动物传染病学：实验八血凝和血凝抑制试验.ppt

实验八 血凝和血凝抑制试验（Hemagglutination and Hemagglutination Inhibition, HA and HI）,能凝集红细胞的病原,禽流感病毒 新城疫病毒 传传染性支气管炎病毒（胰酶，磷脂酶C） EDS76 副鸡嗜血杆菌 鸡毒支原体,血凝和血凝抑制试验的原理 实验操作步骤和结果判定一、实验目的,二、实验原理（一）血凝试验（HA）,一些病毒能够促使动物如鸡、鹅、豚鼠和人的红细胞发生凝集，叫做血凝试验HA试验的原理图,+ + + + -,血凝试验结果判定,1:21 1:22 1:23 1:24 1:25 1:26 1: 27 1:28 1:29 1:210 1:211 1:212,血凝价：能使红细胞产生50%凝集的病毒最高稀释度Va Vb Vc Vd,（二）血凝抑制试验（HI）,当病毒悬液中加入特异性抗体时，这种红细胞凝集的现象就被抑制，称红细胞凝集抑制试验，即血凝抑制试验HI试验的原理图,三、实验材料,鸡新城疫病毒：鸡新城疫弱毒株（Lasota）接种鸡胚、收获尿囊液制备 鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，以生理盐水洗涤35次，将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配置成1%红细胞悬液使用。

0.85%生理盐水 被检血清，采自被检鸡的健康血清四、实验步骤,（一）血凝试验（HA）,112孔加入50l生理盐水; 第1孔加50l病毒悬液，倍比稀释到第10孔； 112孔中加入1%的红细胞50l； 震荡后置372530min观察结果 病毒液的血凝价是1:2？二）血凝抑制试验（HI）,111孔加入25l生理盐水; 第1孔加待检血清25l，倍比稀释至第10孔; 111孔加25l 4个血凝单位的病毒悬液; 112孔中每孔加入1%的红细胞50l; 震荡后置372530min观察结果; 红细胞凝集100%的抑制作为结果判定的终点如果血凝价为1:28，那么4个血凝单位就是将病毒液进行1:26倍稀释,10/640= 1/26, 所以病毒原液取10l，生理盐水取630l； 4个血凝单位病毒悬液体积：25l /孔12孔=400l血清,血凝抑制试验结果判定,测定孔 RBC沉于孔底中心，呈纽扣状) 凝集 （-） 血清对照孔：RBC沉于孔底，无自凝 病毒对照孔：凝集 RBC对照孔：无自凝 血凝抑制试验效价：呈完全血凝抑制时的最高血清稀释度五、结果判定,血凝价是1:2？； 血凝抑制价是1:2？； 被检血清为阴还是阳性?,六、思考题,血凝和血凝抑制试验在兽医学中的应用。