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采用HPLC法测定羌黄颈康丸中的葛根素含量 　　羌黄颈康丸是漯河市第一人民医院制剂室配制的特色制剂，由羌活、姜黄、秦艽、当归、柴胡、赤芍、防风、桂枝、黄芪、葛根、黄芩等 11 味中药制成，具有祛痹止痛、益气活血的功效，临床上主要用于治疗风寒湿痹、气血不足所致的颈椎病　　文献报道，葛根素具有包括抗氧化、抗缺血再灌注损伤、心肌保护、改善血液流变学指标等多种生理功能，对心脑血管疾病具有很好的医疗保健作用原有的河南省批准质量标准没有含量测定项，为提高该药的质量标准，本实验参考有关文献，采用 HPLC 法测定葛根素的含量，实验结果表明，该方法简便、快速、准确，能够有效控制制剂质量　　1 仪器与试药　　Waters e2695 型高效液相色谱仪，empower 液相色谱工作站，Waters 2489 紫外检测器，葛根素对照品（批号：110752-200410，由中国药品生物制品检定所提供，含量测定用）羌黄颈康丸由漯河市第一人民医院提供（批号：20131212、20131216、20131218、20140402、20140404、20140406）甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。

　　2 方法与结果　　2.1 色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶 Waters C18（4.6mm150mm,5μm）；柱温：35℃，流动相：甲醇∶水（21∶79）；流速：1.0ml/min，检测波长：250nm，理论板数按葛根素峰计算应不少于 2000　　2.2 对照品溶液的制备：精密称取葛根素对照品适量，加 50%乙醇制成 1ml 含 15μg 的溶液，即得精密吸取 5μl，进样，测定，结果见图 1图1】　　　　2.5 线性关系考察：精密称取葛根素对照品 5.06mg，置 50ml 量瓶中，加 50%乙醇溶解并定容至刻度，即得（每 1ml 含葛根素101μg）精密吸出上述溶液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分别置于 10ml 量瓶中，加 50%乙醇至刻度，摇匀分别精密吸取 5μl，按上述色谱条件进样，测定峰面积以峰面积（Y）为纵坐标，葛根素进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程为：Y=6.49107X-4.84106，r=0.9996 （n=6），结果表明葛根素在0.0505～0.303μg 范围内与峰面积线性关系良好　　2.6 稳定性试验：取批号 20140402 羌黄颈康丸，制备供试品溶液，在室温下放置 0、1、2、4、8、12h 后分别进样，测定峰面积，结果峰面积平均值为 625967，RSD 为 1.6%，表明待测组分浓度在12h 内无明显变化，化学性质稳定。

　　2.7 精密度试验：取批号 20140402 羌黄颈康丸，制备供试品溶液，按照上述色谱条件，分别精密吸取 5μl，连续进样 6 次，测定峰面积结果峰面积平均值为 628541，RSD 为 0.5%（n=6）,结果表明仪器精密度良好　　2.8 重复性试验：取同一批号（批号：20140402）羌黄颈康丸，依法平行制备 5 份供试品溶液并测定其含量，结果求得羌黄颈康丸中葛根素平均含量为 0.786mg/g，RSD 为 0.9%（n=5）　　2.9 回收率试验：取已知葛根素含量（0.786mg/g）的羌黄颈康丸（批号：20140402）样品 6 份，研细，取约 1g，精密称定，分别精密加入葛根素对照品约 0.8mg，照供试品溶液的制备方法制备溶液并依法测定峰面积，计算回收率结果见表 1表1】　　　　结果表明，本方法回收率较好　　2.10 样品含量测定：分别取 3 个批次的样品，依法制备并测定其葛根素的含量，结果见表 2表2】　　　　3 讨 论　　3.1 检测波长的选择：取葛根素对照品适量，加 50%乙醇制成1ml 含 30μg 的溶液，在 200～400nm 波长范围内进行紫外扫描，结果在 250nm 处有最大吸收，故选择 250nm 作为检测波长。

　　3.2 提取方法的选择：参照《中国药典》，根据葛根素的性质，选择 50%乙醇作为提取溶剂，进行超声和回流提取两种方法的比较，考察结果见表 3、4表3-4】　　　　结果表明，超声提取 30min 后，样品中葛根素已基本提取完全，提取率可达到回流提取的 95%以上，鉴于超声处理的方法简便易行，故采用超声提取的方法　　3.3 流动相的选择：参照清眩治瘫丸（《中国药典》2010 年版一部）含量测定方法及有关文献，本实验采用甲醇∶水（21∶79）为流动相，在色谱图中，葛根素色谱峰与相邻组分峰分离度良好，峰形符合要求，背景无干扰，操作简单可行　　参考文献　　　　[1] 夏华玲. 葛根素的药理作用研究进展 [J]. 时珍国医国药，2006，17（3）：434-435.　　[2]刘宏，王兰英，任建国.高效液相法测定脑栓康复浓缩丸葛根中葛根素的含量[J].北方药学，2013，10（1）：6-7.　　[3]阮毅铭.HPLC 法测定葛根配方颗粒中葛根素的含量[J].黑龙江医药，2008，21（5）：19-21.　　[4]国家药典委员会.中国药典[S].第 1 部，北京：化学工业出版社，2010.-全文完-。