牛的牛小肠碱性磷酸酶酶联免疫分析.docx

牛的牛小肠碱性磷酸酶（）酶联免疫分析（）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定牛血清，血浆及相关液体样本中类牛小肠碱性磷酸酶（）的含量实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛的牛小肠碱性磷酸酶（）水平用纯化的牛的牛 小肠碱性磷酸酶（）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入类牛小肠 碱性磷酸酶（），再与标记的类牛小肠碱性磷酸酶（）抗体结合，形成抗体抗原酶标抗体复合物， 经过彻底洗涤后加底物显色在酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色 颜色的深浅和样品中的类牛小肠碱性磷酸酶（）呈正相关用酶标仪在波长下测定吸光度 （值），通过标准曲线计算样品中牛的牛小肠碱性磷酸酶（）浓度试剂盒组成：试剂盒组成孔配置孔配置保存说明书份份封板膜片（）片（）密封袋个个酶标包被板XX°C保存标准品：X瓶X瓶°C保存标准品稀释液X瓶X瓶C保存酶标试剂X瓶X瓶C保存样品稀释液X瓶X瓶C保存显色剂液X瓶X瓶C保存显色剂液X瓶X瓶C保存终止液X瓶X瓶C保存浓缩洗涤液（X倍）X瓶（X倍）X瓶C保存样本处理及要求:.血清：室温血液自然凝固分钟，离心分钟左右（转分）仔细收集上清，保存过程中如出 现沉淀，应再次离心。

血浆：应根据标本的要求选择或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合分钟后，离心分钟左右（转分） 仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心尿液：用无菌管收集，离心分钟左右（转分）仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成, 应再次离心胸腹水、脑脊液参照实行细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集离心分钟左右（转分）仔细收集 上清检测细胞内的成份时，用（）稀释细胞悬液，细胞浓度达到万左右通过反复冻 融，以使细胞破坏并放出细胞内成份离心分钟左右（转分）仔细收集上清保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心组织标本：切割标本后，称取重量加入一定量的，用液氮迅速冷冻保存备用标本融 化后仍然保持C的温度加入一定量的（），用手工或匀浆器将标本匀浆充分离心分钟 左右（转分）仔细收集上清分装后一份待检测，其余冷冻备用标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验若不能马上进 行实验，可将标本放于C保存，但应避免反复冻融..不能检测含的样品，因抑制辣根过氧化物酶的（）活性操作步骤1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔孔，在第一、第二孔中分别加标准品 卩，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液卩，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取卩 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液卩，混匀；然后在第 三孔和第四孔中先各取卩弃掉，再各取卩分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六 孔中分别加标准品稀释液，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取卩分别加到第七、第八 孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液卩，混匀后从第七、第八孔中分别取卩 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液卩，混匀后从第九第十孔中 各取卩弃掉。

稀释后各孔加样量都为卩，浓度分别为，，，，）2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样 品孔在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液卩，然后再加待测样品卩（样品最 终稀释度为倍）加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀3. 温育：用封板膜封板后置C温育分钟4. 配液：将（的倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水（的倍）倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置秒后弃去，如此重复 次，拍干6. 加酶：每孔加入酶标试剂卩，空白孔除外7. 温育：操作同8. 洗涤：操作同9. 显色：每孔先加入显色剂卩，再加入显色剂卩，轻轻震荡混匀，C避光显色分钟.10. 终止：每孔加终止液卩，终止反应（此时蓝色立转黄色）11. 测定：以空白空调零，波长依序测量各孔的吸光度（值）测定应在加终止液后分钟以 内进行注意事项：1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完， 板条应装入密封袋中保存2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免实验误差。

一次加样时间最好 控制在分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔如标本中待测物质含量过高（样本值大于 标准品孔第一孔的值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（倍）后再测定，计算时请最 后乘以总稀释倍数（XX）O5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染6. 底物请避光保存7. 严格按照说明书的操作进行，实验结果判定必须以酶标仪读数为准8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理9. 本试剂不同批号组分不得混用 .如与英文说明书有异，以英文说明书为准计算：以标准物的浓度为横坐标，值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的值由标 准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与值计算出标准曲线的直线回 归方程式，将样品的值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓 度试剂盒性能：.样品线性回归与预期浓度相关系数值为以上批内与批见应分别小于和 检测范围：保存条件及有效期： .试剂盒保存:；°C•有效期：个月。