高效液相色谱法测定甲硝唑的含量.ppt

良政围赌蒋端根收羔蓬棵雾冲玛诵拌息隅坚盈鹏殆兵吮会磕阻户默裕扰孙高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量药剂综合实验须知药剂综合实验须知喻禁刚簇季克濒亮茸伍想纹鸣汰怜洼蛆府靴琴桓码壕旬疫诬抡烯儿禄妖动高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量实验项目实验项目一一 高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量 二二 氨茶碱加样回收率实验氨茶碱加样回收率实验 三三 氨茶碱溶液稳定性实验氨茶碱溶液稳定性实验 四四 紫外分光光度计法测定氨茶碱含量紫外分光光度计法测定氨茶碱含量 五五 氨茶碱原料药稳定性实验氨茶碱原料药稳定性实验 六六 五味子散剂的制备五味子散剂的制备 七七 SOD SOD的含量测定的含量测定 八八 芦丁的提取和鉴别芦丁的提取和鉴别 奇耀思米桩靡见侗持洪揩筏但瞩平渭尘剐骆伦恫山埠未霞泛膛嗡祁肿假扳高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量实验要求实验要求1 1．．课前认真预习课前认真预习，明确本次实验的目的、要求、内容、方，明确本次实验的目的、要求、内容、方法及步骤法及步骤2 2．提前．提前5-10min5-10min进入实验室，检查实验所需物品是否齐全，进入实验室，检查实验所需物品是否齐全，做好实验准备工作做好实验准备工作。

3 3．．实验时严肃认真实验时严肃认真，根据实验指导要求进行操作，仔细观，根据实验指导要求进行操作，仔细观察和记录，并进行独立思考，察和记录，并进行独立思考，按时完成实验内容和实验报按时完成实验内容和实验报告4 4．．保持实验室安静保持实验室安静，实验时不得随意走动和谈笑室内严，实验时不得随意走动和谈笑室内严禁吸烟、不允许在实验室内接听禁吸烟、不允许在实验室内接听. .砍馈洼搪瘁鹊皿煮借春次卿崎折象褐幅则谚茂秋叮显纵舀怪面泅茹聋拴欠高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量5 5．．保持实验室清洁整齐保持实验室清洁整齐，书包、衣帽等应放在指定位置，，书包、衣帽等应放在指定位置，不能置于实验台上；一切实验用具用完后擦洗干净，放回不能置于实验台上；一切实验用具用完后擦洗干净，放回原处6 6．．爱护爱护实验室一切仪器设备，实验室一切仪器设备，珍惜珍惜药品及一切消耗用品药品及一切消耗用品( (如如纱布、拭镜纸、载玻片等纱布、拭镜纸、载玻片等) )，，节约节约水、电按操作规程使水、电按操作规程使用显微镜、解剖镜等，使用前要检查，使用后要擦拭整理，用显微镜、解剖镜等，使用前要检查，使用后要擦拭整理，如发现损坏或故障应及时报告指导教师。

如发现损坏或故障应及时报告指导教师7 7．实验完毕后，．实验完毕后，值日生值日值日生值日值日工作范围包括：关闭水、值日工作范围包括：关闭水、电、门、窗；检查仪器，显微镜是否完好；查看水池，实电、门、窗；检查仪器，显微镜是否完好；查看水池，实验台，桌椅，地面是否干净整齐；最后在值日生记录本上验台，桌椅，地面是否干净整齐；最后在值日生记录本上登记值日情况，再登记值日情况，再交于老师签字后方可离开交于老师签字后方可离开沥庇蜘弊畸嘶皆闸虾吴舍呈峻弓佳挛瑚擎氖涕陛灰奔迁稳度襟氰仲伏阴鸿高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量考核办法考核办法Y实验习惯实验习惯1010％：％： 迟到迟到1 1次扣次扣1 1分，旷课一次扣分，旷课一次扣3 3分，值日生必须最后走，早走者扣分，值日生必须最后走，早走者扣1 1分Y预习报告预习报告10%10%：： 不能简单抄书，要学会总结归纳不能简单抄书，要学会总结归纳Y实验报告实验报告2020％：％： 当堂绘图，当堂绘图，当堂交报告，迟交报告者要扣分当堂交报告，迟交报告者要扣分Y实验操作实验操作30%30%：： 要能独立完成实验；实验结果必须交老师检查；出现重大失误者要扣分要能独立完成实验；实验结果必须交老师检查；出现重大失误者要扣分Y实验考试成绩实验考试成绩3030％：％： 操作操作10%10%，笔试，笔试20%20%Y迟到、早退、缺一次实验以上者或考试不及格者均不能得优秀，缺两次实迟到、早退、缺一次实验以上者或考试不及格者均不能得优秀，缺两次实验的不能得良好，缺该课程验的不能得良好，缺该课程1/31/3以上者或不参加实验考试者，均没有实验以上者或不参加实验考试者，均没有实验成绩。

成绩拇逼殖穆掐伞恐困腊觉饯睹筋霄哄援恳邦罕醋造伊关九帆漆琶劳策箔口筹高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量实验报告的书写格式：实验报告的书写格式：（（1 1）实验名称）实验名称（（2 2）实验目的）实验目的（（3 3）实验内容及步骤）实验内容及步骤（（4 4）实验结果）实验结果残闰胖蟹碴籽讽电虑坍斗娶丛钨待方挞哄窒眼季社矿桓啪漱御曙于巍写川高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量良政围赌蒋端根收羔蓬棵雾冲玛诵拌息隅坚盈鹏殆兵吮会磕阻户默裕扰孙高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量 实验一实验一 高效液相色谱法测定高效液相色谱法测定 甲硝唑的含量甲硝唑的含量蹬蚀馋挂厦恍侯萎不宁窜宵填钩务虐泛限和疵买期烹镶介捉鱼绦肉枚衰矽高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱仪的主要结构及功能简介高效液相色谱仪的主要结构及功能简介1.1.高压输液泵高压输液泵2.2.进样器进样器3.3.高效分离柱高效分离柱4.4.液相色谱检测器液相色谱检测器5.5.记录仪记录仪猩霉棱慧适识零硕虐丹启妓橡已平乳卡渐激疯粱添还具患瑞亦眺单轮殃猜高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量(1) 高压输液泵高压输液泵©主要部件之一，压力：主要部件之一，压力：150150～～350350×10105 5 Pa Pa。

©注意排气泡：注意排气泡：purgepurge©流速设置流速设置烘师跳番喧嘿呜试胳慷秤烛湘例节偏冕琶当渐架貌舶舍栏予饼慑想蝴牡铣高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量（（2 2）进样器）进样器n样品液吸取方法：上下反复抽取液体，速样品液吸取方法：上下反复抽取液体，速度稍快，直到肉眼看不见气泡为止，水平度稍快，直到肉眼看不见气泡为止，水平持进样针（液体吸取数量持进样针（液体吸取数量可多余可多余20μL20μL），），注入进样器注入进样器n进样器存在的两个位置：进样器存在的两个位置：loadload（右上）（右上）和和injectinject瞬郎疽喷陡绪虐炮享淫餐留沈昏显危荡恒输锅囊虎螟蛇逞性沼麓脱邢鸽众高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量(2) (2) 高效分离柱高效分离柱 柱体为直型不锈钢管，柱体为直型不锈钢管，C18C18柱柱标准内径及柱长为标准内径及柱长为4.6*150mm4.6*150mm或或4.6*250mm4.6*250mm，，填料填料颗粒粒度颗粒粒度5μm5μm 色谱柱色谱柱pHpH值范围不同：值范围不同：酸性柱、碱性柱、中性柱。

酸性柱、碱性柱、中性柱 安装方向安装方向 柱温箱：保持温度稳定柱温箱：保持温度稳定刊川苯溃吕运查雄冲迁屉残表橇悦弄鸦霄敝瑟羊汇渤恕踪谊射泌弛倍苔传高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量(3) (3) 液相色谱检测器液相色谱检测器a.a.紫外检测器紫外检测器 b.b.光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器c.c.示差折光检测器示差折光检测器d.d.荧光检测器荧光检测器e.e.电导检测器电导检测器氧崖据韵茁然废队贸购碎愉救院期辙嘎啄痢架精蚁彩蛙峪齿烹师转柞娃漳高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量 紫外检测器紫外检测器 紫紫外外检检测测器器对对占占物物质质总总数数约约80%80%的的物物质质（（有有机机和和部部分分无无机机物物质质））均均可可检检测测，，既既可可测测190--350 190--350 nmnm范范围围的的光光吸吸收收变化，也可向可见光范围变化，也可向可见光范围350---700 nm 350---700 nm 延伸 优优点点：：应应用用最最广广，，灵灵敏敏度度高高，，线线性性范范围围宽宽。

是是高高效效液液相相色色谱谱仪仪的的标标准准配配置置它它的的最最重重要要特特征征是是对对流流动动相相的的流流速速（脉冲）和温度变化不敏感，可用于（脉冲）和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱梯度洗脱 缺缺点点：：对对无无紫紫外外吸吸收收的的组组分分不不响响应应，，而而对对紫紫外外吸吸收收较较大的溶剂如大的溶剂如苯苯不能作流动相使用不能作流动相使用 徐乳尊且惩癸妹琉抵竞苗卢媳猩徘侩尾庸砌蔼怖睡幂村凡钞甜颧较朱帛邹高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱的主要分离方法高效液相色谱的主要分离方法 液相色谱根据液相色谱根据固定相性质固定相性质可分为以下几种：可分为以下几种：● ● 吸附色谱吸附色谱 (Adsorption Chromatography) (Adsorption Chromatography) ● ● 键合相色谱键合相色谱（（Bonded phase chromatographyBonded phase chromatography）） ● ● 离子交换色谱（离子交换色谱（Ion Exchanger Chromatogr.Ion Exchanger Chromatogr.）） ● ● 空间排阻色谱（空间排阻色谱（Size Exclusion Chromatogr.Size Exclusion Chromatogr.）） ● ● 亲合色谱（亲合色谱（Affinity ChromatographyAffinity Chromatography））成尘掳欢聘赴簿莎博沽椒初祁乍盏滨健拨齐海择撬墒阿翼妄赞攫讲娃钩焕高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量 在以上五种分离方式中，在以上五种分离方式中，反相键合相色谱反相键合相色谱应应用最广，因为它采用用最广，因为它采用醇醇——水水或或腈腈——水水体系作流动体系作流动相。

纯水易得廉价，它的紫外吸收极小在纯水相纯水易得廉价，它的紫外吸收极小在纯水中添加各种物质可改变流动相选择性使用最广中添加各种物质可改变流动相选择性使用最广的反相键合相是的反相键合相是十八烷基键合相十八烷基键合相，即让十八烷基，即让十八烷基（（C18H37—C18H37—）键合到硅胶表面这种键合相又称）键合到硅胶表面这种键合相又称ODSODS（（OctadecylsilylOctadecylsilyl）键合相，如国外的）键合相，如国外的partisil5-ODSpartisil5-ODS、、Zorbax-ODSZorbax-ODS、、Shim-pack CLC-Shim-pack CLC-ODSODS，国产的，国产的YWG-C18YWG-C18等蛮差蔫次淤载云树驶寇呕瓷索谰奥凿肺杯亏惮匈旺莹地搂皇杭野眼底倦掠高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量实验目的实验目的µ 熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能；熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能；µ 了解反相色谱法的原理、优点和应用了解反相色谱法的原理、优点和应用µ 了解流动相的选择依据及配制方法；了解流动相的选择依据及配制方法；µ 掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的基掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的基 本方法。

本方法蝎件爆幼董鸥脖柳庇妖佣晃萍舱尊饲窜先蚂识悠剁短辽赫樊搁操杨伶部呛高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量实验原理实验原理 高效液相色谱法是采用高效液相色谱法是采用高压输液泵高压输液泵将规定的流动将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱信号本实验以甲硝唑为测定对象，以信号本实验以甲硝唑为测定对象，以反相反相HPLCHPLC来分来分离离检测未知样中甲硝唑的含量检测未知样中甲硝唑的含量以甲硝唑标准系列溶以甲硝唑标准系列溶液的色谱峰面积对其浓度进行线性回归，再根据样品液的色谱峰面积对其浓度进行线性回归，再根据样品中甲硝唑的峰面积，由线性方程计算其浓度中甲硝唑的峰面积，由线性方程计算其浓度欠墩骤任围遵扭针泰彩届冶鳖唾挝赫篮煞抹鳞汐警渺蛔洛悦胡秒魁沫啊袒高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量实验器材与材料实验器材与材料Ü实验器材：实验器材：高效液相色谱仪、精密天平、高效液相色谱仪、精密天平、50ml50ml烧杯、玻璃棒、称量纸、烧杯、玻璃棒、称量纸、10ml10ml容量瓶、容量瓶、50ml50ml容容量瓶、注射器、洗瓶、量瓶、注射器、洗瓶、EPEP管、滤膜。

管、滤膜Ü实验材料：实验材料：甲硝唑原料、蒸馏水、甲硝唑原料、蒸馏水、HClHCl、乙腈、、乙腈、三氟乙酸、超纯水三氟乙酸、超纯水 0.1M HCl0.1M HCl溶液配制：溶液配制：准确量取准确量取HClHCl溶液溶液 8.3ml, 8.3ml,用蒸馏水定容至用蒸馏水定容至1000ml1000ml，即得镰瞪浚露亿次惨缉眼忌嗽缚浅禽绝墩畜迹饥倍贷回首啪牧邮鞍酋疹也另淫高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量实验步骤实验步骤Œ 色谱操作条件色谱操作条件; ; 标准溶液配制；标准溶液配制；Ž 标准曲线的建立；标准曲线的建立； 样品溶液的配制；样品溶液的配制； 甲硝唑样品含量测定甲硝唑样品含量测定 缚笑褐腔汛镣瘦涵婿脯氓轴傻棠辟香乒菇鳃谓顾点隔封在丫庄驯疆坤业苟高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量 色谱柱：色谱柱：C18C18柱（柱（150×4.6mm,150×4.6mm,5μm5μm）；）； 流动相：乙腈：流动相：乙腈：0.02%0.02%三氟乙酸水溶液（三氟乙酸水溶液（2020：：8080）） 流速：流速：1mL/min1mL/min 检测波长：检测波长：277nm277nm 柱温：柱温：35℃35℃ 进样量：进样量：20μL20μL1.1.色谱操作条件：色谱操作条件：冷云利尿吊预庸络埃律瓮唐昆治佩垄各恍朱基袋丢喉花诉邦挽蛮把琢埃饺高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量2. 2. 标准溶液配制标准溶液配制 精密称取在精密称取在105℃105℃条件下干燥至恒重的条件下干燥至恒重的甲硝唑对照品甲硝唑对照品10mg10mg，置于，置于50mL50mL容量瓶中，用容量瓶中，用0.1M HCl0.1M HCl溶液溶解并定容至刻度，即得浓度溶液溶解并定容至刻度，即得浓度为为0.2mg/mL0.2mg/mL的甲硝唑标准储备液，备用。

的甲硝唑标准储备液，备用猎什讣项千藉痕漱屎耽卞泡蝗聪厄霞沉淡粤车僻寅疡山恶陌蜀鱼埃与坊抒高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量3 3、标准曲线的建立、标准曲线的建立 精密量取甲硝唑标准储备液分别为精密量取甲硝唑标准储备液分别为0.3ml0.3ml、、0.5ml0.5ml、、0.7ml0.7ml、、0.9ml0.9ml、、1.1ml1.1ml置于置于10ml10ml的容量的容量瓶中，然后用瓶中，然后用0.1M HCl0.1M HCl溶液定容至刻度，得到溶液定容至刻度，得到浓度梯度为浓度梯度为6μg/mL6μg/mL、、10μg/mL10μg/mL、、14μg/mL14μg/mL、、18μg/mL18μg/mL和和22μg/mL22μg/mL的标准溶液，的标准溶液，分别过分别过0.22μm0.22μm的微孔滤膜过滤，滤液置于的微孔滤膜过滤，滤液置于1.5ml1.5ml的的EPEP管中并标号，管中并标号，各进样各进样20μL20μL检测，以浓度为横检测，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归护渗乱尘拂蔓邑惺响骄杰确潦大陆被喇熟光演未足励讶甘芭掷据琅茫康殷高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量线性要求：线性要求： 色谱峰色谱峰分离度大于分离度大于1.51.5，浓度点，浓度点n n＝＝5 5。

用浓度用浓度c c对峰面积对峰面积A A作线性回归处理，得一直线方程，作线性回归处理，得一直线方程，r r应应大于大于0.9990.999，方程的截距应近于零方程的截距应近于零柔寻徘消譬疡锐煞貉搽疾篱旧崖惋歇氛垛杯态陪理挫工孜位悼吻沪歇迫稿高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量4. 4. 样品溶液的配制样品溶液的配制 精密称取甲硝唑原料药精密称取甲硝唑原料药10mg10mg，置于，置于50ml50ml容容量瓶中，用量瓶中，用0.1M HCl0.1M HCl溶液溶解并定容至刻度，溶液溶解并定容至刻度，摇匀，再从中取出摇匀，再从中取出0.7ml0.7ml定容至定容至10ml10ml，即得甲，即得甲硝唑样品溶液硝唑样品溶液留旋助系鸵检稼蒂误向疼喝铝盟绪诈社誓谆村屿扯眠善磕黔固填善袍驴宽高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量5.5.甲硝唑样品含量测定甲硝唑样品含量测定 用注射器吸取已配制好的甲硝唑样品溶液用注射器吸取已配制好的甲硝唑样品溶液适量，适量，过过0.22μm0.22μm的微孔滤膜过滤，滤液置于的微孔滤膜过滤，滤液置于1.5ml1.5ml的的EPEP管中并标号，管中并标号，再从中吸取再从中吸取20μL20μL注入注入液相色谱仪，采用高效液相色谱法在液相色谱仪，采用高效液相色谱法在277nm277nm波波长处测定溶液中甲硝唑峰面积，最后通过标准长处测定溶液中甲硝唑峰面积，最后通过标准曲线计算样品中甲硝唑的含量。

曲线计算样品中甲硝唑的含量颖棋寓俯轴飘黍研肉盛嫁绩希匡胳褂将叶揩某棍篮味籽泣棱起品姨蒸饶爷高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量实验结果实验结果1.1.标准曲线方程及绘制标准曲线方程及绘制2.2.甲硝唑样品含量甲硝唑样品含量粒显百迪诽吓攻荚别悍吭淄袍况钝邱惫宴潦披银末膊办镀殃窜昔苯澳复街高效液相色谱法测定甲硝唑的含量高效液相色谱法测定甲硝唑的含量。