猪皮胶原多肽结构的研究.pdf

山东轻工业学院硕士学位论文猪皮胶原多肽结构的研究姓名：崔凤霞申请学位级别：硕士专业：发酵工程指导教师：李天铎;李关宾20030601山东轻工业学院硕士学位论文摘要论文使用凝胶层析( G F C ) 、S D S ．聚丙烯酰胺凝胶电泳( S D S P A G E )及毛细管电泳( c E ) 三种方法对猪皮胶原多肽的结构进行分析研究，测定了多肽的分子量和分子羹分布、分子中的氨基．羧基数量比及其等电点等结构特性胶原多肽由猪革生产中的含铬革屑在碱性蛋白酶催化水解下得到，论文还对含铬革屑的水解进行了研究本文建立的含铬革屑的水解条件为：水．2 0 0 0 0 m L ，革屑：2 0 0 0 9 ：酶：06 0 m L ；起始p H ：1 1 ．0 0 ，反应时间：6 h 凝胶层析柱填料选用S e p h a d e x( 3 - 1 0 0 ，测得多肽分子量主要分布在两个区间：7 0 , 0 0 0 - 5 0 , 0 0 0 D 和3 0 ' 0 0 0 - - 2 0 ，0 0 0 D ，平均分子量分别为5 8 ，6 0 8 D 和2 4 ，5 8 0 D S D S ．P A G E 测 得多肽分子量主要分成两个蛋白条带：第一条带分子量约为7 0 。

0 0 0 - 5 0 , 0 0 0 D ，第二条带分子量约为3 0 ，o o o - - 2 0 ，0 0 0 D ，平均分子量分别为5 8 ，8 9 5 D 和2 2 ，3 6 4 D ；根据毛细管区带电泳理论，我们推导出多肽分子中氨基一羧基数量比的计算公式为：1l儡0 lo 、，1 + l O 州‘雎·玑11 —1 + l O 鸬一啦乞2k 2测得猪皮胶原多肽的氨基．羧基数量的比值约为0 9 51 ，比理论值的11 31 低1 6 ％，等电点约为8 o o ，比猪皮胶原蛋白的78 高2 ．7 ％G F C 、s D S _ P A G E 是蛋白质、多肽分子量测定的常规手段，论文借鉴其它蛋白质的测试条件，开展对猪皮胶原多肽分子量和分子量分布的分析研究，并对含铬革屑水解条件与多肽分子量的对应关系进行了初步探讨：毛细管电泳依据分子的荷质比实现组分的分离，据此，论文通过多肽的电泳速度与电渗流速度的比较，测定了其等电点，并通过多肽在等电点两侧p H 值下电泳时间的差异，计算分子中的氨基．羧基比，给出了 猪皮胶原多肽电荷特性、侧链官能团数量等分子精细结构信息论文研究结果将为蛋白质、多肽等两性分子的深层结构分析研究提供理论指导和新的实验方法，研究具有开拓性。

论文研究结果对皮胶原蛋白的资源山东轻工业学院硕士学位论文化利用具有重要意义关健词铬革屑胶原多肽分子量凝胶层析凝胶电泳毛细管电泳2山东轻工业学院硬士学位论文A b s t r a c tI nf l u st h e s i s ，t i ms t r u c t u r eo ft h ep o l y p e p U d e so fc o l l a g e nf r o mt r i gl e a t h e rw e 拂a n a l y z e da n ds t u 山c db yg e lf ' f l t r a t t o nc h r o m a t o g r a p h y ( G F C ) ．s o d i u md o d e c y ls u l p h a t e - p o l y a c r y l a n u d eg e le l e c t r o p h o r e s l s ( S D S —P A G E ) a n dc a p d l a r ye l e c u ' o p h o r e s m ( C E ) T h eM w - t h ed t s t n b u U o no ft h eM w , t h er a U oo fa n u d ot oc a r b o x y la n dt h ep Io ft h ep o l y p e p t l d e sw e f ed e t e r m m e dT h ep o l y p e p u d e so fc o l l a g e nw f f f ch y d r o | y z e df r o mc h r o m e dl e a t h e rw a s t c 熔p r o d u c e dd u r m gt h em a n u f a c t u r eo fp i gl e a t h e rc a t a l y z e db yp r o t e a s eF u r t h e r m o r e ，t h er a t eo fh y d r o l y m so fc o l l a g e nw a sa l s od e t e r m i n e di nt h mt h e s i s ．T h ef o l l o w i n gw a st h ec o m h t t o n so ft h eh y d r o l y s i sw a t e r2 0 00 0m L ．c h r o m e dl e a t h e rw a s t e , s ：2 00 0 9 ，e n z y m e06 0 m L ，t h eb e g u m u l gp H110 0 ，t h er e a c t i n gt i m e6 h ．T h eM wo ft h ep o l y l 蓐p t l d e sw a sd e t e r m i n e db yG F C ( S c p h a d e xG —1 0 0 ) w t u c hs h o w e dp o l y p e p 缸d e sw e r es e p a r a t e di n t ot w op a r t sT h eM wo fo n eo f t h et w op a r t sw a sb e t w e e n7 0 ．0 ( ) 0 Da n d5 0 , 0 0 0 Da n dt h eo t h e rw a sb e t w e e n3 0 , 0 0 0 Da n d2 0 ，0 0 0 DT h ea 、，c m g eM wo fo n eo ft h et w op a r t sw a s5 8 ，6 0 8 Da n dt h eo t h e rw a s2 4 ，5 8 0 D ．T h eM wo ft h ep o l y p e l m d e sw a sa l s od e t c r n u n c db yS D S ·P A G Ew t u c hs h o w e dt h a tt h eh y d r o l y t e so fp o l y p e p t l d e Sw e r ed m d e dm t ot w om a i ns t r i p sT h eM wo fo n eo ft h es t r i p sw a sb e t w e e n7 0 。

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