hplc法测定复方甲硝唑含漱液中甲硝唑、呋喃西林含量 药学毕业论文(设计)四篇.doc

HPLCHPLC法测定复方甲硝唑含漱液中甲硝唑、呋喃西林含量法测定复方甲硝唑含漱液中甲硝唑、呋喃西林含量 摘摘 要要 目的目的 建立同时测定复方甲硝唑漱口液中甲硝唑、呋喃西林含量的高效液相色谱法方法方法 采用Lichrospher C18(5 μm, 4.6×250 mm) 色谱柱，乙腈-水(20:80)为流动相(1%磷酸，三乙胺调 pH 3.8)，检测波长为263 nm，流速为1.0 mL·min-1，柱温为35 ℃ 结果结果 甲硝唑和呋喃西林 的线性范围分别为 603~1407 μg·mL-1 (γ=0.9999)， 9.603~21.34 μg·mL-1 (γ=0.9987)回收率 分别为100.8%(RSD=0.41%~2.50%)，99.5%(RSD=0.20%~4.16%)；日内RSD为0.17%~0.20%和 0.76%~2.31%，n=5；日间RSD为0.10%~0.43%和0.13%~0.20%，n=4结论结论 HPLC法可用于 复方甲硝唑漱口液的含量测定，方法准确、灵敏，专属性强 关键词：关键词： 高效液相色谱法；甲硝唑；呋喃西林；漱口液 Determination of Metronidazole and Furacilin with HPLC Method ABSTRACT: Objective: To establish a HPLC method for simultaneous determination of metronidazole and furacilin in its Collut. Methods: A Lichrospher C18(5 μm,4.6×250 mm) column was used, the mobile phase was acetonirile-water(20:80) containing 1% phosphonic acid, which was adjusted to pH3.8 by TEA. The detection wavelength was 263nm and the flow number was 1 mL·min-1.The column temperature was kept at 35℃. Results: The linear ranges of metrondazole and furacilin were 603~1407 μg·mL-1(γ=0.99993) and 9.603~21.34 μg·mL-1(γ=0.99872), respectively. The recoveries were 100.8% (RSD: 0.41%~2.50%) and 99.5% (RSD: 0.20%~4.16%), respectively. The RSD of inter-day of two were 0.17%~0.20% and 0.76%~2.31%, n=5.The RSD of inter-day of two constituents were 0.10%~0.43% and 0.13% ~0.20%. Conclusion: The method is accurate, sensitive for compound metrondazole collut. KEY WORDS: HPLC, Metronidazole, Furacilin, Collut 复方甲硝唑含漱液为瑞金医院自制制剂，主要是由甲硝唑、呋喃西林、醋酸 氯己定（醋酸洗必泰）及辅料甘油、薄荷、甜蜜素等组成。

临床用于治疗牙龈出 血、牙周肿痛、口腔溃疡及溢脓口臭等口腔疾病本文建立了反相高效液相色谱 法同时分离和测定甲硝唑和呋喃西林的含量，方法准确、简便、灵敏，适用于制 剂的质量控制 1.仪器与试药仪器与试药 1.1 仪器 Waters 高效液相色谱仪，包括 510 型 CM, TCM，Empower 色谱管理软件 （美国 Waters 公司） ；BS224S 型电子分析天平（sartorius 公司） ；Milli-Q 超纯水 系统（美国 Millipore） ； CQ50 型超声波清洗器（上海超声波仪器厂） ；DELTA- 320pH 计（梅特勒-托力多仪器上海有限公司） ；XW-80A 型旋涡混合器（上海医 大仪器厂） ；TXL-16 型高速离心机（上海安亭科学仪器厂） 1.2 试剂 甲硝唑(武汉武药制药有限公司，批号：C04-10611216)、呋喃西林(厦门东风 药业有限公司)的对照品（中国药品生物制品检定所，批号：20051027） ；甲醇 （色谱纯，TEDIA） ；其它试剂均为分析纯复方甲硝唑含漱液 2 批（批号： 20070808，20070821） ，不含药物的空白溶液由我院制剂室制备。

2.方法与结果方法与结果 2.1 色谱条件与系统适应性 色谱柱 Lichrospher C18(5μm, 4.6×250mm), 流动相为乙腈 : 水(含 1%磷酸， 用三乙胺调至 pH 3.8) = (20:80)，检测波长 263nm，流速 1 mL·min-1，柱温：35 ℃ 在此色谱条件下，甲硝唑、呋喃西林能够完全分离，色谱峰形良好，保留时间分 别为 4.902min 及 8.490min，制剂中辅料对二种成分测定均不产生干扰在此色谱 条件下测定的色谱图见图 1 A B C A. 空白溶液 B. 对照品 C. 样品 1.甲硝唑 2.呋喃西林 图 1 . 复方甲硝唑含漱液的 HPLC 色谱图 2.2 标准溶液配制 精密称取呋喃西林3.2 mg，置于约4 mL的EP管中，精密加入3 mL甲醇，超声 2 min使其溶解，配制成含呋喃西林1067 μg·mL-1的标准贮备液；精密称取甲硝唑 对照品20.1 mg，置于10 mL的尖底离心管中，精密加入流动相5 mL，振摇使溶解, 4.902 8.490 2 1 8.404 2 4.862 1 mAU 0 50 100 150 200 10 250 6 + 5432min987 mAU 0 50 100 150 200 10 250 6 + 543 2min9 87 mAU 0 50 100 150 200 10 250 6 + 5432min987 配置成含甲硝唑4020 μg·mL-1的标准贮备液。

2.3 标准曲线 精密量取含呋喃西林1067 μg·mL-1的标准贮备液300 μL，置于约4 ml的EP管 中,加入蒸馏水2700 μL，摇匀，稀释成含呋喃西林106.7 μg·mL-1的标准贮备液;精 密量取不同量的甲硝唑、呋喃西林标准贮备液,并用蒸馏水稀释成不同浓度的标准 溶液,具体操作如下表: 表1 具体操作 浓度(μg·mL-1)甲硝唑 加入量(μL) 呋喃西林 加入量(μL) 蒸馏水 加入量(μL) 总体积 (μL)甲硝唑呋喃西林 A1509076010006039.603 B200110690100080411.737 C2501406101000100514.938 D3001805201000120619.206 E3502004501000140721.34 将配置好的标准溶液混旋,各取5 μL 进样测定，以浓度（C）对色谱峰面积(A)进 行线性回归，结果表明，甲硝唑浓度在603~1407 μg·mL-1，呋喃西林浓度在 9.603~21.34 μg·mL-1范围内，浓度与色谱峰面积呈良好线性关系，回归方程为分 别为： （1）甲硝唑： A = 2.00537726C-10.955335（r = 0.99993） ； （2）呋喃西林：A = 10.556592C-3.1793638（r = 0.99872） 。

2.4 回收率试验 精密量取不同量的标准贮备液，置于1.5 mLEP管中，分别加入蒸馏水稀释， 混匀，配置成低(QCL)、中(QCM)、高(QCH)三个浓度,每个浓度各配置6份,具体操 作如下表: 表2 具体操作 浓度(μg·mL-1) 甲硝唑 加入量(μL) 呋喃西林 加入量 (μL) 蒸馏水加入量 (μL) 总体积 (μL) 甲硝唑呋喃西林 QCL7040290400703.510.67 QCM10056244400100514.938 QCH130761944001306.520.273 精密5 μL 进样测定，以测得量与加入量的比值计算回收率，结果见表3 表3 回收率测定结果（n=6） 成分 加入量 (μg·mL-1) 测得量 (μg·mL-1) 回收率 (%) 平均回收 率 (%) RSD (%) 703.5707.83100.60.41 10051012.34100.70.42甲硝唑 1306.51320.86101.1 100.8 2.50 10.6710.5498.84.16 14.9414.95100.00.20呋喃西林 20.2720.2299.7 99.5 0.53 2.5 精密度试验 按照表2的操作方法，分别配制QCL、QCM、QCH各5份，且分别在日内（一 日重复5次）和日间（4日之内）进行HPLC分析，结果见表4 。

表4 甲硝唑呋喃西林含量测定精密度试验结果 日内（n=5）日间（n=4） 组分 浓度 （μg·mL-1）RSD (%)RSD (%) 703.50.200.10 10050.170.43 甲硝唑 1306.50.200.12 10.672.310.13 14.9380.880.13呋喃西林 20.2730.760.20 2.6 样品测定 将样品作为供试品溶液，以标准溶液C（含甲硝唑1005μg·mL-1，含呋喃西 林14.938μg·mL-1）作为对照品溶液，精密吸取供试品溶液与对照品溶液各5μL 进 样测定峰面积，以外标法计算样品中甲硝唑和呋喃西林标示量，2批样品测定结 果见表5 表5 样品测定结果(n=5) 批号样品 组分含量 （μg·mL-1） 组分标示量 (%) RSD (%) 甲硝唑960.3996.040.59 20070808 呋喃西林14.8598.991.01 甲硝唑956.3695.640.20 20070821 呋喃西林14.6397.561.20 3. 讨论讨论 复方甲硝唑含漱液中主要由醋酸洗必泰、甲硝唑及呋喃西林三种成分组成， 且三种成分均有紫外吸收，因而采用分光光度法测定，三组分可能互相干扰，而 且呋喃西林含量远低于甲硝唑，干扰难于消除。

因而我们在国内首次建立了一种 高效液相色谱法对主要成分进行分离、测定在实验过程中发现醋酸洗必泰没有 出峰，可能是由于所配制流动相或所选波长不适用所致，因此只对甲硝唑、呋喃 西林做了含量测定 呋喃西林在紫外波长263nm有最大吸收，且呋喃西林含量较低，因而选择 263nm作为检测波长研究中我们曾经试验多种流动相，发现水相和乙腈比例为 80 : 20时，各成分能够得到良好的分离另外，我们还尝试用不同的溶剂（流动 相、甲醇、水）作为稀释剂，发现用水作稀释剂时干扰最小 呋喃西林见光易分解，因而含漱液应避光保存，试验中也应尽量注意避光并 加快操作，以免影响结果 本研究建立的HPLC法，专属性高，线性良好，回收率、精密度均符合要求， 含量测定结果表明，二者的含量均符合要求具有分离好、干扰少，准确可靠、 操作方便的特点本研究中，甲硝唑及呋喃西林含量均在标示量的90 ~ 110％之 间，故可以确定复方甲硝唑含漱液中此两种成分含量占标示量范围90 ~ 110％为 控制范围此外，该方法操作简便，完全可以满足制剂室快检的要求 参考文献参考文献 致致 谢谢 附件三：药理学论文样本附件三：药理学论文样本 本本 科科 生生 毕毕 业业 论论 文文 论文题目论文题目： 学学 校：校：徐州医学院徐州医学院 院院 部：部：药学院药学院 专专 业：业： 学学 号：号： 姓姓 名：名： 指导。