肉汤琼脂培养基使用说明.doc
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编号：022020 品种名称：营养琼脂(普通肉汤琼脂培养基)(Nutrient Agar) 用 途： 用于细菌总数测定、保存菌种及纯培养，也可用于消毒效果测定(GB/T4789.28-2003 中4.7 ，GB/T4789.2-2003，GB15979-2002和GB15981-1995) 原 理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂图鉴： 配方(每升)： 蛋白胨10g 牛肉膏粉3g 氯化钠 5g 琼脂15g 最终pH 7.3±0.2 使用方法： 1、 称取本品33g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用 2、 (食品)以无菌操作称取检样25克(或25mL)，放入含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的玻璃三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)，充分振摇，即为1：10的均匀稀释液依次做1：100，1：1000……稀释液 3、 根据对样品污染情况的估计，选择2—3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿。
4、 稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃左右的培养基注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液的灭菌平皿内作空白对照待琼脂凝固后，倒置于36±1℃温箱中培养48±2h 5、 观察结果 6、 菌落计数方法： 做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏，在计下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数 7、 菌落计数的报告： 选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数平皿内如有我链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅有一条链，可视为一个菌落;如有不同来源的几条链，则应将每条链视为一个菌落计 A：稀释度的选择： 应选择平均菌落数在30-300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之(见附表) 若有两个稀释度.其生长的菌落数无均在30-300之间，则视两者之比如何来决定。
若其比值小于或等于2，则应报告其平均数;若大于2则报告其较小的数字(见表中例2及3) 若所有稀释度的平均菌落数均大于300则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例4) 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最底的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例5) 若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最底稀释倍数报告之(见表中例6) 若有稀释度的平均菌菌落数均不在30-300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表中例7) 菌落数的报告： 菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位数字后面的有效数值，以四舍五入法计算为了缩短数字后面的零数，也可以用10的指数来表示(见表中“报告方式栏”) 稀释度选择及菌落数报告方式 例次 稀释液及菌落数 两稀释液之比 菌落总数个/g或mL 报告方式个/g或mL 10-1 10-2 10-3 1 多不可计 164 20 —— 16 400 16 000或1.6×104 2 多不可计 295 46 1.6 37 750 3 8000或3.8×104 3 多不可计 271 602.2 —— 27 100 27 000或2.7×104 4 多不可计 多不可计 313 —— 31 300 31 0000或3.1×105 5 27 11 5 —— 270 270或2.7×102 6 0 0 0 —— <1×10 <10 7 多不可计 305 12 —— 30 500 31 000或3.1×104 质量控制： 本品接种下列菌株，置于36±1℃恒温箱中培养48±2h，结果如下： 菌 名 菌 号 生长状况 菌落特征 大肠埃希氏菌 ATCC25922 良好 白色—灰白色，圆形，边缘整齐，表面光滑，湿润。
金黄色葡萄球菌 ATCC6538 良好 黄色，圆形，边缘整齐，表面光滑、湿润，不透明 贮 存：贮存于避光、阴凉干燥处，用后立即旋紧瓶盖贮存期三年 规 格： 250g（来源：广东环凯微生物）。
