素材微生物的计数 高二下学期生物人教版选择性必修3.docx

微生物的计数高中生物学选择性必修三教材中出现多次微生物计数的问题，如细菌的计数，酵母菌的计数等那么，培养皿内菌落计数得到细菌数需要控制数量范围是多少？菌落的分离需要控制在什么数量范围内？细菌的计数有哪些方法？菌落计数数值范围人教版教材中，涂布分离法统计的菌落个数应介于30～300之间（如下所示），指的是统计菌落数，目的不是分离菌落意思是只要有菌落生长出来就可以计数，不需要菌落生长到一定的大小微生物的计数有哪些方法？平板划线分离法是不能用来细菌计数的，因为只有划线的后期才有可能是单菌落，通常用稀释涂布分离法来计数，那么“细菌进行计数只能采用涂布分离法”，为什么是错误的呢？ 测定微生物生长的方法很多，各种方法均有其优缺点，也不是在任何情况下都适用在微生物学工作中一般常用的是培养皿菌落计数法、计数器法和比浊法等1．计数板测定法 即用血细胞计数板进行计数取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数板的计数室内，用显微镜观察计数由于计数室的容积是一定的（0.1mm3），因而根据计数板刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数 本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数2．比浊法比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。

细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度（OD值）表示样品菌液浓度 此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定3．活细胞计数法常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数 此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法 使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入0.001%2，3，5一氯化三苯基四氮唑（TTC）；③本法限用于形成菌落的微生物 广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法4．电子计数器计数法电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上 该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。

因此，要求菌悬液中不含任何碎片5．测定细胞重量法此法分为湿重法和干重法湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法6．测定细胞总氮量或总碳量氮碳是细胞的主要成分，含量较稳定，测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量此法适于细胞浓度较高的样品7．颜色改变单位法（CCU）这种方法通常用于很小，用一般的比浊法无法计数的微生物，比如原核生物支原体等，因为支原体的液体培养物是完全透明的，呈现为清亮透明红色，因此无法用比浊法来计数，由于支原体固体培养很困难，用菌落形成法也不容易计数，因此需要用特殊的计数方法，即CCU法 它是以微生物在培养基中的代谢活力为指标，来计数微生物的相对含量的，下面以解脲脲原体（人类泌尿生殖道常见的寄生菌）为例，简单介绍其操作： （1）取12只无菌试管，每一管装1.8ml解脲脲原体培养基2）在第一管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液，充分混匀，从中吸取0.2ml加入第二管，依次类推，10倍梯度稀释，一直到最末一管3）于37℃培养，以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU，也就是支原体的最大代谢活力，比如，第六管出现颜色改变，他的相对浓度就是106CCU/ml。

一般来说，比浊法和菌落计数法就可以满足绝大多数细菌的计数，但是对支原体这样比较特殊的微生物，用CCU法比较合适例、如图是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程请回答（1）图中选择培养基应以         为唯一氮源；鉴别培养基还需添加            作指示剂2）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191该过程采取的接种方法是           ，每克土壤样品中的细菌数量为       个解析：（1）脲酶能够催化尿素分解为氨，因此要从土壤中筛选产脲酶的细菌，培养基应以尿素为唯一氮源；由于尿素被脲酶分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，从而使酚红指示剂变红，因此鉴别培养基还需添加酚红作指示剂2）用于计数细菌菌落数的常用方法是稀释涂布平板法，统计的菌落数应介于30～300之间，故选择细菌菌落数为156、178和191的平板计数．每克该土壤样品中的菌落数对应的应该是每毫升菌液中的细菌数目，所以每克该土壤样品中的菌落数为（156+178+191）÷3÷0.1×105=1.75×108个。

答案：（1）尿素 酚红 （2）稀释涂布平板    1.75×108个。