超氧化物歧化酶SOD的生产林志豪.ppt

超氧化物歧化酶（超氧化物歧化酶（SODSOD）的生产）的生产1目录•一.SOD的概况•二.SOD的运用•三.SOD的生产•四.SOD使用及生产时的注意事项•五.注意事项2一. SOD的概况•1.超氧化物歧化酶是一种广泛存在于动物、植物、微生物中的金属酶，是生物体内抗氧化酶系中主要成员之一•SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体内 6性极强的过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)会立即将其分解为完全无害的水这样，三种酶便组成了一个完整的防氧链条 •2.SOD的分类• 按其结合的金属离子可分为Fe-SOD、Mn-SOD、CuZn-SOD三种33.SOD的理化性质 3.1 SOD对氰化物和H2O2的敏感性 3.2 SOD的吸收光谱特性 3.3 SOD稳定性及影响因素4.SOD的作用　 1、抗氧化 　 2、预防慢性病及其并发症 　 3、抗衰老 　 4、抗疲劳 　 5、化疗副作用的消除剂 　 6、避免手术的二次伤害 7、化解妇女的氧化压力危机 　　 4二.SOD的运用•1．药物类，主要集中在炎症病患者，尤其治疗类风湿关节炎、慢性多发性关节炎、心肌梗塞、心血管病、肿瘤患者以及放射性治疗炎症病患者； •　　2．用于生化制药，作为一种生化酶制剂，广泛应用于临床和科研上，具有极强的抗衰老，抗肿瘤、 调节人体内分泌系统作用； •　　3．用于化妆品类，可添加在化妆品中，具有抗氧化抗腐蚀的优良性能。

以 SOD为主要成份的产品风靡世界，引发了化妆品历史上的一场革命，使人类永葆青春美丽梦想成真；• 　　4. 用作保健食品、饮料、如SOD糖、SOD口服液、SOD干啤等都非常畅销! 在饮料、糖果、糕点等食品中加入SOD既可利用其抗腐蚀性延长保质期，又可调节人体内分泌系统 5•　SOD被视为生命科技中最具神奇魔力的酶人体内的垃圾清道夫 SOD是氧自由基的自然天敌，是机体内氧自由基的头号杀手，是生命健康之本全球118位科学家发表联合声明：自由基是百病之源，SOD是健康之本体内的SOD活性越高，寿命就越长 6三.SOD的生产•1.SOD酶的提取 称取5克大蒜蒜瓣，加入石英砂研磨破碎细胞 后，加入pH7.8,0.05mol/L的磷酸缓冲液 （pH7.8）15ml，继续研磨20min,使SOD酶充分 溶解到缓冲液中，然后6000r/min冰冻离心 15min，放弃沉淀，取上清液 2.去除杂蛋白 上清液中加入0.25倍体积的氯仿——乙醇混合液 搅拌15min,6000r/min离心15min，放弃沉淀， 得到的上清液即是粗酶液7• 3.SOD酶的沉淀分离 粗酶液在搅拌下缓慢加入固体硫酸铵至饱和浓 度60%，持续搅拌15min，6000r/min离心 15min，得到SOD酶沉淀•4. 将沉淀溶入pH7.8，0.05mol/L的磷酸缓冲液 5mL中，然后6000r/min离心15min，放弃沉 淀，取上清液，用凝胶sephacylS-200进行纯 化，然后超滤浓缩。

•5. 用紫外分光光度计测定浓液的蛋白含量•6.• 将浓缩冷冻干燥后即得成品8 四、超氧化物歧化酶（SOD）的测定•原理 连苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放 出O2-,生成带色的中间产物在自氧化过程的初 始阶段，黄色中间产物的积累在滞后30-45s后 就与时间呈现性关系中间产物在325nm处有 强烈的光吸收，在有SOD存在时能催化生成O2 和H2O2，从而阻止了中间产物的积累，通过计 算就可以求出SOD的活力9•仪器 紫外分光光度计、pH计,离心机•试剂 ⑴0.05mol/L连苯三酚溶液：称取3.15g连苯三酚用 0.01mol/L盐酸溶液溶解并定容至500ml ⑵pH=8.3 Tris-HCl缓冲溶液 ①0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液: NH2C(CH2OH)3 121.14 取12.114g,溶解，定容至100ml 10 ②0.1mol/L盐酸: 取8.6(9)ml浓盐酸，稀释至 1000ml ③5 0毫升0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶 液 19.9_毫升0.1mol/L盐酸混匀并稀释至100 毫升。

• (保存温度: 常温密封避光保存)11•测定步骤 1、 称取6g样品，加于现在冰箱中放置的缓冲液60ml(样品的10倍，视情况定)，在冰浴中研磨成匀浆，四层纱布过滤，滤液经4000r/min 离心20min,取上清液用于酶活测定 2、连苯三酚自氧化速率的测定 取4.5ml缓冲液，在25℃水浴中保温15min,加入10 连苯三酚液，迅速摇匀 空白：取4.5ml缓冲液，在25℃水浴中保温15min, 加入10 缓12•冲液，迅速摇匀•倒入光径1cm的比色杯中，在325nm波长下于恒温池中每隔30s测A值一次•计算线形范围内，每1minA的增值，此即连苯三酚的自氧化速率，要求自氧化速率控制在0.07OD/min3.酶活测定测定方法与测连苯三酚自氧化速率相同，取1.5ml缓冲液，在25℃水浴中保温15min,加入3ml酶液，加入10 连苯三酚液，迅速摇匀空白：取1.5ml缓冲液，在25℃水浴中保温15min, 加入3ml酶液，加入10 缓冲液，迅速摇匀计算加酶后连苯三酚自氧化速率13 4.结果计算样品酶活单位表示，SOD酶活单位（U）/g鲜重样品酶活单位=式中——酶样品在325nm处每分钟光密度变化值 V——反应液体积 n——酶液稀释倍数（若酶液足够多，可不稀释即n为1） 14五.注意事项•1.SOD的安全性•大量试验和临床应用表明， 无论何种给药方式，除罕见的超敏反应外，SOD对人体无毒性。

虽然SOD是Mr在30 000以上的蛋白质， 但却未发现具有抗原性， 其原因也正在进一步研究中•2.SOD生产时的注意事项• 2.1 在破碎细胞时要注意安全，一定要破碎的彻底• 2.2 PH的控制力度很重要，以及在实验中的温度等• 2.3 要学会正确使用分光光度计15 谢谢！16。