动物实验基本操作技术教材课件.ppt

ChapterChapter 9 9动物实验基本操作技术动物实验基本操作技术5/12/20221实验动物的抓取与固定性别鉴定年龄的大致判断妊娠检查分组与编号本章主要内容本章主要内容本章主要内容本章主要内容常规采血方法给药途径与方法麻醉方法处死方法5/12/20222一、大、小鼠的抓取固定第一节 实验动物的抓取与固定5/12/20223小鼠固定盒固定5/12/20224大鼠固定盒固定5/12/20225二、豚鼠的抓取固定法5/12/20226三、家兔的抓取固定法5/12/202275/12/20228一、大、小鼠的性别鉴定第二节 性别鉴定5/12/20229Female Male 二、兔的性别鉴定5/12/202210一、大、小鼠一、大、小鼠 1. 1. 根据形态鉴定日龄（大、小情况基本一样）根据形态鉴定日龄（大、小情况基本一样）第三节 年龄的大致判断日龄/d外观形态特征1仔鼠裸体鲜红3耳壳露出表皮4脐带瘢痕脱落5能翻身8能爬行5/12/202211日龄/d外观形态特征10能听到声音911全身被白毛，门齿长出1315眼皮张开，能跳跃，能抓取东西18以后能自行采食，独立生活5/12/2022125/12/2022135/12/2022145/12/2022155/12/2022165/12/2022175/12/202218 2. 2. 根据体重鉴定日龄根据体重鉴定日龄 小鼠日龄与体重的对应小鼠日龄与体重的对应日龄/d初生初生 5 10 15 20 25 305 10 15 20 25 30体重/g 1.8 4.0 6.0 11.0 15.0 21.0 1.8 4.0 6.0 11.0 15.0 21.0 21.021.05/12/202219 大鼠日龄与体重的对应大鼠日龄与体重的对应日龄/d初生 10 20 30 40 体重/g67 1725 3550 5590 100150日龄/d 50 60 70 80体重/g150210 170240 210270 2403205/12/202220二、豚鼠一般老年豚鼠牙齿和趾爪长，被毛稀疏无光泽，眼神呆滞，行动迟缓。

而年轻豚鼠牙齿短白，爪短软，眼睛圆亮，行动敏捷，被毛有光泽，且紧贴身体同样，也可根据体重来推断大致年龄同日龄豚鼠，雌性体重略高于雄性与大鼠一样，其体重受多种因素的制约实验对年龄要求比较严格时，必须由卡片记录提供准确年龄日龄/d 初生 7 20 30 60 体重/g6080 100120 150200 170220 240300日龄/d 90 120 180体重/g330400 400470 5206005/12/202221三、家兔家兔的门齿和爪随年龄增长而增长，是年龄鉴别的重要标志青年兔门齿洁白，短小，排列整齐；老年兔门齿暗黄，厚而长，排列不整齐，有时破损白色家兔趾小基本呈红色，尖端呈白色1岁家兔红色与白色长度相等；1岁以下，红多于白；1岁以上，白多于红还可根据趾爪的长度与弯曲度来区别青年兔趾爪较短，直平，隐在脚毛中，随年龄的增长，趾爪露出于脚毛之外，而且爪尖钩曲另外，家兔皮薄而紧，眼神明亮，行动活泼的为青年兔；皮厚而松，眼神颓废，行动迟缓的为老年兔5/12/202222五、犬犬的年龄主要以牙齿的生长情况、磨损程度、外形颜色等情况综合判定仔犬在出生后十几天即开始生出乳齿，2个月以后开始由门齿犬齿臼齿顺序逐渐更换为恒齿，8l0个月齿换齐。

但犬齿需要1岁半以后才能长坚实饲养场饲养的品种犬，可以根据记录，明确了解年龄，而收购的杂种犬就无法知道确切年龄实际中，可根据犬齿更换和磨损情况，估计犬的年龄5/12/202223年龄 犬齿更换和磨损情况2个月以下仅有乳齿(白、细、尖)24个月更换门齿46个月更换犬齿(白，牙尖圆钝)610个月更换臼齿1岁牙长齐，洁白光亮门齿有尖突2岁下门齿尖突部分磨乎3岁上、下门齿尖突大部分磨平45岁上、下门齿开始磨损呈微斜面，并发黄68岁门齿磨成齿根，犬齿发黄、磨损910岁唇部、胡须发白10岁以上门齿磨损，犬齿不齐全，牙根黄，唇边胡须全白5/12/202224第四节 妊娠检查雌性动物妊娠后会发生一系列的复杂变化为了在配种以后能及时掌握雌性动物是否妊娠、妊娠的时间及胎儿和生殖器官的异常情况，采用临床和实验室的方法进行检查，称为妊娠检查，又称妊娠诊断(pregnancydiagnosis)通过妊娠检查，可以及时地对雌性动物加强护理或再次配种，以保护母体和胎儿的正常发育，避免胎儿早期死亡和流产及减少繁育时间的损失妊娠检查不但要求准确，且及早确诊更为重要5/12/202225外部检查法摸胎法阴道检查法直肠检查法超声波检查法孕酮含量测定法青蛙试验妊娠检查方法有5/12/202226第五节 分组与编号动物实验之前，必须对实验动物进行随机分组和编号标记，这是做好实验和实验记录的前提。

一、随机分组（一）当分为二组时例：设有雄性Wistar大鼠12只，按体重大小依次编为1，2，3，12号，试用完全随机的方法，分为甲、乙两组分组方法：假设所产生的点是随机数字表上第21行第31列的78，则从78开始，由上向下抄12个随机数字，如下：5/12/202227动物编号：123456789101112随机数字：78386957910374566826541组别：乙乙甲甲甲乙甲甲乙乙甲甲现在以随机数字的奇数代表甲组，偶数代表乙组，则编号为3、4、5、7、8、11、12号分入甲组，而1、2、6、9、10号分人乙组因两组数字不等，继续用随机方法将甲组多余的一只调整给乙组，从上面最后一随机数字41，接下去抄一个数为62，以7除之(因甲组原分配7只)得6，即把原分配在甲组的第6个甲(即11号大鼠)调入乙组5/12/202228如果甲组多两个，则接下去抄两个数分别以8，7除之，余数即指要调入乙组的第几个甲，余此类推最后各组的鼠数就相等了调整后各组鼠的编号为：组别鼠的编号甲组3457812乙组126910115/12/202229(二)当分为三组时例：设有雄性的SD大鼠12只，按体重大小依次编为1，2，3，12号，试用完全随机的方法，分为A、B、C三组。

分组方法：假设所定的点是随机数字表第40行17列的08，则从08开始，自左到右抄12个随机数字：动物编号：123456789101112随机数字：082701501529393943796910除3余数：201202001101组别：BCABCBCCAACA调整组别：B5/12/202230以3除各随机数字，若余数为l，即该鼠归A组；余数为2，归人B组；余数为3，归入C组结果A组为4只，B组为3只，C组为5只C组多一只应调入B组方法同上仍采用随机方法；从10后面接着抄，为61除以5，余数为1，则将第一个C，即第2号鼠调入B组调整后各组鼠的编号如下：组别鼠的编号A组391012B组l246C组57811对于将动物随机分为四组或更多组原理基本一致5/12/202231（三）当每个动物一组时：例：设有A，B，C，D，E，F代表的6只家兔，试用完全随机法将其每只分为一组分组方法：从随机数字表上用铅笔任指一点，若为第21行第17列的33，则从33向左抄用6个数字，然后分别以6，5，4，3，2，l除之凡除不尽的，即将余数写下除尽的，写余数时即将其除数写下如下：5/12/202232随机数字3346952687除数654321余数311121随机排列CABDFE上列第一个随机数字余数为3，意即将6个字母中列在第三位的字母C写在该数下，第二个数宇的余数为1，即在剩下的5个字母列在第一位的A写在该数字下面，余此类推。

5/12/202233二、编号标记方法实验动物分组后，为了区分、观察并记录每个个体的反应情况，必须给每只动物进行编号标记1体表颜料着色法一般对短期试验的白色动物可用颜料涂搽被毛的方法标记常用的涂染化学药品有：红色：0.5中性红或品红溶液；黄色：35苦味酸溶液或8090苦味酸酒精饱和液；咖啡色：2硝酸银溶液；黑色：煤焦油酒精溶液5/12/202234 左前腿上部为1，左腰部为2，左后腿为3，头部为4，背部为5，尾基部为6， 右侧从前至后依次为7、8、9用黄色表示个位数，红色表示十位数5/12/202235 2个体耳号标记法 3. 个体断趾标记法 4. 耳号钳标记法 5. 挂牌法5/12/202236第六节 常规采血方法一、大、小鼠的采血方法1颈静脉或颈动脉采血2股静脉或股动脉采血3心脏采血4尾部采血5眼眶采血6断头取血5/12/202237颈静脉或颈动脉采血尾部采血5/12/202238心脏采血5/12/202239二、豚鼠的采血方法1耳缘剪口采血2心脏采血方法同大、小鼠3股动脉采血方法同大、小鼠4后肢背中足静脉采血5/12/202240三、家兔的采血方法1心脏采血2耳中央动脉采血3耳静脉采血5/12/202241四、狗、猫的采血方法1后肢外侧跗外静脉、内侧隐静脉、前肢内侧皮下头静脉采血2股动脉采血3.心脏采血同大、小鼠心脏采血4耳缘静脉采血同兔耳缘静脉采血5/12/202242采血方法的选择，决定于实验目的所需血量以及动物种类。

凡用血量较少的检验如红、白细胞计数、血红蛋白的测定，血液涂片以及酶活性微量分析法等，可刺破组织取毛细血管的血当需血量较多时可作静脉采血静脉采血时，若需反复多次，应自远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉而研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱，需要比较动、静脉血氧分压、二氧化碳分压和血液pH值以及K+、Na+、Cl-离子浓度，必须采取动脉血液5/12/202243采血场所有充足的光线；室温夏季最好保持在2528，冬季，1520为宜；采血用具有采用部位一般需要进行消毒；采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥；若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂采血时要注意5/12/202244部位 动物种类尾静脉大鼠、小鼠耳静脉兔、狗、猫、猪、山羊、绵羊眼底静脉丛兔、大鼠、小鼠d舌下静脉兔e腹壁静脉青蛙、蟾蜍f冠、脚蹼皮下静脉 鸡、鸭、鹅取少量血5/12/202245部位 动物种类动物种类后肢外侧皮下小隐静脉狗、猴、猫前肢内侧皮下头静脉狗、猴、猫耳中央动脉兔颈静脉狗、猫、兔心脏豚鼠、大鼠、小鼠断头大鼠、小鼠翼下静脉鸡、鸭、鸽、鹅颈动脉鸡、鸭、鸽、鹅取中量血5/12/202246部位 动物种类股动脉、颈动脉狗、猴、猫、兔心脏狗、猴、猫、兔颈静脉马、牛、山羊、绵羊摘眼球大鼠、小鼠取大量血5/12/202247动物种类最大安全采血量(ml)最小致死采血量(ml)小鼠0.20.3大鼠12豚鼠510兔1040狼狗100500猎狗50200猴15604.最大安全采血量与最小致死采血量5/12/202248第七节 给药途径与方法在动物实验过程中，应根据不同的实验目的、动物种类、药物类型来决定动物的给药途径与方法。

动物的给药方法主要分为注射法和投入法两种，不同方法按给药途径又分为很多具体类型注射法分为：皮下注射、肌肉注射、腹腔注射、脑膜下注射、脑内注射、胸腔内注射、腰椎内注射、静脉注射、关节腔注射和心内注射投入法可分为：鼻腔内投入、胃腔内投入、肠管内投入、气管内投入和经口腔投入以下将各种动物的主要给药途径和方法做一介绍5/12/202249（一）皮下注射注射时以左手拇指和食指提起皮肤，将连有5（1/2）号针头的注射器刺入皮下皮下注射部位一般狗、猫多在大腿外侧，豚鼠在后大腿的内侧或小腹部；大白鼠可在侧下腹部兔在背部或耳根部注射蛙可在脊背部淋巴腔注射二）皮内注射皮内注射时需将注射的局部脱去被毛，消毒后，用左手拇指和食指按住皮肤并使之绷紧，在两指之间，用结核菌素注射器连4(1/2)细针头，紧贴皮肤表层刺入皮内，然后再向上挑起并再稍刺入，即可注射药液，此时可见皮肤表面鼓起一白色小皮丘5/12/202250（四）腹腔注射用大、小白鼠做实验时，以左手抓住动物，使腹部向上，右手将注射针头于左（或右）下腹部刺入皮下，使针头向前。