正交实验优选金花茶种子总多酚的最正确提取工艺.docx

正交实验优选金花茶种子总多酚的最正确提取工艺唐前，罗燕英，唐玲，黄连冬，于大永，冯宝民，王永奇【摘要】目的优选金花茶种子中总多酚的提取工艺方式采纳丙酮-水法从金花茶种子中提取总多酚，利用正交实验优选总多酚最正确提取工艺，考察丙酮浓度、时刻、温度、提取次数及料液比对总多酚收率的阻碍结果总多酚的最正确提取工艺为：25倍量的50%丙酮-水，80℃，提取3次，4h/次，总多酚含量为%，总多酚的收率为%结论丙酮-水提取法可用于金花茶种子中总多酚的提取，其中提取溶剂倍量和提取温度对总多酚提取的阻碍较大关键词】金花茶种子;总多酚;提取工艺;正交实验Abstract：ObjectiveTooptimizethetechnologyforextractionoftotalpolyphenolfromTheopsischrysanthaHu.seedswasextractedusingacetone-aqueous,andtheextractrateoftotalpolyphenolwasstudiedbyorthogonaltest,andtheeffectsofsolventconcentrationofextraction,timeofextraction,temperatureofextraction,numbertimesofextraction,solventtimesofextractionwereoptimumextractiontechnology was as follows:25 times 50%acetone-aqueous,extracting3timesat80℃for4honce.Bythistechnologytheextractionrateoftotalpolyphenolwas%andthecontentoftotalpolyphenolwas%.ConclusionThismethodcanbeappliedtheextractionoftotalpolyphenolinTheopsischrysanthaHu.Seeds.Theextractingsolventtimesandtemperatureofextractionshowobjectiveeffects.Keywords：Theopsischrysantha;Totalpolyphenol;Extractingtechnology;Orthogonaltest金花茶TheopsischrysanthaHu是山茶科山茶属金花茶组植物,有32个种5个变种。

金花茶在我国仅散布于广西的南部和西南部广西成为目前已知的金花茶现代散布中心，被誉为金花茶的故乡[1]金花茶种子中所含多元酚类化合物,要紧包括儿茶素类物质、黄酮类和没食子酸等多酚类物质是一类具有独特生理活性和药理活性的天然产物,在抗诱变、抗肿瘤、抗病毒、抗微生物、抗衰老、抗氧化等很多方面具有良好的作用[2,3]咱们前期的研究说明，金花茶种子中的多酚类成份具有抗激素依托性肿瘤的作用，如：乳腺癌、前列腺癌、宫颈癌等故在单因素研究的基础上，以金花茶种子中总多酚收率为指标，利用正交实验优选了总多酚的提取工艺现报导如下1 仪器与试药仪器unico7200可见分光光度计（尤尼柯上海仪器）;Laborata4000型旋转蒸发仪（Heidolph公司）;BP210S十万分之一电子天平（Sartorius公司）;水浴锅HH-4（国华电器）;真空干燥箱DZF-6021型（上海精宏实验设备）;循环水式真空泵SHZ-D伊L义市英峪圣华仪器厂）试药金花茶种子Theopsischrysantha于2020-10月搜集于广西省南宁市金花茶公园，鉴定人：广西林业科学研究院高级工程师梁盛业;对照品（没食子酸中国药品生物制品检定所，批号：，纯度%），其余试剂均为分析纯。

2 方式和结果总多酚的测定[4]标准曲线的绘制精准称取干燥至恒重的没食子酸对照品10mg,置100ml棕色容量瓶中,加水溶解并稀释到刻度,摇匀,周密量取25ml,置100ml棕色容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,得浓度为mg-ml-1的对照品溶液；精准吸取没食子酸标准溶液0,,,,和ml别离置10ml棕色容量瓶中,各加水至5ml,再别离加入磷钼鸨酸试液1ml,用29%Na2CO3§液稀释至刻度，摇匀，以相应的试剂为空白,30min后,在754nm波长下测定吸光度A以吸光度A为纵坐标,体积V(ml)为横坐标,绘制标准曲线取得回归方程A=2(R2=1)样品溶液的测定准确称取g金花茶种子，粉碎，与500ml的圆底烧瓶中，按实验设置的处置条件提取，回收溶剂后真空干燥，准确称取干燥粉末50mg用水溶解，定溶至50ml的容量瓶中，摇匀，周密量取5ml置于25ml的棕色容量瓶中，摇匀，准确取2ml于棕色容量瓶中，照“项下自“各加水”后同法测定吸光度，带入回归方程中计算总多酚的含量，并计算总多酚的收率总多酚收率(%)=提取液中总多酚质量/金花茶种子质量X100%单因素实验[5，6]提取溶剂的浓度对总多酚收率的阻碍在恒定浸提时刻为3h、浸提温度为100C、提取次数为1次、料液比为1:15的条件下,分设40%，50%，60%，70%共4个提取浓度进行提取，计算金花茶种子中总多酚的收率。

结果如图1所示，随着丙酮浓度的增加，总多酚的收率增加，当丙酮浓度为55%时总多酚的收率最高，但随着丙酮浓度的继续增加，总多酚的收率明显降低，可能是由于55%丙酮水溶液对总多酚溶解性能好、对原料的溶胀系数高的缘故应选提取溶剂为55%丙酮-水料液比对总多酚收率的阻碍在恒定浸提时刻为3h、浸提温度为100℃、浸提次数为1次、提取溶剂为55%丙酮-水的条件下，分设1：10,1：15,1：20,1：25(W/V)共4个溶剂倍量进行提取，计算总多酚的收率，结果如图2由图2可知，总多酚的收率在料液比为1:20时达到最高点，应选定料液比为1:20提取温度对总多酚收率的阻碍在恒定提取时刻为3h,提取次数为1次、料液比为1:20、提取溶剂为55%f酮-水的条件下，分设50，60，70，80，90，100℃,6个温度点进行提取，计算总多酚的收率，结果如图3由图3可知，总多酚收率随提取温度的升高而增大，但温度高于75℃，总多酚含量明显下降因此，选定75℃为最正确提取温度提取时刻对总多酚收率的阻碍在恒定浸提温度为75℃、提取次数为1次、料液比为1:20、提取7§剂为55%f酮-水的条件下，分设1，2，3，，4，5h,共6个提取时刻，计算总多酚的收率。

从图4能够看出，提取时刻为的时候总多酚收率最高，随着提取时刻的延长，总多酚的收率大体不变，应选定h为最正确提取时刻4提取时刻对总多酚收率的阻碍浸提次数对总多酚收率的阻碍在恒定浸提时刻为h、浸提温度为75C、料液比为1：20、提取7§剂为55炳酮-水的条件下，分设1次，2次，3次，4次,共4个提取次数进行提取，计算总多酚的收率，结果见图5由图5可知，提取3次即可将总多酚提取完全故设定提取次数为3次图5浸提次数对总多酚收率的阻碍正交实验考察采纳L9(34)正交表考察最正确工艺条件多酚含量测定及总多酚收率计算同“项正交实验因素水平安排见表1，实验结果见表2表1因素水平3 结论分析可知，各因素的阻碍依次为D=C>A>B,即提取溶剂倍量=提取温度>提取溶剂浓度>提取时刻,因此最正确工艺组合为A1B3c3D3即25倍量的50炳酮-水，80C,提取3次，4h/次,总多酚含量为%，总多酚的收率为%其中提取溶剂倍量和提取温度对总多酚提取的阻碍较大参考文献】[1] 梁盛业,陆敏珠,黄连冬，等.中国金花茶栽培与开发利用[M].北京：中国林业出版社，2005：3.[2] KhanN,Mukhtarpolyphenolsforhealthpromtion[J].LifeSciences,2007,81(7):519.[3] ChandraMohanKVP,GunasekaranP,VaralakshmiE,etvitroevaluationoftheanticancereffectoflacto-ferrinandteapolyphenolcombinationonoralcarcinomacells[J].CellBiologyInternational,2007,31(6):599.[4]国家药典委员会.中国药典，I部[S].北京：化学工业出版社，2005：附录57.[5] 陈红惠，吕静，彭郦，等.雪莲果叶中多酚的提取工艺研究[J].食物科学,2020,30(2):88.[6] 颜栋美,李仁菊,丘华，等.金花茶多酚提取工艺的研究[J].现代食物科技，2007,23(9)：45.。