实验一鸡胚接种课件.ppt

一、原理一、原理 鸡胚为活的动物机体，组织分化程度低，鸡胚为活的动物机体，组织分化程度低，病毒易于增殖，可选择不同的日龄和接种途病毒易于增殖，可选择不同的日龄和接种途径，感染病毒的组织和液体中含大量病毒径，感染病毒的组织和液体中含大量病毒实验一实验一 鸡胚接种鸡胚接种二、实验目的二、实验目的 了解鸡胚的基本结构与功能，掌握常用了解鸡胚的基本结构与功能，掌握常用的鸡胚接种方法的鸡胚接种方法三、鸡胚的结构与功能三、鸡胚的结构与功能Ø卵壳卵壳卵壳卵壳Ø壳膜壳膜壳膜壳膜Ø气室气室气室气室Ø绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜 Ø尿囊腔尿囊腔尿囊腔尿囊腔Ø羊膜与羊膜腔羊膜与羊膜腔羊膜与羊膜腔羊膜与羊膜腔Ø卵黄卵黄卵黄卵黄Ø卵白卵白卵白卵白卵壳膜卵壳膜气室气室绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜羊膜腔羊膜腔尿囊腔尿囊腔卵白卵白卵壳卵壳Ø卵壳卵壳卵壳卵壳Ø壳膜壳膜壳膜壳膜上有细孔，进行气体交换上有细孔，进行气体交换上有细孔，进行气体交换上有细孔，进行气体交换使气体分子和液体分子在内外两方使气体分子和液体分子在内外两方使气体分子和液体分子在内外两方使气体分子和液体分子在内外两方面进行交换。

面进行交换面进行交换面进行交换Ø气室气室气室气室 Ø绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜呼吸和调节压力呼吸和调节压力呼吸和调节压力呼吸和调节压力起胚胎呼吸器官的功能，氧气的交换是起胚胎呼吸器官的功能，氧气的交换是起胚胎呼吸器官的功能，氧气的交换是起胚胎呼吸器官的功能，氧气的交换是在膜的血管内通过卵壳孔而进行的在膜的血管内通过卵壳孔而进行的在膜的血管内通过卵壳孔而进行的在膜的血管内通过卵壳孔而进行的Ø尿囊腔尿囊腔尿囊腔尿囊腔 胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，初为透胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，初为透胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，初为透胚胎的排泄器官，内含有尿囊液，初为透明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿囊液明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿囊液明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿囊液明液体，是单纯生理盐溶液，以后尿囊液中尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第中尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第中尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第中尿酸盐迅速增加，胚胎发育到第12-1312-1312-1312-13天天天天后，尿囊液开始变得混浊后，尿囊液开始变得混浊后，尿囊液开始变得混浊后，尿囊液开始变得混浊Ø羊膜与羊膜腔羊膜与羊膜腔羊膜与羊膜腔羊膜与羊膜腔Ø卵黄卵黄卵黄卵黄 Ø卵白卵白卵白卵白其中盛有羊水，胎体浸泡于其中其中盛有羊水，胎体浸泡于其中其中盛有羊水，胎体浸泡于其中其中盛有羊水，胎体浸泡于其中在胚胎发育早期供给鸡胚营养。

在胚胎发育早期供给鸡胚营养在胚胎发育早期供给鸡胚营养在胚胎发育早期供给鸡胚营养在胚胎发育晚期供给鸡胚营养在胚胎发育晚期供给鸡胚营养在胚胎发育晚期供给鸡胚营养在胚胎发育晚期供给鸡胚营养四、材料四、材料1 1、鸡胚、鸡胚 10 10日龄日龄2 2、病毒、病毒 鸡新城疫病毒（鸡新城疫病毒（NDVNDV））3 3、照蛋灯、照蛋灯4 4、打孔器、打孔器5 5、石蜡、石蜡6 6、注射器、注射器7 7、蛋座、蛋座8 8、酒精棉球、碘酊棉球、酒精棉球、碘酊棉球五、受精卵的选择五、受精卵的选择Ø最好是来自最好是来自最好是来自最好是来自SPFSPFSPFSPF鸡群，以降低母源抗体的影响鸡群，以降低母源抗体的影响鸡群，以降低母源抗体的影响鸡群，以降低母源抗体的影响Ø受精卵的壳最好是白色的受精卵的壳最好是白色的受精卵的壳最好是白色的受精卵的壳最好是白色的Ø受精卵必须新鲜，保存在受精卵必须新鲜，保存在受精卵必须新鲜，保存在受精卵必须新鲜，保存在5-20℃5-20℃5-20℃5-20℃不要超过不要超过不要超过不要超过10101010天，天，天，天，保存一个月的受精卵，孵化率将近于零保存一个月的受精卵，孵化率将近于零。

保存一个月的受精卵，孵化率将近于零保存一个月的受精卵，孵化率将近于零六、孵育六、孵育Ø孵卵箱内的温度应保持在孵卵箱内的温度应保持在孵卵箱内的温度应保持在孵卵箱内的温度应保持在37.5-38.5℃37.5-38.5℃37.5-38.5℃37.5-38.5℃Ø相对湿度：相对湿度：相对湿度：相对湿度：50%-60%50%-60%50%-60%50%-60%Ø必须保证有充分的新鲜空气流通，特别是在孵化必须保证有充分的新鲜空气流通，特别是在孵化必须保证有充分的新鲜空气流通，特别是在孵化必须保证有充分的新鲜空气流通，特别是在孵化5-65-65-65-6天以后天以后天以后天以后Ø从孵育后第从孵育后第从孵育后第从孵育后第3 3 3 3天开始，每天翻卵一次天开始，每天翻卵一次天开始，每天翻卵一次天开始，每天翻卵一次七、检卵七、检卵Ø自孵育后的第自孵育后的第自孵育后的第自孵育后的第4 4 4 4天开始检卵，每天一次天开始检卵，每天一次天开始检卵，每天一次天开始检卵，每天一次Ø孵育孵育孵育孵育4-54-54-54-5日于检卵灯上检查鸡胚受精与否及发育日于检卵灯上检查鸡胚受精与否及发育日于检卵灯上检查鸡胚受精与否及发育日于检卵灯上检查鸡胚受精与否及发育情况。

情况Ø未受精卵未受精卵未受精卵未受精卵：只见模糊的卵黄阴影，不见血管和鸡：只见模糊的卵黄阴影，不见血管和鸡：只见模糊的卵黄阴影，不见血管和鸡：只见模糊的卵黄阴影，不见血管和鸡胚痕迹胚痕迹胚痕迹胚痕迹Ø活胚：活胚：活胚：活胚：具有清晰的血管和鸡胚暗影，较大鸡胚还具有清晰的血管和鸡胚暗影，较大鸡胚还具有清晰的血管和鸡胚暗影，较大鸡胚还具有清晰的血管和鸡胚暗影，较大鸡胚还可见到胚动，但孵育可见到胚动，但孵育可见到胚动，但孵育可见到胚动，但孵育14141414、、、、15151515天以后胚动不明显，天以后胚动不明显，天以后胚动不明显，天以后胚动不明显，甚至无胚动甚至无胚动甚至无胚动甚至无胚动Ø死胚：死胚：死胚：死胚：血管昏暗模糊，没有胚动血管昏暗模糊，没有胚动血管昏暗模糊，没有胚动血管昏暗模糊，没有胚动八、接种前处理八、接种前处理Ø用检卵灯再次检查鸡胚活力，用铅笔画出气室和用检卵灯再次检查鸡胚活力，用铅笔画出气室和用检卵灯再次检查鸡胚活力，用铅笔画出气室和用检卵灯再次检查鸡胚活力，用铅笔画出气室和胚胎的位置，并在将要接种的部位做好记号胚胎的位置，并在将要接种的部位做好记号胚胎的位置，并在将要接种的部位做好记号。

胚胎的位置，并在将要接种的部位做好记号Ø对鸡胚进行消毒对鸡胚进行消毒对鸡胚进行消毒对鸡胚进行消毒九、鸡胚用于病毒培养的优缺点九、鸡胚用于病毒培养的优缺点（一）优点（一）优点Ø组织分化程度低，病毒易于增殖组织分化程度低，病毒易于增殖组织分化程度低，病毒易于增殖组织分化程度低，病毒易于增殖Ø可选择不同的日龄和接种途径可选择不同的日龄和接种途径可选择不同的日龄和接种途径可选择不同的日龄和接种途径Ø感染病毒的组织和液体中含大量病毒感染病毒的组织和液体中含大量病毒感染病毒的组织和液体中含大量病毒感染病毒的组织和液体中含大量病毒Ø容易采集和处理容易采集和处理容易采集和处理容易采集和处理Ø来源充足来源充足来源充足来源充足Ø设备和操作简便易行设备和操作简便易行设备和操作简便易行设备和操作简便易行（二）缺点（二）缺点Ø胚内可能污染细菌和病毒胚内可能污染细菌和病毒胚内可能污染细菌和病毒胚内可能污染细菌和病毒 沙门氏菌、禽白血病病毒、新城疫、禽脑沙门氏菌、禽白血病病毒、新城疫、禽脑沙门氏菌、禽白血病病毒、新城疫、禽脑沙门氏菌、禽白血病病毒、新城疫、禽脑脊髓炎病毒脊髓炎病毒脊髓炎病毒脊髓炎病毒Ø母源抗体母源抗体母源抗体母源抗体Ø许多病毒在鸡胚中增殖缺乏特异性的感染指针许多病毒在鸡胚中增殖缺乏特异性的感染指针许多病毒在鸡胚中增殖缺乏特异性的感染指针许多病毒在鸡胚中增殖缺乏特异性的感染指针十、接种途径十、接种途径1 1、尿囊腔接种、尿囊腔接种2 2、绒毛尿囊膜接种、绒毛尿囊膜接种 3 3、卵黄囊接种、卵黄囊接种4 4、眼球接种、眼球接种5 5、羊膜腔接种、羊膜腔接种 正粘病毒和副粘病毒正粘病毒和副粘病毒6 6、脑内接种、脑内接种 狂犬病毒狂犬病毒7 7、静脉接种、静脉接种 蓝舌病毒蓝舌病毒（一）卵黄囊接种法（一）卵黄囊接种法（一）卵黄囊接种法（一）卵黄囊接种法 主要用于虫媒披膜病毒以及鹦鹉热衣原体和立克次主要用于虫媒披膜病毒以及鹦鹉热衣原体和立克次主要用于虫媒披膜病毒以及鹦鹉热衣原体和立克次主要用于虫媒披膜病毒以及鹦鹉热衣原体和立克次氏体等的分离和增殖。

氏体等的分离和增殖氏体等的分离和增殖氏体等的分离和增殖方法一：方法一：方法一：方法一：1 1 1 1）取）取）取）取6-86-86-86-8日龄鸡胚，用检卵灯照视画出气室和胚胎位置日龄鸡胚，用检卵灯照视画出气室和胚胎位置日龄鸡胚，用检卵灯照视画出气室和胚胎位置日龄鸡胚，用检卵灯照视画出气室和胚胎位置后，垂直放置在卵座上后，垂直放置在卵座上后，垂直放置在卵座上后，垂直放置在卵座上( ( ( (大头向上大头向上大头向上大头向上) ) ) )2 2）用碘酊和酒精消毒气室）用碘酊和酒精消毒气室端端3 3）用钢锥在气室中央锥一）用钢锥在气室中央锥一小孔小孔4 4 4 4）））） 用注射器吸取病毒悬液，沿气室端所穿小用注射器吸取病毒悬液，沿气室端所穿小用注射器吸取病毒悬液，沿气室端所穿小用注射器吸取病毒悬液，沿气室端所穿小孔垂直刺入孔垂直刺入孔垂直刺入孔垂直刺入3cm3cm3cm3cm，注入，注入，注入，注入0.1-0.5ml0.1-0.5ml0.1-0.5ml0.1-0.5ml病毒液5 5 5 5）用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育，）用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育，）用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育，）用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育，每天翻卵每天翻卵每天翻卵每天翻卵1-21-21-21-2次，次，次，次，24h24h24h24h内死亡者废弃。

内死亡者废弃内死亡者废弃内死亡者废弃4 4）用钢锥打一小孔，将针头刺入约）用钢锥打一小孔，将针头刺入约1.5cm1.5cm，，注入病毒液注入病毒液0.1-0.5ml0.1-0.5ml5 5）用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵）用熔化的石蜡封孔，置孵卵箱内继续孵育，育，24h24h内死亡者废弃内死亡者废弃方法二：方法二：1 1））2 2）同一）同一3 3）将卵横放在卵座上，）将卵横放在卵座上，胚胎位置向下在卵长胚胎位置向下在卵长径的径的1/21/2处用碘酊和酒精处用碘酊和酒精消毒（二）绒毛尿囊膜接种（二）绒毛尿囊膜接种（二）绒毛尿囊膜接种（二）绒毛尿囊膜接种 主要用于痘病毒和疱疹病毒的分离和增殖主要用于痘病毒和疱疹病毒的分离和增殖主要用于痘病毒和疱疹病毒的分离和增殖主要用于痘病毒和疱疹病毒的分离和增殖方法一：方法一：方法一：方法一：1 1 1 1）取）取）取）取10-1210-1210-1210-12日龄鸡胚，画出气室部，消毒日龄鸡胚，画出气室部，消毒日龄鸡胚，画出气室部，消毒日龄鸡胚，画出气室部，消毒2 2 2 2）在气室端的卵壳上开一）在气室端的卵壳上开一）在气室端的卵壳上开一）在气室端的卵壳上开一1.5×1.5cm1.5×1.5cm1.5×1.5cm1.5×1.5cm的口的口的口的口3 3 3 3）用灭菌眼科镊子撕去一小片内壳膜）用灭菌眼科镊子撕去一小片内壳膜）用灭菌眼科镊子撕去一小片内壳膜）用灭菌眼科镊子撕去一小片内壳膜4 4 4 4）滴入接种物）滴入接种物）滴入接种物）滴入接种物5 5 5 5）用胶布或透明胶纸封闭切口）用胶布或透明胶纸封闭切口）用胶布或透明胶纸封闭切口）用胶布或透明胶纸封闭切口方法二：（要做人工气室）方法二：（要做人工气室）方法二：（要做人工气室）方法二：（要做人工气室）1 1 1 1、在胚胎附近近气室处，选择血管较少的部位，用、在胚胎附近近气室处，选择血管较少的部位，用、在胚胎附近近气室处，选择血管较少的部位，用、在胚胎附近近气室处，选择血管较少的部位，用电烙器在卵壳上烙一个直径约电烙器在卵壳上烙一个直径约电烙器在卵壳上烙一个直径约电烙器在卵壳上烙一个直径约3-4mm3-4mm3-4mm3-4mm的烤焦圈。

的烤焦圈的烤焦圈的烤焦圈2 2、用碘酊和酒精消毒后，、用碘酊和酒精消毒后，小心用刀尖撬起卵壳，造小心用刀尖撬起卵壳，造成卵窗3 3、在气室端中央钻一个、在气室端中央钻一个小孔4 4、用针尖挑破卵窗中心、用针尖挑破卵窗中心的壳膜，切勿损伤其下的的壳膜，切勿损伤其下的绒毛尿囊膜，滴加生理盐绒毛尿囊膜，滴加生理盐水于刺破处水于刺破处 5 5 5 5、用橡皮乳头紧贴于气室中央小孔上吸气，造、用橡皮乳头紧贴于气室中央小孔上吸气，造、用橡皮乳头紧贴于气室中央小孔上吸气，造、用橡皮乳头紧贴于气室中央小孔上吸气，造成气室内负压，使卵窗部位的绒毛尿囊膜下陷成气室内负压，使卵窗部位的绒毛尿囊膜下陷成气室内负压，使卵窗部位的绒毛尿囊膜下陷成气室内负压，使卵窗部位的绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室，此时可见滴于壳膜上的生理而形成人工气室，此时可见滴于壳膜上的生理而形成人工气室，此时可见滴于壳膜上的生理而形成人工气室，此时可见滴于壳膜上的生理盐水迅速渗入盐水迅速渗入盐水迅速渗入盐水迅速渗入6 6 6 6、用、用、用、用1ml1ml1ml1ml注射器滴注射器滴注射器滴注射器滴2-32-32-32-3滴接种物于绒毛尿囊膜上。

滴接种物于绒毛尿囊膜上滴接种物于绒毛尿囊膜上滴接种物于绒毛尿囊膜上7 7 7 7、用透明胶纸封住卵窗，或用玻璃纸盖于卵窗、用透明胶纸封住卵窗，或用玻璃纸盖于卵窗、用透明胶纸封住卵窗，或用玻璃纸盖于卵窗、用透明胶纸封住卵窗，或用玻璃纸盖于卵窗中，周围涂上熔化的石蜡密封，气室中央的小中，周围涂上熔化的石蜡密封，气室中央的小中，周围涂上熔化的石蜡密封，气室中央的小中，周围涂上熔化的石蜡密封，气室中央的小孔用石蜡密封孔用石蜡密封孔用石蜡密封孔用石蜡密封8 8 8 8、胚横卧于卵箱中，不许翻动，保持卵窗向上胚横卧于卵箱中，不许翻动，保持卵窗向上胚横卧于卵箱中，不许翻动，保持卵窗向上胚横卧于卵箱中，不许翻动，保持卵窗向上 （三）（三）（三）（三）        尿囊腔接种尿囊腔接种尿囊腔接种尿囊腔接种 主要用于正粘病毒和副粘病毒，如流感主要用于正粘病毒和副粘病毒，如流感主要用于正粘病毒和副粘病毒，如流感主要用于正粘病毒和副粘病毒，如流感病毒、新城疫病毒的分离和增殖病毒、新城疫病毒的分离和增殖病毒、新城疫病毒的分离和增殖病毒、新城疫病毒的分离和增殖1 1 1 1、选用、选用、选用、选用10-1110-1110-1110-11日龄的鸡胚，画出气室和胚位日龄的鸡胚，画出气室和胚位日龄的鸡胚，画出气室和胚位日龄的鸡胚，画出气室和胚位2 2 2 2、在气室接近胚体处用碘酊和酒精进行消毒、在气室接近胚体处用碘酊和酒精进行消毒、在气室接近胚体处用碘酊和酒精进行消毒、在气室接近胚体处用碘酊和酒精进行消毒3 3 3 3、用钢锥穿一小孔、用钢锥穿一小孔、用钢锥穿一小孔、用钢锥穿一小孔4 4 4 4、将注射器沿小孔插入、将注射器沿小孔插入、将注射器沿小孔插入、将注射器沿小孔插入0.5-1.0cm0.5-1.0cm0.5-1.0cm0.5-1.0cm，注入，注入，注入，注入0.1-0.1-0.1-0.1-0.2ml0.2ml0.2ml0.2ml接种物接种物接种物接种物5 5 5 5、用石蜡封口，并置孵卵箱中孵育，每天翻、用石蜡封口，并置孵卵箱中孵育，每天翻、用石蜡封口，并置孵卵箱中孵育，每天翻、用石蜡封口，并置孵卵箱中孵育，每天翻卵并检卵一次，卵并检卵一次，卵并检卵一次，卵并检卵一次，24h24h24h24h内死亡者废弃。

内死亡者废弃内死亡者废弃内死亡者废弃十一、十一、NDVNDV接种鸡胚后对鸡胚的影响接种鸡胚后对鸡胚的影响 NDVNDVNDVNDV以尿囊腔接种于以尿囊腔接种于以尿囊腔接种于以尿囊腔接种于9-109-109-109-10日龄鸡胚，强毒株日龄鸡胚，强毒株日龄鸡胚，强毒株日龄鸡胚，强毒株在在在在30-60h30-60h30-60h30-60h死亡，弱毒株死亡，弱毒株死亡，弱毒株死亡，弱毒株3-6d3-6d3-6d3-6d死亡死亡的鸡胚以死亡死亡的鸡胚以死亡死亡的鸡胚以死亡死亡的鸡胚以尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血，以头部、足尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血，以头部、足尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血，以头部、足尿囊液含毒量最高，胚胎全身出血，以头部、足趾、翅膀出血尤为明显趾、翅膀出血尤为明显趾、翅膀出血尤为明显趾、翅膀出血尤为明显十二、收毒十二、收毒 收毒前将鸡胚直立放置于收毒前将鸡胚直立放置于收毒前将鸡胚直立放置于收毒前将鸡胚直立放置于4℃4℃4℃4℃冰箱半小时以冰箱半小时以冰箱半小时以冰箱半小时以上，冻死胚胎，防止出血上，冻死胚胎，防止出血上，冻死胚胎，防止出血上，冻死胚胎，防止出血。

根据接种途径的不同，收获相应的材料根据接种途径的不同，收获相应的材料根据接种途径的不同，收获相应的材料根据接种途径的不同，收获相应的材料1 1 1 1、绒毛尿囊膜接种、绒毛尿囊膜接种、绒毛尿囊膜接种、绒毛尿囊膜接种 收获接种部位绒毛尿囊膜收获接种部位绒毛尿囊膜收获接种部位绒毛尿囊膜收获接种部位绒毛尿囊膜2 2 2 2、尿囊腔接种、尿囊腔接种、尿囊腔接种、尿囊腔接种 收获尿囊液（收获尿囊液（收获尿囊液（收获尿囊液（5-8ml5-8ml5-8ml5-8ml））））3 3 3 3、卵黄囊接种、卵黄囊接种、卵黄囊接种、卵黄囊接种 收获卵黄囊或胚体收获卵黄囊或胚体收获卵黄囊或胚体收获卵黄囊或胚体4 4 4 4、羊膜腔接种、羊膜腔接种、羊膜腔接种、羊膜腔接种 收获羊水（收获羊水（收获羊水（收获羊水（0.5-1ml0.5-1ml0.5-1ml0.5-1ml））））。