2022医学课件口腔培养细胞的取材与分离.pptx

培养培养细细胞的取材与胞的取材与别别离离 取材部位准确取材部位准确 严严格无菌操作，防止微生物和化学格无菌操作，防止微生物和化学污污染染 尽快培养，尽快培养，24h24h以内以内 减小减小损伤损伤，使用，使用锐锐器，防止撕扯器，防止撕扯 制制备标备标本，以便本，以便鉴鉴定定第一页，共三十页体外体外细细胞的胞的纯纯化化人工人工纯纯化：化：酶酶消化法、机械刮除法、反复消化法、机械刮除法、反复贴贴壁法、克壁法、克隆法、培养基限定法、流式隆法、培养基限定法、流式细细胞胞仪别仪别离法离法 等等自然自然纯纯化化 第二页，共三十页细细胞胞冻冻存要点：存要点：冷冻过程要缓慢冻存细胞必须处在对数生长期细细胞复胞复苏苏要点：要点：快速解冻解冻后的细胞应离心去除冷冻保护剂后再接种到培养基中第三页，共三十页细胞培养的污染、检测与控制微生物污染：细菌，真菌，支原体等污染污染的途径：空气、器材、操作、试剂、组织标本微生物污染的检测微生物污染的控制：抗生素除菌法；加温处理第四页，共三十页细细胞培养常用方法：胞培养常用方法：组织块培养法酶消化法第五页，共三十页第二节口腔医学中相关细胞培养及其特点第二节口腔医学中相关细胞培养及其特点第六页，共三十页。

一、牙齿相关细胞一、牙齿相关细胞第七页，共三十页牙髓细胞 Dental pulp cells 培养方法：组织块法；酶消化法细胞形态特点免疫组织化学染色体外培养细胞的生长增殖特点功能特点第八页，共三十页牙髓细胞波形丝蛋白染色波形丝蛋白染色(+)未分化未分化间间充充质细质细胞胞成成纤维细纤维细胞胞第九页，共三十页牙髓细胞 体外培养细胞的生长增殖体外培养细胞的生长增殖Cell proliferation in vitro 生长增殖较快 传代期较短，15-20代(2-4 M)可复层生长第十页，共三十页牙髓细胞 功能特点功能特点 碱性磷酸酶碱性磷酸酶alkaline phosphatase,ALP)活性活性 矿化现象矿化现象(Von Kossa)对细胞因子的反响对细胞因子的反响 对盖髓剂的反响对盖髓剂的反响第十一页，共三十页牙髓细胞培养方法：组织块培养法；酶消化法细胞形态特点：成纤维细胞型与牙周膜细胞类似免疫组织化学染色：波形丝蛋白+；角蛋白-体外培养细胞的生长增殖特点功能特点第十二页，共三十页牙周膜细胞periodontal ligament cells 培养方法：组织块法；酶消化法细胞形态特点免疫组织化学染色体外培养细胞的生长增殖特点功能特点牙周膜细胞增殖分化的影响因素 原代 人牙周膜成纤维细胞传代人牙周膜成纤维细胞第十三页，共三十页。

免疫免疫组织组织化学染色化学染色波形丝蛋白染色阳性角蛋白染色阴性第十四页，共三十页牙周膜细胞 成纤维样细胞，培养成功率高 细胞增殖快 体外存活时间长(4-12 M)第十五页，共三十页功能特点功能特点分泌功能：胶原、非胶原蛋白、碱性磷酸酶矿化功能收缩功能再生功能根面吸附等第十六页，共三十页二、唾液腺细胞二、唾液腺细胞第十七页，共三十页细细胞形胞形态态特点特点腺泡上皮腺泡上皮细细胞：体外培养的腺泡胞：体外培养的腺泡细细胞多呈胞多呈“铺铺路石路石样样排列排列导导管上皮管上皮细细胞：胞：导导管上皮管上皮细细胞呈多胞呈多边边形形肌上皮肌上皮细细胞：胞：肌上皮肌上皮细细胞呈梭形或星形胞呈梭形或星形唾液腺细胞第十八页，共三十页导管上皮细胞导管上皮细胞HSG细胞系HSG细胞系第十九页，共三十页A 小型猪腮腺上皮细胞原代培养10B 小型猪腮腺上皮细胞alpha淀粉酶免疫组化染色10腺泡细胞上皮细胞腺泡细胞上皮细胞第二十页，共三十页免疫免疫组织组织化学染色化学染色腺泡上皮腺泡上皮细细胞：角蛋白、淀粉胞：角蛋白、淀粉酶酶、对对氨基水氨基水杨杨酸、酸、导导管上皮膜、前管上皮膜、前角蛋白、角蛋白、单单克隆角蛋白、分泌成分阳性反响克隆角蛋白、分泌成分阳性反响导导管上皮管上皮细细胞：角蛋白、上皮膜蛋白、磷酸胞：角蛋白、上皮膜蛋白、磷酸酐酐酶酶抗体染色阳性反响抗体染色阳性反响肌上皮肌上皮细细胞：肌胞：肌动动蛋白、蛋白、S-100S-100蛋白、肌凝蛋白抗体染色阳性蛋白、肌凝蛋白抗体染色阳性反响反响第二十一页，共三十页。

三、口腔黏膜细胞三、口腔黏膜细胞第二十二页，共三十页口腔黏膜口腔黏膜细细胞胞培养方法：培养方法：组织块组织块法和法和酶酶消化法消化法形形态态特点：卵特点：卵圆圆形、多形、多边边形，呈形，呈“铺铺路石路石样单层样单层排列排列免疫免疫组织组织化学染色：波形化学染色：波形丝丝蛋白阴性，角蛋白阳性蛋白阴性，角蛋白阳性功能：分泌大量的胶原蛋白与非胶原蛋白功能：分泌大量的胶原蛋白与非胶原蛋白第二十三页，共三十页兔口腔黏膜上皮细胞兔口腔黏膜上皮细胞A AB BA 无血清培养基培养条件下10B 滋养细胞层培养条件下4第二十四页，共三十页四、颌骨相关的硬组织细胞四、颌骨相关的硬组织细胞第二十五页，共三十页破骨破骨细细胞胞形形态态学特点：多核巨学特点：多核巨细细胞，体胞，体积积大大组织组织化学染色：破骨化学染色：破骨细细胞胞单单克隆抗体呈阳性反响；降克隆抗体呈阳性反响；降钙钙素反响呈素反响呈蓝蓝紫色；抗酒石酸磷酸紫色；抗酒石酸磷酸酶酶反响呈棕褐色反响呈棕褐色功能：骨吸收功能功能：骨吸收功能影响因素：影响因素：促促进进：破骨：破骨细细胞激活因子、甲状旁腺素胞激活因子、甲状旁腺素 抑制：抑制：-干干扰扰素、降素、降钙钙素素第二十六页，共三十页。

成骨成骨细细胞胞形态学特点：不同培养方法所获得的成骨细胞形态各有差异免疫组织化学染色特点：BGP、型胶原、碱性磷酸酶活性功能：成骨作用 调节破骨细胞骨吸收作用第二十七页，共三十页五、口腔肿瘤细胞五、口腔肿瘤细胞第二十八页，共三十页口腔口腔鳞鳞癌癌细细胞胞细胞系来源：鳞状细胞癌标本原代及传代培养生物学特性：多角形上皮样细胞 核/浆比例高，多核仁 高贴壁率，克隆形成率和软琼脂集落形成率Cal27 cell第二十九页，共三十页内容总结培养细胞的取材与别离传代期较短，15-20代(2-4 M)培养方法：组织块培养法体外存活时间长(4-12 M)分泌功能：胶原、非胶原蛋白、碱性磷酸酶导管上皮细胞：导管上皮细胞呈多边形肌上皮细胞：肌上皮细胞呈梭形或星形导管上皮细胞：角蛋白、上皮膜蛋白、磷酸酐酶抗体染色阳性反响肌上皮细胞：肌动蛋白、S-100蛋白、肌凝蛋白抗体染色阳性反响培养方法：组织块法和酶消化法功能：骨吸收功能第三十页，共三十页。