甘草提取物对小鼠四氯化碳急性肝损伤的影响.doc

1甘草提取物对小鼠四氯化碳急性肝损伤 的影响作者：陈红艳,严莉,王建华,耿淼,杨新波【摘要】 目的 探讨甘草提取物对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性化学性肝损伤的保护作用方法 采用 CCl4 制备小鼠急性化学性肝损伤模型,50 只小鼠随机分成 5组：正常对照组、CCl4 模型组、联苯双酯组及甘草提取物小、大剂量组各给药组连续给药 7 d,测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、总蛋白(TP)活性及白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)的含量,以及肝组织中过氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量结果 甘草提取物能明显降低 CCl4 致急性肝损伤小鼠血清 ALT、AST 活性,降低肝匀浆中 MDA 含量,提高 SOD 活性结论 甘草对 CCl4 所致小鼠急性化学性肝损伤的保护作用可能与其抗脂质过氧化有关 【关键词】 甘草提取物；急性肝损伤；转氨酶；脂质过氧化；小鼠Abstract：Objective To explore the protective effects of extraction of Glycyrrhiza uralensis Fisch. (GC) on CCl4 induced acute hepatic injury in mice. Methods Acute hepatic injury model was made by CCl4. Fifty mice were divided into 5 groups (normal control group, CCl4 model group, bifendate group, low and high dose of GC group) and administrated for 7 days. The levels of ALT, AST, ALP, LPH, TP, ALB, GLB in serum and the activities of SOD, MDA in liver tissue were detected. Results The activities of ALT, AST and the level of MDA in GC group were significantly decreased, and the activity of SOD were significantly increased compared with the model group (P＜0.05). Conclusion GC has protective effects on CCl4 induced acute hepatic injury in mice and it may be related with anti-lipid peroxidation.Key words：extraction of Glycyrrhiza uralensis Fisch.；acute hepatic injury；transaminase；lipid peroxidation；mice2甘草为豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.胀果甘草 Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草 Glycyrrhiza glabra L.的干燥根及根茎,主要含有三萜类(甘草甜素及甘草酸盐、甘草次酸等)、黄酮类(甘草黄碱酮、异甘草黄酮、甘草素等)及甘草多糖类化合物等。

随着甘草有效成分研究的逐步深入,其药理作用也越来越被人们所认识,如保肝及对消化系统的作用、抗炎和抗变态反应作用、抗病原微生物作用、抗心律失常、抗血小板作用等[1],为利用、保护甘草资源开拓了新思路1 实验材料1.1 动物昆明种小鼠 50 只,18～22 g,雄性,中国医学科学院实验动物研究所提供[许可证号：SCXK(京)2005-0013]1.2 药物甘草提取物[由本所制备,水提后浓缩成流浸膏(1∶1),每 1 mL 溶液中含原药材 1 g]；四氯化碳(CCl4),分析纯,北京化工厂产品,批号 20061024；联苯双酯滴丸(1.5 mg/丸),北京协和药厂产品,批号 20070608；过氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、考马斯亮蓝蛋白(批号分别为 20070921、20070910、20071012)测定试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品1.3 主要仪器日立 7020 自动生化分析仪；瑞士 SUNRISE 酶联仪；22R 型高速冷冻台式离心机；DY89-1 电动玻璃匀浆机32 实验方法2.1 分组与造模小鼠 50 只,随机分为 5 组：正常对照组(N 组)、CCl4 模型组(M 组,浓度 0.1%,即0.1 mL CCl4 溶于 100 mL 橄榄油中,腹腔注射 0.01 mL/kg,现用现配)、联苯双酯组(LB 组)、甘草提取物小剂量组(GCS 组)、甘草提取物大剂量组(GCL 组),每组 10只。

2.2 给药N 组与 M 组给予等体积的生理盐水LB 组灌胃联苯双酯 100 mg/kg；GCS 组灌胃甘草提取物 2.5 g/kg；GCL 组灌胃甘草提取物 5 g/kg各给药组小鼠分别予0.2 mL/10 g 体重灌胃,连续 7 d,1 次/d,并于第 6 日给药后 1 h 腹腔注射 0.1% CCl4橄榄油剂,第 7 日给药 30 min 后(即攻毒 36 h,杀鼠前 12 h 禁食不禁水)摘一侧眼球取血,收集血清,取肝脏标本做病理检查2.3 观察指标血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、总蛋白(TP)活性及白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)含量；肝组织中 SOD、MDA 含量2.4 血清生化检测摘除小鼠眼球取血,静置,3 000 r/min,离心 15 min,用自动生化分析仪测定血清生化指标的活性42.5 肝匀浆的制备及生化测定取出肝脏,用冰冻的生理盐水冲洗,滤纸吸干后称重,取部分肝脏,剪碎后加入 9 倍生理盐水,在冰浴中用电动玻璃匀浆机制 10%肝匀浆液,3 000 r/min 离心 15 min,取上清液,测定方法均按相应的试剂盒说明操作。

2.6 病理标本制备用 10%福尔马林固定肝脏组织块,包埋,切片,采用 HE 染色方法进行常规病理检查,观察肝细胞病理情况 3 统计学方法所有数据采用 x±s 表示,采用 SPSS10.0 软件包进行数据处理,均数比较用 t 检验4 结果4.1 甘草提取物对小鼠肝细胞损伤程度的影响(见表 1)表 1 甘草提取物对小鼠肝细胞损伤程度的影响(略)注：与 M 组比较,*P＜0.05,**P＜0.01(下同)4.2 甘草提取物对小鼠肝细胞蛋白合成代谢的影响(见表 2)表 2 甘草提取物对小鼠肝细胞蛋白合成代谢的影响(略)4.3 甘草提取物对小鼠肝细胞氧化应激的影响(见表 3)表 3 甘草提取物对小鼠肝细胞氧化应激的影响(略)54.4 病理观察肝组织 HE 染色可见,N 组肝小叶结构正常,肝索结构清晰可辨,未见肝细胞变性、坏死等M 组改变明显,肝小叶失去正常结构,肝细胞不同程度的坏死伴炎细胞浸润,部分可见浊肿,体积增大,呈现气球样病变LB 组及 GCS、GCL 组与 M 组比较上述改变有一定减轻GCL 组炎性肝细胞明显减少,肝细胞脂肪变性明显好转,正常肝细胞数目增多,GCS 组效果稍差5 讨论在小鼠 CCl4 急性肝损伤中,脂质过氧化是其主要的肝损伤机制,CCl4 经Cyt·P450 亚族 Cyt·P450E1 活化后生成三氯甲基自由基(·CCl3),并在其启动的过氧化连锁反应中,产生毒性作用更强的二氯甲基自由基(·CCl2)及过氧化甲基自由基(·OOCCl3)。

这些自由基攻击肝细胞膜多为不饱和脂肪酸,引发脂质过氧化,导致肝细胞变性坏死或肝细胞通透性增强,胞浆内转氨酶渗出,导致血清中的 ALT 和AST 含量上升,检测血清 ALT、AST 活性在一定范围内反映肝细胞的损伤程度[2]本实验显示,甘草提取物能明显降低 CCl4 急性肝损伤引起的 ALT、AST 升高,且ALP、LDH 的水平也呈现出下降,表明甘草提取物对 CCl4 所致小鼠急性化学性肝损伤具有保护作用肝细胞的一个重要功能是合成与分泌血浆蛋白质,肝内蛋白质代谢极为活跃,肝功能受损时,ALB 合成减少,A/G 比值下降[3]但本实验表明,M 组中肝细胞蛋白质的代谢影响不明显,TP、GLB、ALB 略有下降,但无统计学意义,表明甘草提取物对由CC14 所致急性肝损伤的肝细胞蛋白合成无影响6体内抗氧化系统能力的降低是脂质过氧化产生的前提, SOD 是机体防御新陈代谢及其它生命活动中氧自由基损伤和破坏的一种重要金属酶,能使自由基发生歧化反应,阻止 CCl4 进入机体后生成三氯甲基自由基破坏肝细胞[4]另外,过氧化肝损伤时肝组织 MDA 含量增高,MDA 是体内自由基攻击脂质产生脂质过氧化物的代谢最终产物,可对细胞产生进一步破坏作用。

MDA 不仅是反映脂质过氧化的敏感指标,还可间接反映出细胞损伤的程度因此,可作为评价氧自由基脂质过氧化损伤的较敏感的指标[2]本研究结果显示,甘草提取物可明显降低 CC14 急性肝损伤小鼠肝组织 MDA 含量,且 SOD 活性增加,表明甘草具有增强肝脏抗氧化能力、减少脂质过氧化物生成的作用参考文献】[1] 于 辉,李春香,宫凌涛,等.甘草的药理作用概述[J].现代生物医学进展,2006,6(4)：77－79.[2] 陈祝英,何 萍,黄仁彬,等.乙肝转阴散保护小鼠 CCl4 急性肝损伤的生化机理[J].中药材,2007,30(2)：208－210.[3] 胡怡秀,刘秀英,胡余明,等.甘泰康对小鼠四氯化碳肝损伤的影响及其机理探讨[J].中国热带医学,2002,2(3)：303－306.[4] 林久茂,王瑞国.卷柏对实验性肝损伤小鼠保护作用的实验研究[J].福建中医学院学报,2006,16(2)：28－30。