（精）医学检验本科毕业论文范例-供参考.docx

毕 业 论 文张珊医学检验题 目：乙肝表面抗原的 ELISA法定量分析方法学验证姓 名：学 号：系 别：年 级：专 业：指导教师：二 ○一 一 年 十二 月目 录中文文献 .............................................................英文摘要 .............................................................前 言.............................................. 错误！未定义书签1. 材料与方法 ...................................... 错误！未定义书签1.1 试剂盒 ......................................................1.2 仪 器 ........................................................1.3 方 法 ........................................................。

21.3.2 ．铺板方案 ...............................................1.3.3 ．加样步骤 ...............................................2. 结果..............................................................2.1 标准曲线与线性范围 ...........................................2.2 准确度（回收率）的验证 ...................................... 22.3 精密度的验证 .................................................2.3.1 板内精密度的验证 ........................................2.3.2 板间精密度的验证 ........................................2.4 检测限（ LOD）计算 ........................................... 53. 讨论............................................................. 53.1 乙肝表面抗原定量分析的意义 .................................. 53.2 常用定量分析方法 ............................................ 63.3 方法概述 .................................................... 63.4 方法学验证内容 .............................................. 63.5 结果分析及应用评价 .......................................... 7参考文献 ............................................................ 7乙肝表面抗原的 ELISA 法定量分析方法学验证摘 要2目的：对福州蓝图生物工程有限公司生产的 HBsAg的 ELISA 法定量分析试剂盒进行方法学验证，以判断是否能用于临床样本分析。

方法：ELISA法定量分析，应用试剂盒 HBsAg标准品从浓度为 8ng/ml 做 2 倍稀释的 6 个浓度梯度做标准曲线， 以 6，3，1.5ng/ml 3 个浓度梯度 5 复孔做准确度，精密度和检测限等方法学验证结果： 标准曲线 R=0.997 ，准确度 97.07%，1.5ng/ml 的 RSD为 16.78%，不满足 ng/ml 级水平的 RSD一般应 <15%的要求，检测限 LOD为 0.172ng/ml ，低浓度样品（ <1.5ng/ml ）的检测在准确性和精密度方面都低于高浓度样品，不适合低浓度样品的检测 结论：该 HBsAg的 ELISA 法定量分析试剂盒不能用于临床标本的分析关键词乙肝表面抗原 ELISA 定量分析 方法学验证The reification of the HBsAg ELISA quantitative methodologyAbstractObject: to verify the quantitative methodology of Fuzhou blueprintbiological engineering company to make sure whether it ca be used to the analysis of Clinical Sample. Methods: ELISA quantitative methodology , make an Application of the standard HBsAg kit from the concentration of8 ng/ml do 2 times diluted six concentration gradient to constitute astandard curve, testing With 6, 3, 1.5 ng/ml 3 a concentration gradient5 accurately precise and detection . Results : standard curve , R2=0.997, the accuracy of RSD of 1.5ng/m is 16.78% ，the RSD that cannot meet the demand of ng/ml basic level is less than <15% in common. The LOD is0.172ng/ml, the testing of Low concentration samples （<1.5ng/ml ） are lower than high concentration samples in both accuracy and precision ,which as a result makeit unsuitable for low concentration sample testing.Conclusion: the ELISA quantitative analysis kit of HBsAg cannot be used for the analysis of Clinical Sample.Key wordsHBsAg Quantitative analysis Verification Methodology.。

I前 言乙肝病毒感染是我国最常见的感染性疾病之一，而乙型肝炎血清标志物是检[1]测乙肝病毒感染最主要的病原标志 随着免疫学技术的不断发展， 抗原抗体检测灵敏度明显提高， 使低水平乙肝病毒得以检出， 对临床诊断及流行病学有重要意义 ELISA法具有较高灵敏度、特异性强、重复性好、可进行定量和半定量测定等优点，可以在酶免疫分析仪上做批量检测 目前临床上多倾向于做定量分析， 若想知道检验结果是否可靠， 实验室则必须对所用试剂盒进行方法学验证， 本实验对福州蓝图生物工程有限公司生产的 HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒进行准 确度，精密度和检测限等方法学验证，现报告如下1. 材料与方法1.1 试剂盒 乙肝表面抗原 ELISA 法定量分析试剂盒，福州蓝图生物工程有限公司出品1.2 仪器酶标仪：Bio-Rad 680 ；洗板机：Bio-Rad 1575；超纯水系统：Millipore Elix ； 电热恒温培养箱 (DNP-9052)上海精宏实验设备有限公司；振荡器（苏州管械，KJ-201A）；移液器； Tip 头； EP管1.3 方法1.3.1 ．溶液配置1 PBS缓冲液的配置： 称取 8g NaCl、 0.2g KCl 、1.44g Na 2HPO4 和 0.24g KH2PO4 ，溶于 800ml 蒸馏水中，用 HCl 调节溶液的 pH值至 7.4 ，最后加蒸馏水定容至 1L 即可。

标准品的配置：原始标准品浓度为 8 ng/ml 取 6 个 2mlEP管，分别标记为 S1-S650ul/well, 共 1 孔需 50ul ，每孔配置 60ul 备用， 按照下表稀释方案进行稀释编号 终浓度（ ng/ml ）预 加 1 PBS取 剩余标记 （ul ） （ ul ）S180标准品120S2460S16060S3260S26060S4160S36060S50.560S46060S60.2560S56060质控品的配置：50ul/well, 共 5 复孔需 250ul ，配置 300ul 备用，取 3 个 2mlEP管，分别标记为 C1，C2，C3，按照下表稀释方案进行稀释编号 终浓度（ ng/ml ）预 加 1 PBS取 剩余标记 （ul ） （ ul ）C16150标准品450C23300C1300300C31.5300C23003001.3.2 ．铺板方案 取出试剂盒中已包被酶标板， 取出板条， 按照下表铺板方案进行铺板在相应孔中依次加入系列标准品、质控品及空白对照，每孔 50ul 空白对照加入 1PBS缓冲液12345AS1C1C2C3PBSBS2C1C2C3PBSCS3C1C2C3DS4C1C2PBSES5C1C3PBSFS6C2C3PBS1.3.3 ．加样步骤加入酶标抗体， 50 ul/well ，震荡。

37℃电热恒温培养箱温育 60min， 取出后洗板 4 次， 加入 A、B 液, 50 ul/ well ，37℃电热恒温培养箱温育 15 min加入终止液， 50 ul/ well 酶标板放入酶标仪，盖上盖子，在电脑上打开 Microplate Manager 5.2 软件，选择 450nm波长（参照波长 630nm），设置 LAYOUT和报告模式，测定各孔吸收值2. 结果2.1 标准曲线与线性范围标准品理论浓度对应的实测 OD值HBsAg(ng/ml) 8 4 2 1 0.5 0.25OD 1.6。