黄芪提取物的生物活性研究.docx

黄芪提取物的生物活性研究黄芪提取物的生物活性研究 X市农昊生物技术研究所/杨再陈佳铭 X市朝翔生物技术有限公司/黄顺捷汪春艳 黄芪是多年生草本豆科植物膜荚黄芪或蒙古蒙古黄芪的干燥根味甘，性温，有补气升阳、固表止汗、拔毒排脓、利水消肿和生肌等功效，《中华人民共和国药典》上明列有扶正固本，补中益气的功效现代医学发觉黄芪的药理作用很广，能增加机体免疫功能，加强细胞代谢，调整DNA复制、RNA和蛋白质的合成，具有固肾、降压、保肝、抗炎的功能 黄芪提取物是采用水提、醇沉法或微波提取法将黄芪中多糖、皂甙、黄酮、氨基酸等多种成分提取出来，其商品提取物通常标以含70%黄芪多糖，实际上是中间体，可用于动物饲养，不需要再分别、纯化得纯品这种中间体，通过药理学和临床试验表明，有明显提高白细胞和单核巨噬细胞系统吞噬功能的作用，有加强干扰素和抗体的作用，增加细胞免疫功能，有抗病毒、抗辐射、抗肿瘤、延缓衰老和抗氧化等作用在人医临床上已经用于治疗肝炎、肿瘤等疾病 黄芪提取物的主要有效成分是黄芪多糖和黄芪甲苷（黄芪苷Ⅳ） 1活性成分 1.1黄芪多糖（Astragaluspolysaccharides,APS） 从黄芪的水提液中，可分别得到2种萄聚糖（AG-1、AG-2）和2种杂多糖（AH-1、AH-2）。

其中，AG-1为水溶性的，确定为a-（1→4）（1→6）萄聚糖、a-（1→4）（1→6）苷键糖基的组成比例为5：2；AG-2为水不溶性的，确定为a-(1→4)萄聚糖 采用乙醇沉淀法可将黄芪多糖分级得到两组分APS-1、APS-Ⅱ，两者之比为0.31：0.69APS-1含木糖很高，葡萄糖含量明显低于APS-Ⅱ，不含半乳糖和阿拉伯糖，这说明APS中大分子量部位含有大量戊糖，而小分子质量部位则以葡萄糖和乳糖为主 1.2黄芪甲苷（黄芪苷Ⅳ）（AstragalosideⅣ） 从黄芪根中已分别鉴定出数十种黄芪皂苷，如乙酰黄芪皂苷1，黄芪皂苷1、Ⅱ，黄芪皂苷1~Ⅶ，黄芪皂苷乙，绵毛黄芪皂苷1-XⅥ，其中黄芪甲苷Ⅳ是药用黄芪中主要有效成分之一黄芪中皂苷含量较低（以黄芪甲苷计质量分数为0.04％~0.30%），其皂苷元属羊毛甾烷型四环三萜，乙酰黄芪皂苷，异黄芪皂苷Ⅰ、Ⅱ，黄芪皂苷Ⅰ~Ⅶ，都以环黄芪皂醇为苷元，各种皂苷以配糖体部分不同而分类 黄芪中皂苷含量较低，种类杂而结构相近，提取分别比较困难黄芪皂苷类化合物的分别，多先以醇类溶剂（如乙醇或甲醇等）提取，然后以正丁醇萃取，假如要分别皂苷单体，可将萃取物进行硅胶柱层析。

黄芪皂苷极性较弱，主要靠夹带剂带出 2质量检测 2.1黄芪多糖 2．1．1性状：棕黄色粉末，味微甜，具引湿性 2．1．2鉴别：①取黄芪多糖100mg，加热水5~10ml，超声处理5min，过滤，取滤液2ml，加2%a-萘酚乙醇溶液3滴，摇匀后，沿试管壁缓缓加硫酸0.5~1ml，在两液面交界处显棕色环②取本品约100mg，加水10ml超声处理5min，滤过，取滤液2ml,浸没滴入温热的碱性酒石酸铜试液中，放置15~20min，产生棕红色沉淀，则为正品 2．1．3干燥失重：取黄芪多糖1.0g，不大于8.0% 2．1．4澄清度：取本品3g，加热水100ml，振摇5min，应全部溶化，溶液澄清透明 2．1．5含量测定：①对照品溶液的制备：取在105℃干燥至恒重的无水葡萄糖0.1g，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶液并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得②供试品溶液的制备：精密量取0.5g，置250ml量瓶中，加水50ml左右，微热，振摇溶解，放置冷却后，再加30%硫酸锌溶液5ml，在水浴中加热5min后，在振摇下马上加亚铁氰化钾试液5ml，冷却后加水至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液25ml，置500ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。

③测定法：精密量取对照品溶液与供试品溶液各2ml，分别置10ml量瓶中，各加2%苯酚溶液0.5ml，硫酸5ml，摇匀，置水浴中加热15min,放冷，用水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在490nm波特长分别测定汲取度，计算，即得 2.2黄芪甲苷 2．2．1性状：棕黄色粉末，无臭 2．2．2鉴别：①取本品用甲醇制成1%溶液，点于硅胶G板，氯仿/甲醇/水=65：35：10或30：10：1下层绽开，喷5%磷钼酸，150℃显色，与黄芪甲苷对照液相应位置，显相同的棕褐色斑点；再置于365nm紫外灯下检测，显相同的橙黄色荧光斑点，则为正品；②HPLC检查，指纹图谱与黄芪提取物对照品指纹图谱吻合 2．2．3检查：①干燥失重：≤5%；②灰分：≤3%；③重金属：≤10mg/kg；④农残：≤2mg/kg；⑤溶剂残留：≤0.5% 2．2．4含量测定：黄芪甲苷含量≥10.0%HPLC条件如下： 固定相：TSKgelODS-120A（1504）mm；流淌相：水/乙腈=2：1；流速：1.0ml/min；检测波长：200nm；柱温：50℃ 2．2．5卫生检查：①细菌总数：≤1000/g；②霉菌总数：≤100/g；③大肠杆菌、沙门菌：无。

2．2．6粒度：100%通过80目筛 2．2．7包装：双层塑料袋封口、纸板桶外包、桶外印有品名、毛重、批号、生产单位、生产日期、有效时间、贮运方法等 3生物活性 3.1黄芪多糖 据隆雪明等（20XX）归纳，APS作为生物免疫调整剂，主要通过以下几个途径作用于动物机体免疫系统：①激活巨噬细胞，促进T淋巴细胞（TH细胞）转变为活性TC细胞，提高B淋巴细胞和NK细胞的数量与活性；②激活网状内皮系统和补体系统，诱生多种免疫因子，如IFN（干扰素）、TNF（肿瘤坏死因子）等；③影响神经-内分泌-免疫系统网络；④促进细胞中RNA、DNA和蛋白质的合成，提高细胞内环核苷酸（CGMP、CAMP）的含量 据黄桢（20XX）研究，APS的生物活性表现在多个方面：对垂体后叶素引起的急性心肌缺血有明显保护作用可能通过抑制心肌细胞膜的Na+-K+交换，使细胞内Na+浓度增加，进而影响心肌细胞内Na+-Ca2+机制，使心肌细胞内Ca2+增加，导致心肌收缩力增加；可能通过超氧化物歧化酶（SOD）活性，促进氧自由基清除起作用；可能通过抑制IL-6的分泌而抑制系膜增生，从而保护肾脏。

据张小梅认为，APS现今的热点在于其免疫调整作用，详见下表： 3.2黄芪甲苷 近年研究表明，黄芪皂苷在抗氧化、抗衰老、抗肿瘤及增加免疫等方面有显著活性 ①从膜荚黄芪中分别得的黄芪皂苷I具有降压、镇痛、冷静作用，对血浆cAMP及再生肝DNA合成产生影响 ②黄芪总皂苷对多种自由基有良好的消退作用，还可防止生物膜的脂质过氧化，且对超氧阴离子（O2-）清除作强于羟自由基（-OH-）用电化学方法研究证明，黄芪及其制剂能有效地清除活性氧自由基，其中黄芪皂苷Ⅳ对O2-和•OH的抑制作用最强 ③黄芪总皂苷和黄芪甲苷IV能增加心肌组织中cAMP的含量，保护心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶的活性，从而发挥正性肌力作用，减轻心肌缺血再灌注损伤 ④黄芪皂苷可使活化的T淋巴细胞内游离钙增加，继而在促进淋巴细胞的增值、白介素2的产生、增进细胞毒性T细胞的杀伤活性、调整原癌基因的转录等方面发挥重要作用 ⑤黄芪皂苷.可降低脑缺血再灌注后丙二醛水平，抑制脑水肿的产生，保护脑缺血再灌注损伤（林琦，20XX） 8。