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甘草中总黄酮的提取及含量测定前言甘草是我国传统常用中草药之一，也是我国重要的植物资源 甘草黄酮类 成分是甘草中最重要的活性成分之一，具有抗氧化、抗肿瘤、增强一t5血管功能、 增强免疫力等作用 因此，开展甘草的深加工，使甘草资源得以充分利用，增 加资源的附加值，前景十分可观为此，笔者以甘草为对象，研究了甘草黄酮的 乙醇回流提取工艺，单因素试验确定各因素对提取工艺的影响，正交试验确定甘 草黄酮提取的最佳工艺条件1材料与方法1.1材料甘草，市售；试剂：亚硝酸钠、碳酸钠、石油醚、蒸馏水、氢氧化钠、盐酸、无水乙醇、 芦丁；仪器：烧杯、容量瓶、移液管、玻璃棒、量筒、回流装置、滤纸、HH-4数显 恒温水浴锅、分析天平、AB104. N电子天平、布氏漏斗、SHZ—C型循环水多用真 空泵、分光光度计1.2 方法1.2.1 标准曲线的绘制称取芦丁对照品10 mg，用95%的乙醇溶解，摇匀，定容至10 ml，使之成 为浓度为 1 mg/ml 的芦丁标准品溶液，作为贮备液备用量取上述溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 ml，分别加水至3 ml，加5% 亚硝酸钠溶液0.5 ml，放置6 min，加10%的硝酸铝溶液0.5 ml,摇匀、放置6 min 后加5%的氢氧化钠溶液2.5 ml，混匀、放置15 min后蒸馏水定容至10 ml。

用 紫外分光光度计在500 nm处测吸光度，以对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐 标做标准曲线 01 吐02 a 03 W 0.05 3 96Gonrattration li 咄ml图英芦丁标准曲线Hg. 1 Rutin Sudani curve1.2.2材料处理取甘草根茎粉（粉碎过40-60目筛）3 g置于烧杯中，按甘草粉末:乙醇（1:30）加入90ml浓度为70%的乙醇混合均匀.1.2.3试验设计（按每组自己做的时候用的方法的具体过程写）第五组：1.配置芦丁标液：2•配置标准曲线所需不同浓度溶液3•测吸光度，以对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线4. 处理样品5. 测出样品吸光度，按照标准曲线，得出样品总黄酮含量1.2.4甘草黄酮含量测定收集滤液并测量滤液体积，取样按绘制标准曲线的方法测定其吸光度值，根据公式计算每克甘草中黄酮的含量有稀释的写清稀释了多少倍等）2结果与分析测出样品吸光度为0.146.对比出标准曲线得出浓度为0.0213mg/ml此浓度为10ml样品处理液的浓度则3ml参比原液中物质的量为0.0213mg/ml*0.01L=0.000213mg则参比原液的浓度为0.000213/0.003=0.071 mg/ml则样品原液的浓度为0.071*5=3.55 mg/ml提取原液有20ml，贝V样品中甘草黄酮含量为3.55*20/3=23.67mg/g3结论经过预试验确定影响提取含量的主要因素为乙醇浓度、时间、温度、料液比。

因此先进行单因素试验，根据单因素试验的结果，以乙醇浓度、时间、温度、料 液比为因素、进行（3 ）正交试验，根据正交试验结果确定最佳工艺根据其他几组同学的实验结果做出如下分析1 ZPj I — ■ I I ‘ 」—「十、' 65 70 75 80 舫 90乙醇浓度 EthamL concoiiraticn 0%兀醇浓魔与提取含■的关系乙醇浓度对提取含量的影响由图2可知，乙醇浓度的最优水平为75%，而 在两侧的浓度范围内提取含量都是随之下降的乙醇浓度越大，极性越小，增大 极性小的黄酮类溶出，从而在一定乙醇浓度范围内，提取含量呈上升趋势；当乙 醇浓度超过一定范围，即极性过大，减少了黄酮糖苷类等的溶出，从而提取含量 呈下降趋势因而在设计正交试验时，将其浓度选在75%左右L0 -15 - '0 75花77网79弼凰前聲阴的86刘88 89如飪莊第彌另温度 Tmperature “ V图合温損同提取念星的关董温度对提取含量的影响由图3可知，当温度低于85°C时，随着温度的升高, 从热动力学方面增加了黄酮类的溶出，从而提取含量呈上升趋势；当温度高于 85C时，可能黄酮类发生水解、裂解或者黄酮类之间发生了一系列反应，从而使 提取含量呈下降趋势。

因而在设计正交试验时，温度选择在85 C左右4时间与提取含量的关系时间对提取含量的影响由图4可知，当时间少于3h时，由于时间的增大有 助于黄酮类的溶出，从而提取含量呈上升趋势；当时间超过3 h时，提取含量反 而略微降低理论上讲在3. 5 h提取含量应趋于一个平衡值，或者比3 h稍有上 升趋势，然后再趋于一个平衡值这可能是由于加热时间过长，造成黄酮糖苷类 的水解，导致黄酮检出量减少，从而提取含量呈下降趋势因此，在正交试验设 计时，时间应选择在3 h左右料犧比Soiid/Liquid『缸曲（咄叩團5料液比与提取含■的关蔡料液比对提取含量的影响由图5可知，当料液比小于1：30时，随着料液 比的增大提取含量呈上升趋势；当料液比高于1：30时，随着料液比的增大反而 呈下降趋势料液比影响溶剂的极性，从而影响了不同极性黄酮类的溶解性； 同时能耗也随着料液比的增大而增大，导致在后续试验萃取过程中萃取剂用量也 随之增加因此在设计正交试验时，将料液比选择在1： 30左右1正交试验结果TaNe 1 Anal韓is of the orthogonal test results' 因素Fw茫 判陝Extractionamuunt试驗号 A斜液比 — D乙屜tkpoinm 3迫) B温鷹〃t €时间伽 琪〃％閒， Solid/Liquid Te吨eiatig lune EthanolratioR差 1234567S9®\7 L)r- A/ .Jr SI/. kJ.. XJ/ 2o2&a30»s)mm4o I 1 1 1 1 1J M- fx tR rx /L fx -c- fs xfk 111222333050SJ 7 7585957585957585950& .c Jpk- ufx .rr\ f X 12312312 3(657585856575758S6510i03増血336朋⑷③332,22+N2z 工根据单因素试验结果，设计k(3 )正交试验。

试验结果见表1由表1可以看 出提取甘草黄酮的最优方案为AB C D ,即料液比为1： 20，度为85°C，提取 时间为4 h,乙醇浓度为75%由极差分析可知，各因素主次顺序为DBAC，即乙 醇浓度对甘草黄酮的提取含量影响最大，温度对甘草黄酮提取含量影响次之，影 响最小的因素是提取时间而3 h时的甘草黄酮提取含量与4 h时的相差不大，而 减少时间可以降低能耗，因而为了降低成本，选提取时间为3 h综上所述，甘 草黄酮的最佳提取工艺条件为ABCD：，即乙醇浓度75%，温度85C，时间3 h,料液比1： 204总结(1) 单因素试验表明，各因素对黄酮提取率的影响顺序为：乙醇浓度＞温度＞ 料液比＞提取时间正交试验结果表明，乙醇回流提取的最佳工艺条件为乙醇浓 度75%，温度85°C，时间3 h,料液比1： 202) 该试验研究了影响甘草中黄酮提取率的几个主要因素，但其余因素对黄 酮提取率是否具有影响还有待于进一步研究甘草黄酮的保健作用和药理学方面 的研究也有待于更深入的研究。