革兰氏染色镜检的操作规程.pdf

51 化验室标准操作规程编号： zml—jyk—xm--019 革兰氏染色镜检的操作规程第 1 页共3 页 起草人庄红梅起草日期2005．12 生效日期2005.12 审核人张庆芳审核日期2005．12 颁布后重审日期2005.12 批准人许清泉批准日期2005．12 颁布部门检验科 颁布部门走马岭中心卫生院革兰氏染色镜检的操作规程1. 目的：鉴定 G阳性菌 .G 阴性菌（球菌、杆菌、真菌） 指导临床 用药 2. 原理： 革兰氏染色法是1884 年由丹麦病理学家C.Gtam所创立的，此方法 可将所有的细菌分G+和 G-两大类， G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶 解的类脂质，而且肽聚糖层较薄，交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶 解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易 于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖 层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染性的颜色 3. 实验器材：载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜 4. 试剂： 4.1 试剂来源：购买，四川迈克 4.2 试剂合组成 : R1结晶紫 1χ10ml R2碳酸钠 1χ10 ml R3碱性碘液 1 χ10ml R4丙酮酒精 1χ20ml R5碱性复红 1χ10ml 5. 标本采集与处理： 5.1 阴道, 子宫等分泌物应由医生采集, 收集于无菌试管内送检。

5.2 载玻片的预处理 : 5.2.1 载玻片用前以９５％乙醇擦拭脱脂，经干燥、清洁、无油污、 无划痕的新载玻片制备涂片 5.2.2 在玻片背面一端的1/3 处注明编号 5.3 涂片： 5.3.1 用棉签可直接在玻片上均匀涂抹. 5.3.2 菌液涂片时 , 用接种环沾取菌液 , 点在玻片上 . 52 化验室标准操作规程编号： zml—jyk—xm--019 革兰氏染色镜检的操作规程第 2 页共 3 页 起草人庄红梅起草日期2005．12 生效日期2005.12 审核人张庆芳审核日期2005．12 颁布后重审日期2005.12 批准人许清泉批准日期2005．12 颁布部门检验科 颁布部门走马岭中心卫生院 5.3.3菌落涂片时 , 先取生理盐水一滴置玻片上, 用接种针挑取菌落 , 在盐水中涂布 6. 染色方法 : 6.1 将标本均匀涂布于玻片上, 自然干燥 , 火焰固定 6.2 冷却后加 R1 、R2各两滴初染 30 秒后水洗 6.3 用 R3媒染 30秒. 水洗后用 R4脱色至无兰色脱落为止 (约有 5-10 秒), 水洗 5.4 用 R5复染 5 秒, 水洗, 待干,镜检 7. 镜检: 7.1 取已干燥的涂片 , 用低倍镜览片 ,再用高倍 , 最后用油镜观察 , 并 在已干燥的涂片滴1-2 滴香柏油 ,仔细观察 . 7.2 判断菌体的革兰氏染色反应性, 呈紫色为 G+菌, 呈红色为 G-. 8. 报告方式 : 检出革兰氏阳性球菌 , 革兰氏阳性球菌 . 检出革兰氏阴性球菌，革兰氏阴性球菌。

9. 实验完后的处理 : 9.1 显微镜头的处理 : 用擦镜纸将油镜头的油擦去, 再用擦镜纸沾少 许二甲苯将镜头擦2-3 次, 最后用干净的擦镜纸将镜头擦2-3 次. 注意向 一个方向擦拭 . 9.2 废弃标本和污物的处理 : 9.2.1染色玻片放入 5%84消毒液中浸泡 30-60 分钟, 消毒液要每天 更换. 9.2.2废弃标本及污物应弃于有盖的污物桶内, 由专人收并送焚烧 炉内彻底焚化 . 10. 注意事项 : 10.1 涂片应均匀 , 厚薄适度 , 自然干燥后再加热固定 . 10.2 脱色要至无兰色脱落为止. 53 化验室标准操作规程编号： zml—jyk—xm--019 革兰氏染色镜检的操作规程第 3 页共 3 页 起草人庄红梅起草日期2005．12 生效日期2005.12 审核人张庆芳审核日期2005．12 颁布后重审日期2005.12 批准人许清泉批准日期2005．12 颁布部门检验科 颁布部门走马岭中心卫生院 10.3 复染时间不可过长 , 以免细菌均染成革兰氏阴性, 定期检查各 种染液质量 , 以免发生误差 . 11. 临床意义 . 11.1 鉴别细菌 11.2 选择药物 12. 参考文献 : 全国临床检验操作规程(中华人民共和国卫生部医政司) 修改状态 / 日期修 改 记 录修改代号修改单号修改人 / 日期。