纯净水菌落总数的测定培训教材.ppt

纯净水菌落总数测定,2012年1月30日-张玲,毛铺酒厂一分厂 质量科,纯净水菌落总数测定,设备和材料 恒温培养箱：30l； 冰箱：25； 无菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头； 无菌锥形瓶：容量250ml、500ml； 无菌培养皿：直径90mm； 放大镜； PCA培养基； 无菌生理盐水：称取8.5克氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121高压灭菌15min纯净水菌落总数测定,实验步骤 样品处理：用75%的酒精棉球擦拭瓶口灭菌，再用灭菌启瓶器 开启后进行检验 检样稀释及培养 （此法为直接培养法） 直接吸取桶装纯净水原液lmL于无菌平皿内，做两个平行样 原液移入平皿后，应及时将凉至 46营养琼脂培养基(可放置于 461水浴保温)注入平皿约l5mL，并转动平皿使混合均匀同 时将营养琼脂培养基倾入加有lmL无菌水的灭菌平皿内作空白对照 待琼脂凝固后，翻转平板，置30l温箱内培养482h 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在 凝固后的琼脂表面覆盖一薄层纯净水菌落总数测定,检样稀释及培养 （此法为稀释培养法） 以无菌吸管吸取25mL样品置盛有有225mL无菌生理盐水或无菌水水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。

用lmL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液lmL，沿管壁缓慢注入盛有9mL灭稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及内稀释液液面)，振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，做成1:100的稀释液 另取lmL无菌吸管，重复上个操作顺序，做10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释一次，即换用1支lmL无菌吸管或吸头纯净水菌落总数测定,根据样品污染情况的估计，选择2-3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在做10倍递增稀释的同时，吸取lmL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿 稀释液移入平皿后，应及时将凉至46营养琼脂培养基(可放置于461水浴保温)注入平皿约l5mL，并转动平皿使混合均匀同时将营养琼脂培养基倾入加有lmL无菌水的灭菌平皿内作空白对照 待琼脂凝固后，翻转平板，置30l温箱内培养48 2h 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层纯净水菌落总数测定,菌落计数方法 可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏在记下各平板的相应稀释倍数和的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数菌落计数以菌落形成单位（CFU）表示。

纯净水菌落总数测定,平板菌落数的选择 1、选取菌落数在30-300之间的平板作为菌落总数测定标准低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多部可计一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数平皿内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界线)，若仅有一条链，可视为一个菌落;如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计 2、若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之 3、若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之 4、若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之 5、若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间， 其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之纯净水菌落总数测定,平板菌落数的报告 、菌落小于100CFU时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。

、若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延 、若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效 、体积取样以CFU/mL为单位纯净水菌落总数测定,平板菌落数的计算方法 N=EC/(n1+0.1n2)d 式中： EC平板菌落数之和 N样品中菌落数 n1 第一适宜稀释度平板上的菌落数 n2第二适宜稀释度平板上的菌落数 d稀释因子（第一稀释度）,Thank You!,毛铺酒厂一分厂 质量科,知识回顾Knowledge Review,祝您成功！,。