（08）、平泉县（09）、滦平县（10）、承德县（11）张张家口市（ZJ）宣化区（01）、桥东区（02）、桥西区（03）、下花园区（04）、赤城县（05）、张北县（06）、崇礼县（07 ）、康保县（08）、沽源县（09）、蔚县（10）、尚义县（11）、阳原县（12）、怀安县（13）、万全县（14） 、怀来县（15）、涿鹿县（16）、宣化县（17）制作血膜的注意事项1、玻片清洗时，避免玻片碰撞、磨损 。

制作血膜的载玻片必须完全清洁 而毫无油渍或污垢制片时，手指 只能持玻片的边缘，不能接触表面 ，以免油污使薄血膜产生空白区以 及厚血膜脱落作为推片的玻片边 缘一定要平滑，才能使推出的血膜 均匀一致制作血膜的注意事项2、刚涂制的血膜要平放在标本盒内，厚血膜未 干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧，造 成血膜厚薄不均，厚处不易溶血和着色而影响 检查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇 、蟑螂等昆虫吮吸血膜，干后应及时装入标本 盒并盖严，新的木制标本盒需敞开放置一段时 间，让木醇挥发后才能使用，以免厚血膜血红 蛋白被其固定，不能溶血或染色效果不佳制作血膜的注意事项3、让血膜自然干燥，切忌用太阳晒或火烤，干 透后才能用甲醇固定薄血膜夏天标本尽可能 48小时内固定染色；冬天也不能超过72小时 放置时间越久，厚血膜越不易溶血，染色效果 也差若不能及时染色，薄血膜宜先用甲醇固 定，然后用过滤清水对厚血膜溶血，晾干后装 入盒内盖严，待以后染色血片的染色 （一）吉氏染液母液配置方法取吉氏粉5克置于研钵中，加少量甘油 充分研磨，再加再磨，至250ml加完 为止，倒入500ml有塞的有色玻璃瓶 中在研钵中加少量甲醇，洗去甘油 浓液混入瓶内，至250ml甲醇洗净研 钵中甘油染液为止，塞紧瓶塞，充分 摇匀，置于温箱内24小时或室温内3 ～5天，每天摇动5～10min，即成原 液。

材料：1、吉氏粉5克2、甘油250毫升3、甲醇250毫升血片的染色 （二）吉氏染液血片染色方法先用甲醇固定薄血膜，待干后进行染色成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染色缸 ，倒入新配制的2%吉氏染液稀释液（2ml原液加中 性蒸馏水98ml混合均匀），同时对厚薄血膜染色 30min，然后向染色缸中注入缓冲液或自来水，直到 溢出，除掉染液表面上的浮渣，将染色缸中残余的染 液倾出，加入新水，反复冲洗2～3次，然后取出玻片 ，将血膜朝下插在晾片板上干燥血片的染色 （二）吉氏染色方法先用甲醇固定薄血膜，待干后进行染色亦可在固 定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白，然后再染 色单张血片染色:薄血膜经干燥固定后，用中性蒸馏水 2ml，加吉氏原液2～3滴，混匀后滴在厚薄血膜上， 染色20～30分钟，然后用漂洗法轻轻将血膜上的染 液冲洗干净，晾干镜检快染:量筒内量2ml缓冲液或净水，直接滴加吉氏原 液7滴，混匀，滴入待染标本的厚薄血膜上，染色 10min，清水漂洗，晾干镜检吉氏染剂是最可靠的血膜染 剂，其优点是易于掌握，很 少染色过度，染好后的血膜 褪色较慢.• 质量好的染色 : 核呈红色,胞浆呈蓝色或淡蓝色 • 如果血片偏红,说明染液偏酸性 • 如果血片偏蓝,说明染液偏硷性吉氏染色血片外观血片的染色 （三）注意事项 ●配置原液时过滤可除去杂质颗粒，有助于提 高镜检质量。

●固定薄血膜时不要将甲醇触碰到厚血膜 ●冲洗染液时，不要冲走厚血膜四）影响染色效果的因素• 血片染色好坏除了与玻片是否清洁，血片 制作质量好坏等有关外，还受到以下几个 因素的影响： • （1）染料溶剂的质量 染料、甲醇和甘油 如果不纯，常使配制的染液偏酸或偏碱而 影响染色效果因此必须用分析纯的甲醇 和中性甘油，而且在配制时所用的器具必 须干净而无水份影响染色效果的因素• （2）染液的新旧 新配制的染液因色素尚 未充分溶解，染色力较弱且常呈现偏碱性 染液存放时间越久，染色力越强通常 在染液配制1～2周后才使用，盛装染液的 瓶子应加塞盖严，以防吸潮而影响染液质 量影响染色效果的因素• （3）染液稀释后使用时间 吉氏和瑞氏染 液的主要成份是美蓝、伊红和由美蓝氧化 产生的天青，三者能在酒精溶液中溶解， 但在水溶液中伊红遇到美蓝和天青即产生 沉淀因此，稀释染液必须在配制后半小 时内使用影响染色效果的因素• （4）染液的稀释浓度 染液的浓度高着色 快，各种细胞着色深，薛氏点、茂氏点粗 大显著，但颜色常偏碱；染液浓度低，着 色慢，但各种细胞内部结构着色均匀、清 晰，但薛氏点、茂氏点不够清楚。

影响染色效果的因素• （5）染色时间 染色时间长染色效果好， 反之较差室温高则着色快，染色时间可 略缩短，气温低可适当延长因此染色时 间应根据染液的质量、新旧、稀释浓度和 气温而适当增减影响染色效果的因素• （6）染色用水 为使厚薄血膜着色好，应使稀 释的染液呈中性或稍偏碱性，故应用pH7.0 ～ 7.2 的水稀释如果染液偏酸或偏碱，可用缓冲蒸馏 水调整染色后发现血膜颜色偏蓝或偏红时，可 用与之相反的酸、碱度水冲洗血片予以纠正影响染色效果的因素• （7）冲洗方法 染色后不要直接将染液倒掉 ，应沿玻片或染色缸边缘加水使染液表面一 层溢出，并轻轻冲洗，以免染液色素颗粒沾 污血膜● 查完整个厚血膜未查见疟原虫如何确定疟原虫血片为阴性疟疾病人应采集标本• 制作血涂片 • 采集滤纸血 • 抗凝全血编号滤纸血样式1.2cm1.2cm考试内容• 1、血片制作与染色：在30分钟内，每人 制作3张血片并做吉氏染色具体考核标 准见疟原虫血片制片染色技术考核评分 表 • 2、镜检读片：要求每人镜检6张标本片 ，每张4分钟，第3分钟时提醒1次 考试分组考试试内容8:40-9:10保定、廊坊、唐山血片制作、染色第一组组血片秦皇岛岛、石家庄血片镜检镜检9:25-9:55秦皇岛岛、石家庄血片制作、染色第二组组血片保定、廊坊、唐山血片镜检镜检10:10-10:40沧沧州、衡水、张张家口血片制作、染色第三组组血片邢台、邯郸郸、华华油、承德血片镜检镜检10:55-11:25邢台、邯郸郸、华华油、承德血片制作、染色第四组组血片沧沧州、衡水、张张家口血片镜检镜检疟疟原虫。