小儿传染性单核细胞增多症免疫状况动态观察.doc

KKME---专业医学搜索引擎 作者单位：(解放军第二军医大学附属长海医院 儿科，上海 200433)【摘要】目的 研究小儿传染性单核细胞增多症(IM)免疫功能动态变化，观察 EB 病毒(EBV)感染对免疫功能影响，为判断预后及治疗提供依据方法 应用流式细胞术对 23 例 IM 患儿急性期及恢复期外周血淋巴细胞 CD3+、CD4+、CD8+、CD19+抗原进行检测，并与 30 例对照组健康儿童比较结果 IM 患儿急性期外周血淋巴细胞 CD3+、CD4+、CD8+、CD19+抗原分别为(80.74±8.51)%、(17.53±6.08)%、(57.38±14.90)%、(7.35±6.24)%，CD3+、CD8+显著高于对照组[(68.47±7.01)%、(24.10±4.65)%，P50%)，异形淋巴细胞增多(>10%);EBV 抗衣壳抗原抗体(VCAIgM)阳性诊断明确后予阿昔洛韦抗病毒，退热、保肝等对症治疗对照组 30例，为健康体检儿童，男 17 例，女 13 例，年龄 0.3～13 岁，平均(4.59±3.27)岁对照组年龄、性别与 IM 组有可比性1.2 方法1.2.1 标本采集于清晨分别采集 IM 急性期(发病第 3～5 天)和恢复期(发病第 25～30 天)及对照组空腹静脉血 1 ml，置含 20 Μl 10%EDTAK2抗凝管中，24 h 内检测。

1.2.2 流式细胞术KKME---专业医学搜索引擎 10%EDTAK2 抗凝管的 50 Μl 血标本，加入美国 BD公司生产的 FITC CD4+、CD8+及 PECD19 鼠抗人荧光单克隆抗体各10 Μl，室温避光孵育 20 min，加入红细胞裂解液 1 ml，室温放置10 min，用 PBS 洗涤 2 次，加 PBS400 Μl 上机，采用 FACACalibur流式细胞仪检测受检者外周血淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+、CD19+的表达率1.3 统计学方法统计分析用 SPSS10.0 软件若资料服从正态分布、总体方差齐性，两组比较采用成组 t 检验;若资料不服从正态分布或者方差不齐，则两组比较采用 WILCOXON 秩和检验前后测量设计资料，采用重复测量设计资料的方差分析P0.05)，CD8+仍高于对照组(P0.05)，CD4+仍低于对照组(P<0.01)见表 13 讨论KKME---专业医学搜索引擎 感染临床症状多变，可表现为 IM，大多数免疫功能健全者可终生隐性感染在体外，EBV 具有促进 B 淋巴细胞转化功能，严重 T 细胞免疫抑制患者(医源性或 HIV 感染)有发生不同程度EBV 相关淋巴增殖性疾病的危险，包括移植后淋巴增殖性疾病、Burkitt 淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤等。

体外研究表明，EBV 感染后与 B 细胞上的受体 CD21 结合，刺激其配体 CD23 表达，转化 B 细胞使其具有不断增殖并复制病毒的能力正常免疫状态下，B 细胞增殖可激活 T 细胞，发生 T 细胞介导的免疫反应以清除感染的 B 细胞体外实验性 EBV 感染外周血单核细胞(PBMCs)，来自 EBV 血清学阳性者培养中可观察到早期B 细胞增殖，既而随着记忆 T 细胞激活出现 B 细胞退化;来自 EBV血清学阴性 PBMCs 培养中 B 细胞持续增殖，尽管存在同源性 T 细胞EBV 抗原特异性、IL2 依赖的 T 细胞对自身淋巴母细胞具有细胞毒作用，抑制 EBV 诱导的 B 细胞转化，从而清除病毒EBV抗原特异性 T 细胞为 HLAI 类分子限制，因此认为 CD8+T 细胞为主要效应细胞[2]本研究中 IM 急性期 CD8+T 细胞显著升高，CD19+T 细胞降低，提示 IM 急性期处于 T 细胞激活、清除病毒感染B 细胞状态患儿就诊时的发热、肝脾肿大、淋巴结肿大是 T 细胞免疫反应的结果，而非病毒感染早期，因此未能观察到 B 细胞增殖现象恢复期 CD8+T 细胞逐渐降低，体现了 IM 呈自限性过程，但仍高于对照组，因此需继续随访观察 T 抑制细胞功能。

有作者研究EBV 不同感染状态 T 细胞受体(TCR)组成成分，认为 T 细胞大量扩KKME---专业医学搜索引擎 EBV 感染有关;虽然无症状的潜伏感染者体内有高水平 EBVDNA，但未表现 T 细胞大量扩增，大部分能维持稳定的 T 细胞调控及外周血成分的多样性;如果强烈的 T 细胞反应导致了内环境稳定偏移，T 细胞可能具有免疫病理作用[3]本研究显示 IM 急性期 CD4+T 细胞显著减少，与文献报告一致[4]体外研究认为 CD4+T 细胞在控制 EBV 转化 B 细胞增殖中亦发挥作用在 CD4 缺失的 PBMCs 培养中，抗原特异性 CD8+T 细胞扩增减少，从而使 B 细胞退化减弱，外源性补充 ΓIL2 可使CD8+T 细胞恢复扩增，由此表明 CD4+T 细胞对 CD8+T 细胞扩增起辅助作用，至少是提供细胞因子，特别是 IL2在 CD8 缺失的PBMCs 培养中，可观察到 B 细胞迟发退化，但无抗原特异性CD4+T 细胞扩增[5]另有研究表明，在体外 CD4+T 细胞可识别并杀灭自身淋巴母细胞[6]，将 EBNA1 多肽特异性 CD4+T 细胞加入到近期感染的自身 B 细胞培养中，可观察到 B 细胞退化[7]，CD4+T细胞在清除病毒感染 B 细胞过程中被消耗。

EBV 抗原特异性CD4+T 细胞作为控制 EBV 诱导淋巴组织增生的主要效应细胞作用尚未明确，在 PBMCs 培养中其含量仅为 CD8+T 细胞的 1/10[6]IM恢复期发热、皮疹、肝脾肿大等临床表现已逐渐消失，CD4+T 细胞有所升高，但仍低于对照组，提示机体仍处于免疫紊乱状态，易罹患感染免疫调节治疗能否改善 IM 患儿恢复期细胞免疫状态，目前国内尚无相关报告综上所述，IM 急性期表现为以 CD8+T 细胞为主的免疫反KKME---专业医学搜索引擎 EBV 诱导的 B 细胞增殖IM 恢复期机体仍处于免疫紊乱状态，需定期随访监测细胞免疫，CD4+T 细胞持续低下可能需免疫调节治疗参考文献】[1] 胡亚美，江载芳. 诸福棠实用儿科学[M]. 第 7 版. 北京:人民卫生出版社, 2002:821-825.[2] Moss DJ, Rickinson AB, Wallace LE, et al. Sequential appearance of EpsteinBarr virus nuclear and lymphocytedetected membrane antigens in B cell transformation[J]. Nature, 1981, 291(5817):664-666.[3] Silins SL, Sherritt MA, Silleri JM, et al. Asymptomatic primary EpsteinBarr virus infection occurs in the absence of blood Tcell repertoire perturbations despite high levels of systemic viral load[J].Blood, 2001, 98(13):3739-3744.[4] 曾宾，肖燕，金润铭，等. 儿童 EB 病毒感染的免疫功能状况[J]. 实用儿科临床杂志, 2006, 21(22):1549-1550.[5] Gudgeon NH, Taylor GS, Long HM, et al. Regression of EpsteinBarr virusinduced Bcell trasforrrmtion in vitro involves virusspecific CD8+ T cells as the principal effectors and a novel CD4+ Tcel1 reactivity[J]. J Virol, 2005, 79(9):5477-5488.[6] Long HM, Haigh TA, Gudgeon NH, et al. CD4+ Tcel1 responses to EpsteinBarr virus(EBV) latent cycle antigens and the KKME---专业医学搜索引擎 of EBVtransformed lymphoblastoid cell lines[J]. J Virol, 2005, 79(8):4896-4907.[7] Nikiforow S, Bottomly K, Miller G, et al. Cytolytic CD4+Tcell clones reactive to EBNA1 inhibit EpsteinBarr virusinduced Bcell proliferation[J]. J Virol, 2003, 77(22):12088-12104.可以免费下载论文的浏览器可以免费下载论文的浏览器---文献检索浏览器文献检索浏览器。