医学微生物学 实验 脓汁和粪便标本中病原菌的检测-6 (3).ppt

医学微生物学实验 综合性实验三,空气的细菌学检查结果分析手指皮肤的细菌学检查结果分析,液体或固体标本菌落总数测定,可将标本作十倍、百倍、千倍、万倍稀释 分别取1ml注入直径9cm的灭菌平皿内 倾注46℃营养琼脂培养基大约15ml，混合均匀琼脂完全凝固以后，37℃培养48小时 选择菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准 将计数得到的菌落数乘以稀释倍数得出cfu/g(ml)手指皮肤的细菌学检查,第1格为洗手前， 第2格为洗手后， 第3格为消毒后， 第4格空白对照2人1块平板,上:甲、丙→常规洗手 下:乙、丁→标准洗手,甲（丙）,乙（丁）,丙,丁,脓汁和粪便标本中病原菌的检测（三） 菌落特征观察P11 细菌纯培养P10 脓汁和粪便标本检验（录像） 油镜使用方法（讲解）,细菌在固体培养基中的生长现象,菌落定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团 菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶血性 菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物菌落特征P11 大小：大(直径约3mm以上)，中(直径约1～3mm)，小(直径约1mm以下)。

形状：圆形，卵圆形、假根形、丝状、不规则等 边缘：整齐，锯齿状，波浪状，羽毛状 表面：隆起、平坦、中心凸起、脐形凹陷；光滑或粗糙、湿润或干燥 溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周围呈草绿色、不透明)，溶血(菌落周围出现透明环) 色素：一般为无色或灰白色，特殊色素有两类：脂溶性色素(菌落本身着色，培养基不着色)和水溶性色素(菌落及培养基均着色)细菌的溶血现象,根据细菌对血平板中红细胞的溶解能力可分为以下三种溶血类型,α（甲型）溶血:产生溶血素，不完全性溶血，在血平板上菌落周围有1～2mm半透明的草绿色溶血环 β（乙型）溶血: 呈完全性溶血，在血平板上菌落周围有2～4mm宽，界限分明，无色透明的溶血环 γ（丙型）溶血:不产生溶血素，在血平板上的菌落周围无溶血环细菌的纯培养,挑选单菌落: 脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落，菌落的色素是脂溶性的，是细菌本身的颜色菌落直径2mm左右、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明 粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落，菌落颜色是水溶性的，不是细菌本身的颜色，颜色的产生是因为大肠埃希菌分解乳糖产酸，酸使伊红与美蓝结合，形成紫黑色具有金属光泽、大而隆起、不透明的菌落；菌落直径2～3mm。

致病菌不分解乳糖，菌落呈伊红的颜色，很淡的粉红色，半透明，直径1～2mm ※选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落，进行接种37℃培养24小时,37℃培养24小时,,紫黑色,通常描述的菌落直径和颜色是特指培养18～24小时，菌落分布比较稀少的区域、典型的菌落 若培养物放置时间过长，或者平板上某个部位细菌比较多、菌落比较密集，大肠杆菌菌落颜色可能会发生改变因为大肠杆菌利用完乳糖以后，就要利用蛋白质，蛋白质分解大多产生碱性物质，中和了乳糖分解时产生的酸大肠杆菌菌落可能会由原来的紫黑色变成粉红色，和致病菌颜色一样 不要在菌落密集的区域挑选菌落，它可能是菌落形成单位（CFU），不是单菌落，很容易选错37℃培养36小时,,由紫黑色 变成粉红色,斜面接种法P10 （1组4支） 甲→普通平板→黄色菌落→1支斜面 乙→普通平板→白色菌落→1支斜面 丙→伊红美蓝→紫黑菌落→1支斜面 丁→伊红美蓝→粉红菌落→1支斜面 ★斜面标记：组号、黄色、白色、紫黑、粉红 ★在平皿底部玻璃上，画个大圈选菌落，同组同学认可，才能挑取 ★培养时间不得超过18小时斜面接种法P10 甲→黄色,乙→白色 丙→紫黑,丁→粉红。

标记：组号，颜色,,,,安全警告,接种环接种斜面一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒 气溶胶粒径＞100um沉降很快,＜50um在0.4s内扩散开,＜5um通过呼吸道直接到达肺泡 Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的 实验时应坐着，在酒精灯半径20厘米范围内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌奥林巴斯 CX21型 生物显微镜 （实验柜内，每人一台）,注意：只能横放，不得竖放奥林巴斯 CX21型 生物显微镜,使用须知,显微镜是精密光学仪器，请不要让其受到撞击，请小心操作 在搬运显微镜时，请按右图所示，以双手抓住镜臂孔的两侧，小心搬运 ★如果拿住载物台①和镜筒②等部位搬运的话，有可能会造成损坏显微镜各部件名称,开关与调整光强,开或关之前，必须将亮度调整旋钮②按箭头相反方向转动到最小位置，以免损坏灯泡 电源开关①拨到∣侧为开，拨到○侧为关闭 按箭头方向转动亮度调整旋钮②变亮，相反方向转动则变暗放置标本,按箭头方向转动粗调旋钮②降下载物台 按箭头方向拉开载物台标本夹③ ，自前向后将标本片放入平台，标本夹③ 轻轻放回原位。

转动上侧垂直移动杆④和下侧水平移动杆⑤，移动标本至光路中间载物台位置刻度,载物台上的刻度方便确定标本位置，标本移动后可以快速回到原位 水平刻度的标识位置以机械载物台的①位置来读取 垂直刻度的标识线以②的位置来读取聚焦,从显微镜的侧面观察，按箭头方向转动粗调旋钮①，使物镜③尽可能接近标本一边看目镜，一边慢慢逆箭头方向转动粗调旋钮①， 使载物台下降 看到标本以后，用微调旋钮②来正确对焦★10倍物镜的工作距离（WD，从物镜到标本的 距离）为10.5mm★油镜的WD为0.13mm调整瞳距,调整瞳距是调整双目间的距离，使两眼同时看到一个显微镜像，能防止观察时的疲劳 方法：一边看目镜，一边移动双目镜筒，让左右的视野一致 标识●的位置表示瞳距请记住自己的瞳距值，以便下次观察时调整调整屈光度数,调整观察者左右视力 以右眼看右侧的目镜，旋转粗微调旋转盘，对好焦距 以左眼看左侧的目镜，旋转屈光度调整环①，对好焦距调整聚光镜位置和孔径光阑,用聚光镜上下移动旋钮①，将聚光镜转到最上面 在孔径光阑环②上刻有物镜倍率（10倍，100倍等），观察时将与使用物镜相对应的倍率放到正面转换物镜,旋转物镜转盘①，将希望使用的物镜（10倍、100倍）转到标本的上方。

100倍浸油物镜使用方法,油镜放入光路之前，一定要在标本的观察部位上加一滴浸油 旋转物镜转盘，使油镜进入光路，用微调旋钮对好焦距 如果浸油内有气泡，会影响观察，可稍微旋转物镜转盘，使油镜来回通过1～2次浸油，排除油内气泡显微镜油镜的使用P13,10×物镜→标本位置→滴加香柏油→100×油镜→浸泡油中,几乎与标本接触（工作距离0.13mm）→细调节调焦，观察物像→记录结果→关闭电源 油镜处理：擦镜纸拭去香柏油 →擦镜纸沾少许乙醇和乙醚（7:3）混合液擦拭→擦镜纸擦拭油镜 显微镜罩上防尘罩→ 横放在实验柜内 ★(顺德校区）实验台两侧的电源插座，只能插入一个插头，请选择离你最近的电源插座 ★（校本部）实验台中间，三个位的插座，中间那位插孔没有电，不能使用，只能用两侧的插座细菌的显微镜检查法,显微镜：光学显微镜 目镜：10倍 物镜：油镜头（90或100倍） 放大倍数：10×90或100＝900或1000 镜油：香柏油或石蜡油 香柏油折射率（n＝1.515），玻片折射率（n＝1.52），石蜡油（n＝1.46），空气（n＝1.00） ★油镜使用完毕必须擦拭油镜头油,透镜,光线,载玻片,思考题,在微生物学实验中,怎样才能避免杂菌的污染? 空气的卫生标准规定如何? 你的实验结果说明了什么问题? 怎样从医务人员手指上分离和鉴定金黄色葡萄球菌? 菌落特征主要描述哪几方面问题？任何挑选单菌落？,医学微生物学实验 综合性实验三、一,空气、手指皮肤的细菌学检查结果分析 脓汁和粪便标本中病原菌的检测 菌落特征观察P11 细菌纯培养P10（纯培养不得超过18小时） 油镜使用方法（讲解） 脓汁标本检验 （录像） 肠道致病菌的分离鉴定（录像）,常用器材摆放顺序：电源插座→试管架→酒精灯→污物盘。

试管架上器材：按接种针、接种环、油性笔和打火机的顺序，分别放置在试管架中间两行，靠近电源插座一侧※器材使用以后，必须放回原处，依次摆整齐实验室器材 整齐有序,。