高三一轮复习生物人教山西用选修1课件：第34讲微生物的培养与应用.ppt

生生物物技技术术实实践践第第 34 34 讲讲微生物的培养与应用微生物的培养与应用选修11 1．．微生物的分离和培养微生物的分离和培养2 2．．培养基对微生物的选择作用培养基对微生物的选择作用　　　　1 1.(.(20092009·安安徽徽) )下下列列是是关关于于“检检测测土土壤壤中中细细菌菌总数总数”实验操作的叙述，其中错误的是实验操作的叙述，其中错误的是( ( 　　) )　　　　A.A.用用蒸蒸馏馏水水配配制制牛牛肉肉膏膏蛋蛋白白胨胨培培养养基基，，经经高高温温、、高压灭菌后倒平板高压灭菌后倒平板　　　　B.B.取取104104、、105105、、106106倍倍的的土土壤壤稀稀释释液液和和无无菌菌水水各各0.1 mL0.1 mL，分别涂布于各组平板上，分别涂布于各组平板上　　　　C.C.将将实实验验组组和和对对照照组组平平板板倒倒置置，，37℃37℃恒恒温温培培养养2424~ ~4848小时小时　　　　D.D.确确定定对对照照组组无无菌菌后后，，选选择择菌菌落落数数在在300300以以上上的实验组平板进行计数的实验组平板进行计数D　　　　检检测测土土壤壤中中细细菌菌总总数数，，用用蒸蒸馏馏水水配配制制牛牛肉肉膏膏蛋蛋白白胨胨培培养养基基，，经经高高温温、、高高压压灭灭菌菌后后倒倒平平板板，，取取104、、105、、106倍倍的的土土壤壤稀稀释释液液和和无无菌菌水水各各0.1 mL，，分分别别涂涂布布于于各各组组平平板板上上，，将将实实验验组组和和对对照照组组平平板板倒倒置置，，37℃恒恒温温培培养养24~48小小时时，，在在确确定定对对照照组组无无菌菌后后，，选选择择菌菌落落数数在在30~300的的一一组组平平板板为为代代表表进进行行计数。

所以计数所以D不对2 2．．(2009(2009·辽宁、宁夏辽宁、宁夏) )(1)(1)在在大大肠肠杆杆菌菌培培养养过过程程中中，，除除考考虑虑营营养养条条件件外外，，还还要要考考虑虑 、、 和和渗渗透透压压等等条条件件由由于于该该细细菌菌具具有有体体积积小小、、结结构构简简单单、、变变异异类类型型容容易易选选择择、、 、、 等等优优点点，，因因此此常常作作为为遗遗传学研究的实验材料传学研究的实验材料2)(2)在在微微生生物物培培养养操操作作过过程程中中，，为为防防止止杂杂菌菌污污染染，，需需对对培培养养基基和和培培养养皿皿进进行行 ( (消消毒毒、、灭灭菌菌) )；；操操作作者者的的双双手手需需要要进进行行清清洗洗和和 ；；静静止止空空气气中中的的细细菌菌可可用用紫紫外外线线杀杀灭灭，，其其原原因因是是紫紫外外线能使蛋白质变性，还能线能使蛋白质变性，还能 温度温度酸碱度酸碱度易培养易培养生活周期短生活周期短灭菌灭菌消毒消毒损伤损伤DNA的结构的结构(3)(3)若若用用稀稀释释涂涂布布平平板板法法计计数数大大肠肠杆杆菌菌活活菌菌的的个个数数，，要要想想使使所所得得估估计计值值更更接接近近实实际际值值，，除除应应严严格格操操作作、、多多次次重重复复外外，，还还应应保保证证待待测测样样品稀释的品稀释的 。

4)(4)通通常常，，对对获获得得的的纯纯菌菌种种还还可可以以依依据据菌菌落落的的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的 比例合适比例合适 鉴定鉴定(或分类或分类)(5)(5)培培养养大大肠肠杆杆菌菌时时，，在在接接种种前前需需要要检检测测培培养养基基是是否否被被污污染染对对于于固固体体培培养养基基应应采采用用的的检检测方法是测方法是 6)(6)若若用用大大肠肠杆杆菌菌进进行行实实验验，，使使用用过过的的培培养养基基及及其其培培养养物物必必须须经经过过 处处理理后后才才能能丢丢弃弃，，以以防止培养物的扩散防止培养物的扩散 将未接种的培养基在适宜的温度下放将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生灭菌灭菌 (1)(1)大大肠肠杆杆菌菌具具有有易易培培养养、、生生活活周周期期短短等等优优点点，，培培养养过过程程中中，，除除考考虑虑营营养养条条件件外外，，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。

还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件2)(2)对对培培养养基基和和培培养养皿皿应应进进行行灭灭菌菌，，对对操操作作者者的的双双手手需需要要进进行行清清洗洗和和消消毒毒，，紫紫外外线线能能使使蛋蛋白白质变性，还能损伤质变性，还能损伤DNADNA的结构3)(3)稀稀释释涂涂布布平平板板法法是是将将菌菌液液进进行行一一系系列列的的梯梯度度稀稀释释，，然然后后将将不不同同稀稀释释度度的的菌菌液液分分别别涂涂布布到到琼琼脂脂固固体体培培养养基基的的表表面面，，进进行行培培养养，，应应保保证证样样品稀释的比例适合品稀释的比例适合(4)(4)对对获获得得的的纯纯菌菌种种还还可可以以依依据据菌菌落落的的形形状状、、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定5)(5)培培养养大大肠肠杆杆菌菌时时，，在在接接种种前前需需要要检检测测培培养养基基是是否否被被污污染染对对于于固固体体培培养养基基应应采采用用的的检检测测方方法法是是将将未未接接种种的的培培养养基基在在适适宜宜的的温温度度下下放放置置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生6)(6)因因为为有有的的大大肠肠杆杆菌菌会会释释放放一一些些强强烈烈的的毒毒素素，，并并可可能能导导致致肠肠道道出出现现严严重重症症状状，，使使用用过过的的培培养养基基及及其其培培养养物物必必须须经经过过灭灭菌菌处处理理后后才才能能丢丢弃弃，，以防止培养物的扩散。

以防止培养物的扩散　　　　一、微生物的实验室培养一、微生物的实验室培养　　　　1 1．培养基．培养基培养基是指人们按照微生物对培养基是指人们按照微生物对营养物质营养物质的不同需求，的不同需求，配制出的供其配制出的供其生长繁殖生长繁殖的营养基质按物理性质可分的营养基质按物理性质可分为液体培养基、固体培养基为液体培养基、固体培养基( (一般加入一般加入琼脂琼脂) )等培养基的成分一般包括水、培养基的成分一般包括水、碳源碳源、氮源和、氮源和无机盐无机盐等，等，除基本营养物质外，还需要满足微生物生长对除基本营养物质外，还需要满足微生物生长对 pHpH 、、特殊营养物质以及特殊营养物质以及氧气氧气的要求如：培养乳酸菌需向的要求如：培养乳酸菌需向培养基中添加培养基中添加维生素维生素，培养霉菌时培养基的，培养霉菌时培养基的pHpH应应调至调至酸性酸性，培养细菌时需将，培养细菌时需将pHpH调至调至中性或微碱性中性或微碱性 项目消毒灭菌概念使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)条件使用为较温和的理化方法使用强烈的理化因素结果杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子2.消毒和灭菌消毒和灭菌项目 消毒灭菌适用 实验操作的空间、操作者的衣着和手微生物的培养器皿、接种用具和培养基等常用方法煮沸消毒法(如100 ℃，5～6 min)、巴氏消毒法(80 ℃，15 min)，酒精、氯气、石炭酸等化学药剂消毒法灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌　　　　3.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基接种方法平板划线法稀释涂布平板法概念通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养目的使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种4.纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌接种方法平板划线法稀释涂布平板法注意事项第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环。

②灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免接种环温度太高，杀死菌种①(1)稀释操作时：每支试管及其中9 mL 水、移液管均需要灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰1～2cm处接种方法平板划线法稀释涂布平板法注意事项　③划线时用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破④在作第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线⑤划线时最后一区域不要与第一区域相连　(2)涂布平板时：①涂布器用70%酒精消毒，取出时，多余酒精在烧杯中滴尽，沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃②不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精③应从操作的各个细节保证“无菌”例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等筛选菌株微生物的选择培养，是指利用培养基的组成使适宜生长的特定微生物得到较快繁殖的技术在课题2提供的选择培养基的配方中，尿素是培养基中的惟一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长　　　　二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数　　　　1.原理原理统计菌落数目理论依据：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

因此，恰当的稀释度是成功地统计菌落数目的关键为了保证结果准确，通常将几个稀释度下的菌液都涂布在平板上，培养后再选择菌落数在30～300的平板进行计数指示剂：酚酞计算方法：每克样品中的菌落数=(C÷V)×M(C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V：涂布平板所用稀释液的体积；M：稀释倍数)设置对照可排除实验组中非实验因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度2.流程流程原理 刚果红能与培养基中的　　　形成红色复合物，并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖反应当纤维素被　　　　分解后，该复合物无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈目的 通过颜色反应直接筛选微生物　　　　三、分解纤维素的微生物的分离三、分解纤维素的微生物的分离　　　　1.刚果红染色法刚果红染色法纤维素纤维素纤维素酶纤维素酶方法1.先培养微生物，再加入刚果红其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用；缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂)2.倒平板时加入刚果红优点是操作简便，不存在菌落的混杂问题；缺点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应。

但这种透明圈较为模糊，因为纤维素占主要地位，可区分有些微生物具有降解色素的能力，长时间培养会降解刚果红形成明显的透明圈)2.流程流程　　　　1.不同微生物的营养类型是否相同？不同微生物的营养类型是否相同？　　　　 (1)根根据据能能否否将将CO2合合成成有有机机物物可可将将微微生生物的同化类型划分为自养型与异养型物的同化类型划分为自养型与异养型　　　　自自养养型型：：能能利利用用CO2等等简简单单的的无无机机物物合合成成贮存能量的有机物贮存能量的有机物　　　　异异养养型型：：不不能能利利用用CO2等等简简单单无无机机物物合合成成有机物，只能以其他生物制造的有机物为食有机物，只能以其他生物制造的有机物为食　　　　(2)根根据据细细胞胞呼呼吸吸时时是是否否需需要要氧氧气气，，可可将将微微生生物物的的异异化化类类型型划划分分为为需需氧氧型型和和厌氧型　　　　需需氧氧型型：：必必须须不不断断从从外外界界环环境境中中摄摄取取氧氧气气来来氧氧化化分分解解自自身身的的组组成成物物质质，，并并释放能量，排出代谢产物释放能量，排出代谢产物　　　　厌厌氧氧型型：：在在无无氧氧条条件件下下，，依依靠靠酶酶的的作用分解有机物，获取所需的能量。

作用分解有机物，获取所需的能量　　　　注注：：酵酵母母菌菌既既能能进进行行有有氧氧呼呼吸吸，，也也能进行无氧呼吸，属于兼性厌氧型能进行无氧呼吸，属于兼性厌氧型　　　　2.配制培养基时应注意哪些问题？配制培养基时应注意哪些问题？ 　　　　(1)全程要求无菌操作全程要求无菌操作　　　　(2)培培养养基基灭灭菌菌后后，，需需要要冷冷却却到到50 ℃左左右右时时，，才才能能用用来来倒倒平平板板可可以以用用手手触触摸摸盛盛有有培培养养基基的的锥锥形形瓶瓶，，感感觉觉锥锥形形瓶瓶的的温温度度下下降降到到刚刚刚刚不不烫烫手手时时，，就就可可以以进进行行倒倒平平板板了了操操作作时时使使锥锥形形瓶瓶的的瓶瓶口口通通过过火火焰焰，，通通过过灼灼烧烧灭灭菌菌，，防防止止瓶瓶口口的的微微生生物污染培养基物污染培养基　　　　(3)平平板板冷冷凝凝后后皿皿盖盖上上会会凝凝结结水水珠珠，，凝凝固固后后的的培培养养基基表表面面的的湿湿度度也也比比较较高高，，将将平平板板倒倒置置，，既既可可以以使使培培养养基基表表面面的的水水分分更更好好地地挥挥发发，，又又可可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

　　　　(4)在在倒倒平平板板的的过过程程中中，，不不能能将将培培养养基基溅溅在在皿皿盖盖与与皿皿底底之之间间的的部部位位，，因因为为空空气气中中的的微微生生物物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生　　　　3.为为什什么么分分离离不不同同的的微微生生物物要要采采用用不不同同的的稀稀释释度度？？测测定定土土壤壤中中细细菌菌的的总总量量和和测测定定土土壤壤中中能能分分解解尿尿素素的的细细菌菌的的数数量量，，选选用用的的稀稀释释范范围围相相同吗？同吗？ 　　　　这这是是因因为为土土壤壤中中各各类类微微生生物物的的数数量量(单单位位：：株株/kg)是是不不同同的的，，例例如如在在干干旱旱土土壤壤中中的的上上层层样样本本中中：：好好氧氧及及兼兼性性厌厌氧氧型型细细菌菌数数约约为为2185万万，，放线菌数约为放线菌数约为477万，霉菌数约为万，霉菌数约为23.1万　　　　因因此此，，为为获获得得不不同同类类型型的的微微生生物物，，就就需需要要按按不不同同的的稀稀释释度度进进行行分分离离，，同同时时还还应应当当有有针针对对性性地地提提供供选选择择培培养养的的条条件件。

由由于于土土壤壤中中细细胞胞的的总总量量多多于于土土壤壤中中能能分分解解尿尿素素的的细细胞胞的的数数量量，，故故测测定定土土壤壤中中细细菌的总量时稀释倍数要高些菌的总量时稀释倍数要高些　　　　4.在在分分离离纤纤维维素素分分解解菌菌的的选选择择培培养养基基上上，，长长出出的的菌菌落落大大小小、、形形态态及及透透明明圈圈的的大大小小是是否否相相同同?在在形形成成的的菌落中数量最多的应该是哪种生物的菌落菌落中数量最多的应该是哪种生物的菌落? 　　　　能能够够分分解解纤纤维维素素的的微微生生物物种种类类很很多多，，不不仅仅有有细细菌菌，，还还有有霉霉菌菌、、放放线线菌菌等等这这些些微微生生物物的的菌菌落落特特征征各各不不相相同同，，分分解解纤纤维维素素的的能能力力也也不不相相同同所所以以长长的的菌菌落落大大小小、、形形态态以以及及透透明明圈圈的的大大小小并并不不相相同同在在形形成成的的菌菌落落中中数数量量最最多多的的应应当当是是细细菌菌的的菌菌落落因因为为土土壤壤中中细细菌菌的的数数量量远远多于真菌和放线菌远远多于真菌和放线菌　　　　5.分分离离分分解解纤纤维维素素的的微微生生物物的的实实验验流流程程与与稀稀释释液液的的取取样样培培养养流流程程图图有有何何异异同？同？ 　　　　它它们们的的区区别别是是：：稀稀释释液液的的取取样样流流程程图图是是将将土土样样制制成成的的菌菌悬悬液液直直接接涂涂布布在在以以尿尿素素为为惟惟一一氮氮源源的的选选择择性性培培养养基基上上，，直直接接分分离离得得到到菌菌落落。

分分离离分分解解纤纤维维素素的的微微生生物物的的实实验验流流程程通通过过选选择择培培养养，，使使纤纤维维素素分分解解菌菌得得到到增增殖殖后后，，再再将将菌菌液液涂涂布布在在选择培养基上其他步骤基本相同选择培养基上其他步骤基本相同　　　　　　　　　　　　微生物的实验室培养微生物的实验室培养　　　　 有关培养基配制原则叙述正确的是有关培养基配制原则叙述正确的是(　　)　　　　A.任任何何培培养养基基都都必必须须含含有有水水、、碳碳源源、、氮氮源、无机盐及生长因子源、无机盐及生长因子　　　　B.碳碳源源和和氮氮源源必必需需具具有有一一定定的的比比例例，，且且碳源比氮源要多碳源比氮源要多　　　　C.微微生生物物的的生生长长除除受受营营养养因因素素影影响响外外，，还受到还受到pH、氧、渗透压的影响、氧、渗透压的影响　　　　D.营养物质的浓度越高越好营养物质的浓度越高越好 C　　　　A错错误误：：各各种种培培养养基基一一般般都都需需要要含含有有的的是是水水、、碳碳源源、、氮氮源源和和无无机机盐盐，，不不一一定定要要有有生生长长因因子子B错错误误：：不不一一定定要要碳碳源源与与氮氮源源的的比比值值一一定定，，与与培培养养的的目目的的有有关关。

D错错误误：：营营养养物物质质浓浓度度过过高高，，微微生生物易失水，反而会抑制微生物的生长物易失水，反而会抑制微生物的生长　　　　消消毒毒和和灭灭菌菌是是两两个个不不同同的的概概念念，，灭灭菌菌是是指指彻彻底底杀杀灭灭微微生生物物使使其其永永远远丧丧失失生生长长繁繁殖殖的的能能力力消消毒毒仅仅指指杀杀死死一一部部分分对对人人体体有有害害的的病病原原菌菌而而对对被被消消毒毒的的物物体体基基本本无无害害下下列列哪哪些些事事物物适适用用于于消消毒毒处处理理(　　　　)　　　　①①皮肤皮肤　　②②饮用水饮用水　　③③牛奶牛奶　　④④注射器注射器　　　　⑤⑤培养皿培养皿　　⑥⑥接种环接种环　　⑦⑦培养基培养基　　⑧⑧果汁果汁　　　　⑨⑨酱油酱油　　⑩⑩手术刀手术刀　　　　A.①②③⑧⑨①②③⑧⑨　　　　　　　　　　B.④⑤⑥⑦⑩④⑤⑥⑦⑩　　　　C.①②④⑤⑥⑧①②④⑤⑥⑧　　　　　　　　D.以上全部以上全部A　　　　选选A对对于于皮皮肤肤、、饮饮用用水水、、牛牛奶奶、、果果汁汁和和酱酱油油，，如如用用强强烈烈的的理理化化因因素素则则对对其其结结构构和和成成分分起起破破坏坏作作用用，，所所以以应应用用温温和和的的物物理理和和化化学方法进行消毒。

学方法进行消毒灭菌方法适用材料或用具灭菌条件灭菌时间灼烧灭菌接种环、接种针或其他金属工具酒精灯火焰的充分燃烧层直至烧红干热灭菌玻璃器皿、(吸管、培养皿)和金属用具等干热灭菌箱内，160～170 ℃1～2 h高压蒸汽灭菌培养基等100 kPa，121 ℃15～30 min　　三种常用灭菌方法的比较　　三种常用灭菌方法的比较　　　　　　土壤中分解尿素细菌的分离与计数　　　　　　土壤中分解尿素细菌的分离与计数 　　　　　　用用稀稀释释涂涂布布平平板板法法来来统统计计样样品品中中尿尿素素分分解解菌菌的的数数目目，，为为了了提提高高实实验验结结果果的的可可信信度度，，往往往往要要设设置置对对照照实实验验，，对于对照组的要求不包括以下哪项对于对照组的要求不包括以下哪项(　　　　)　　　　A.对照组培养基也严格灭菌，且不接种任何微生物对照组培养基也严格灭菌，且不接种任何微生物　　　　B.对照组和实验组培养基放在相同条件下培养对照组和实验组培养基放在相同条件下培养　　　　C.所用培养基成分及所用培养基成分及pH大小完全与实验组一致大小完全与实验组一致　　　　D.培养基的量的大小与实验组必须绝对相同培养基的量的大小与实验组必须绝对相同 D　　　　一一方方面面，，实实验验室室条条件件下下，，培培养养空空间间资资源源都都相相对对来来说说是是无无限限的的，，另另一一方方面面，，对对于于培培养养基基来来说说，，接接触触细细菌菌的的都都是是最最表表面面那那层层，，所所以以培培养养基基的量对实验结果的影响不大。

的量对实验结果的影响不大　　　　用用稀稀释释涂涂布布平平板板法法来来统统计计样样品品中中活活菌菌的的数数目，其结果与实际值比目，其结果与实际值比(　　　　)　　　　A.比实际值要高比实际值要高　　　　B.比实际值要低比实际值要低　　　　C.和实际值一样和实际值一样　　　　D.比实际值可能高也可能低比实际值可能高也可能低B　　　　当当两两个个或或多多个个细细胞胞连连在在一一起起时时，，培培养后观察到的只是一个菌落养后观察到的只是一个菌落　　　　 为为了了保保证证结结果果准准确确，，一一般般设设置置3～～5个个平平板板，，选选择择菌菌落落数数在在30～～300的的平平板板进进行行计计数数，，并并取取平平均均值值；；稀稀释释涂涂布布平平板板法法统统计计样样品品中中菌菌落落的的数数目目往往往往比比实实际际数数目目低低这这是是因因为为当当两两个个或或多多个个细细胞胞连连在在一起时，平板上观察到的只是一个菌落一起时，平板上观察到的只是一个菌落　　　　　　　　　　　　分解纤维素的微生物的分离分解纤维素的微生物的分离 　　　　分分离离纤纤维维素素分分解解菌菌的的实实验验过过程程中中操操作作有误的是有误的是(　　　　)　　　　A.经经选选择择培培养养后后将将样样品品涂涂布布到到鉴鉴别别纤纤维维素分解菌的培养基上素分解菌的培养基上　　　　B.富富集集培培养养这这一一步步可可省省略略，，但但培培养养纤纤维维素分解菌少素分解菌少　　　　C.经稀释培养后，用刚果红染色经稀释培养后，用刚果红染色　　　　D.对对照照组组可可用用同同样样量量的的培培养养液液涂涂布布到到不不含纤维素的培养基上含纤维素的培养基上 A　　　　经经选选择择培培养养后后培培养养基基上上纤纤维维素素分分解解菌菌的的浓浓度度增增加加，，所所以以需需要要将将样样品品进进行行梯梯度度稀稀释释后后才才能能涂涂布布到到鉴鉴别别纤纤维维素素分分解解菌菌的的培培养养基基上上；；选选择择培培养养可可省省略略，，但但选选择择培培养养可可增增加加纤纤维维素素分分解解菌菌浓浓度度，，此此步步若若省省略略，，所所得得到到的的微微生生物物可可能能较较少少；；经经稀稀释释培培养养长长出出菌菌落落后后，，再再加加刚刚果果红红染染色色；；设设置置对对照照能能证证明明经经富富集集培培养养的的确确得到了欲分离的微生物。

得到了欲分离的微生物　　　　分分解解纤纤维维素素的的微微生生物物的的分分离离实实验验的的具具体体操作步骤是操作步骤是(　　　　)　　　　①①土壤取样土壤取样　　　　②②将将样样品品涂涂布布到到鉴鉴别别纤纤维维素素分分解解菌菌的的培培养基上养基上　　　　③③挑选产生透明圈的菌落挑选产生透明圈的菌落　　　　④④选择培养选择培养　　　　⑤⑤梯度稀释梯度稀释　　　　A.①④⑤②③①④⑤②③　　　　B.①⑤②④③①⑤②④③　　　　C.①⑤④③②①⑤④③②　　　　D.①③⑤④②①③⑤④②A　　　　本本题题考考查查分分解解纤纤维维素素的的微微生生物物的的分分离离实实验验流流程程为为了了增增加加分分解解纤纤维维素素的的微微生生物物的的浓浓度度，，在在土土壤壤取取样样后后，，要要进进行行选选择择培培养养，，然然后后再再通通过过梯梯度度稀稀释释并并将将样样品品涂涂布布到到鉴鉴别别纤纤维维素素分分解解菌菌的的培培养养基基上上培培养养一一段段时时间间，，挑选产生透明圈的菌落即可挑选产生透明圈的菌落即可　　　　设设计计对对照照实实验验说说明明选选择择培培养养的的作作用用可可以以在在该该培培养养基基的的配配方方中中加加入入适适量量琼琼脂脂制制成成固固体体培培养养基基，，另另取取一一完完全全培培养养基基作作为为对对照照。

在在两两个个培培养养基基中中加加入入等等量量的的样样液液，，在在相相同同适适宜宜条条件件下下进进行行培培养养如如果果完完全全培培养养基基上上形形成成的的菌菌落落远远远远多多于于该该培培养养基基，，由由此此可可以以说说明明以以纤纤维维素素粉粉作作为为惟惟一一碳碳源源的的培培养养基基对对微微生生物物的的生生长长繁繁殖殖具具有选择性有选择性。