一节细菌的生化试验ppt课件.ppt

第一节第一节 细菌的生化实验细菌的生化实验一、概述一、概述〔一〕、什么是生化实验〔一〕、什么是生化实验? 指经过利用生物化学的方法来测定指经过利用生物化学的方法来测定微生物的代谢产物、代谢方式和条件等微生物的代谢产物、代谢方式和条件等来鉴别细菌的类别、属种的实验来鉴别细菌的类别、属种的实验〔二〕〔二〕 检验细菌的生化实验范围检验细菌的生化实验范围1、糖〔醇〕类代谢实验2、氨基酸和蛋白质代谢实验3、有机酸盐和铵盐的利用实验4、呼吸酶类实验5、毒性酶类实验〔三〕生化实验的方法〔三〕生化实验的方法1.在培育物中参与某种底物与指示剂在培育物中参与某种底物与指示剂,经接经接种、培育后种、培育后,察看培育基的察看培育基的PH值变化2.在培育物中参与试剂，察看它们同细菌在培育物中参与试剂，察看它们同细菌代谢产物所生成的颜色反响代谢产物所生成的颜色反响3.根据酶作用的反响特性，测定酶的存在根据酶作用的反响特性，测定酶的存在4.根据细菌对理化条件和药品的敏感性，根据细菌对理化条件和药品的敏感性，察看细菌的生长情况察看细菌的生长情况〔四〕生化实验的本卷须知〔四〕生化实验的本卷须知1、待检菌应是新颖培育物。

培育、待检菌应是新颖培育物培育18~24h2、待检菌应是纯种培育物待检菌应是纯种培育物3、遵守察看反响的时间察看结果的时间，、遵守察看反响的时间察看结果的时间，多为多为24或或48小时4、应做必要的对照实验应做必要的对照实验5、提高阳性检出率，至少挑取、提高阳性检出率，至少挑取2~3待检的疑待检的疑似菌落分别进展实验似菌落分别进展实验二、糖醇类代谢实验二、糖醇类代谢实验〔一〕糖醇类发酵实验〔二〕葡萄糖氧化发酵〔O/F〕实验 〔三〕V-P实验〔四〕甲基红〔Methyl Red〕实验   MR〔五〕七叶苷水解实验〔六〕甘油品红实验〔一〕〔一〕 糖醇类发酵实验糖醇类发酵实验1.原理：不同的细菌对各种糖醇的分解才干及所产生的代谢产物各不同，有的能分解多种糖醇〕，有的只能分解1~2种糖醇 ，有的分解糖醇能产酸产气，有的分解糖醇只产酸不产气，根据这些特点，可鉴别细菌常用的糖醇常用的糖醇单糖：葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠单糖：葡萄糖、甘露糖醇、木糖、半乳糖鼠李糖李糖双糖：乳糖、蔗糖、麦芽糖、蕈糖双糖：乳糖、蔗糖、麦芽糖、蕈糖三糖：棉子糖三糖：棉子糖多糖：菊糖、肝糖、淀粉多糖：菊糖、肝糖、淀粉醇类：甘露醇、山梨醇、肌醇、卫茅醇醇类：甘露醇、山梨醇、肌醇、卫茅醇2、实验方法：、实验方法： 用接种针或环移取纯培育物少许，接用接种针或环移取纯培育物少许，接种于糖发酵管中，假设为半固体培育基，种于糖发酵管中，假设为半固体培育基，那么用接种针作穿刺接种。

置那么用接种针作穿刺接种置36±1.0℃℃ 培育培育1~3天，每天察看结果天，每天察看结果3、结果察看和记录、结果察看和记录记录：记录：产酸不产气，阳性，以产酸不产气，阳性，以“+〞表示〞表示产酸产气，阳性，以产酸产气，阳性，以“⊕⊕〞表示〞表示不产酸产气，阴性，以不产酸产气，阴性，以“-〞表示〞表示气泡导管气泡气泡阳性阳性阴性培育基变为黄色培育基未变色、无气泡产生〔二〕葡萄糖氧化发酵〔〔二〕葡萄糖氧化发酵〔O/F〕实验〕实验　　1、原理：、原理：细菌对葡萄糖的分解，分为氧化型和发细菌对葡萄糖的分解，分为氧化型和发酵型氧化型细菌在有氧的条件下才干酵型氧化型细菌在有氧的条件下才干分解葡萄糖，无氧的条件下不能分解葡分解葡萄糖，无氧的条件下不能分解葡萄糖；发酵型细菌在有氧无氧条件下均萄糖；发酵型细菌在有氧无氧条件下均可分解葡萄糖；不分解葡萄糖的细菌称可分解葡萄糖；不分解葡萄糖的细菌称为产碱型根据糖管的色泽变化可鉴别为产碱型根据糖管的色泽变化可鉴别细菌　2、方法、方法•取待检菌，以穿刺法接种于两管葡取待检菌，以穿刺法接种于两管葡萄糖半固体培育基上，在其中一管萄糖半固体培育基上，在其中一管参与一层〔约参与一层〔约1Cm〕灭菌的液体石〕灭菌的液体石蜡以隔绝空气，在蜡以隔绝空气，在37℃℃培育培育2~4h天，天，每天察看结果。

每天察看结果3、结果察看与记录、结果察看与记录封油管封油管未封油管未封油管发酵型发酵型产酸（黄色）产酸（黄色）产酸（黄色）产酸（黄色）氧化型氧化型不产酸（绿色）不产酸（绿色）产酸（黄色）产酸（黄色）产碱型产碱型不产酸（绿色）不产酸（绿色）不产酸（绿色）不产酸（绿色）〔三〕〔三〕 V-P实验实验1、原理：某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮、原理：某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸经缩合、脱羧生成乙酰甲基甲酸，丙酮酸经缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧醇，后者在强碱环境下，被空气中的氧氧化为双乙酰，在化为双乙酰，在α-萘酚和肌酸的催化作用萘酚和肌酸的催化作用下，双乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化下，双乙酰与蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称合物，称V－－P〔〔+〕反响2、实验方法、实验方法〔〔1〕奥梅拉〔〕奥梅拉〔O’Meara〕法〕法〔〔2〕贝立脱〔〕贝立脱〔Barritt〕氏法〕氏法〔〔3〕快速法〕快速法　　　　〔１〕奥梅拉法：〔１〕奥梅拉法：        将实验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培育基，于36±1 ℃培育48h， 每1ml培育液加奥梅拉O’Meara试剂0.1ml，摇动试管1~2min，静置于37℃恒温箱4h ，或在48~50 ℃水浴放置2h后断定结果。

〔〔2〕贝立脱法：〕贝立脱法： 将实验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水将实验菌接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培育基，于培育基，于36±1℃℃培育培育2天，每天，每2ml培育液培育液先参与先参与6%a-萘酚纯酒精溶液萘酚纯酒精溶液1ml，再加，再加40%氢氧化钾水溶液氢氧化钾水溶液0.4ml，摇动，摇动2~5min，阳性，阳性菌常立刻呈现红色，假设无红色出现，静置菌常立刻呈现红色，假设无红色出现，静置于室温或于室温或36±1 ℃℃培育培育 4h ，如显现红色为阳，如显现红色为阳性，呈黄色或有类似铜色者，可断定为阴性性，呈黄色或有类似铜色者，可断定为阴性〔〔3〕快速法：〕快速法： 将将0.5%肌酸溶液肌酸溶液2滴放于小试管中，滴放于小试管中，挑取产酸反响的三糖铁琼脂斜面培育挑取产酸反响的三糖铁琼脂斜面培育物一接种环，乳化接种于其中，参与物一接种环，乳化接种于其中，参与5%α-萘酚萘酚3滴，滴，40%氢氧化钠水溶液氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置滴，振动后放置5min，断定结果不，断定结果不产酸的培育物不能运用产酸的培育物不能运用3、结果察看与记录、结果察看与记录〔〔1〕发酵管出现红色者，为阳性，〕发酵管出现红色者，为阳性， 记记V-P +〔〔2〕发酵管为黄色或铜绿色者，为阴〕发酵管为黄色或铜绿色者，为阴性，记性，记 V-P -〔四〕甲基红实验〔〔四〕甲基红实验〔MR〕〕1、原理　细菌分解葡萄糖产生丙酮酸后，、原理　细菌分解葡萄糖产生丙酮酸后，由于代谢的途径不同，有的细菌可使丙由于代谢的途径不同，有的细菌可使丙酮酸转化生成乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酮酸转化生成乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，使培育基酸等大量酸性产物，使培育基PH值下降值下降至至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红色，以下，使甲基红指示剂变红色，为甲基红实验阳性为甲基红实验阳性 ；有的细菌使丙酮酸；有的细菌使丙酮酸脱羧后构成酮、醇类中性产物，培育液脱羧后构成酮、醇类中性产物，培育液pH＞＞5.4，甲基红指示剂呈桔黄色，为，甲基红指示剂呈桔黄色，为甲基红实验阴性。

甲基红实验阴性2、实验方法：、实验方法： 挑取新颖的待试培育物少许，接挑取新颖的待试培育物少许，接种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培育基，种于磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培育基，于于36±1 ℃℃或或30 ℃℃〔以〔以30 ℃℃较好〕培较好〕培育育3~5天，从第天，从第48h起，每日取培育液起，每日取培育液1ml，参与甲基红指示剂，参与甲基红指示剂1~2滴，立刻滴，立刻察看结果察看结果MR-VP实验原理及照片V-P3、结果察看与记录、结果察看与记录〔〔1〕呈鲜红色或橘红色为阳性，呈淡〕呈鲜红色或橘红色为阳性，呈淡红色为弱阳性，记红色为弱阳性，记MR +；；〔〔2〕呈橘黄色或黄色为阴性，〕呈橘黄色或黄色为阴性， 记记MR -，迄至发现阴性并培育至第，迄至发现阴性并培育至第5天仍为阴性，即可断定结果天仍为阴性，即可断定结果MR +MR -〔五〕〔五〕 七叶苷水解实验七叶苷水解实验１、原理：七叶苷被细菌分解后，１、原理：七叶苷被细菌分解后，生成葡萄糖和七叶素，七叶素与生成葡萄糖和七叶素，七叶素与Fe2+结合，生成黑色化合物，使结合，生成黑色化合物，使培育基呈黑色，以此鉴别细菌。

培育基呈黑色，以此鉴别细菌2、实验方法：、实验方法： 将待试纯培育物少许，接种于七将待试纯培育物少许，接种于七叶苷培育基，于叶苷培育基，于36±1 ℃℃培育培育24h,察看察看结果3、结果察看与记录、结果察看与记录〔〔1〕培育基变为黑色或棕黑色者，为阳〕培育基变为黑色或棕黑色者，为阳性，记录为性，记录为 +〔〔2〕培育基不变色者，为阴性，记录为〕培育基不变色者，为阴性，记录为 -〔六〕〔六〕 甘油品红实验甘油品红实验1、原理：、原理：某些细菌可分解甘油成为丙酮酸，并进某些细菌可分解甘油成为丙酮酸，并进一步脱羧生成乙醛，乙醛与无色品红一步脱羧生成乙醛，乙醛与无色品红生成醌式化合物，呈深紫红色，以此生成醌式化合物，呈深紫红色，以此鉴别细菌鉴别细菌2、实验方法：、实验方法： 取待检菌的新颖纯培育物，接种取待检菌的新颖纯培育物，接种于甘油品红肉汤培育基中，于于甘油品红肉汤培育基中，于36±1 ℃℃培育培育8天天,并用未接种的培育基在一样条并用未接种的培育基在一样条件下培育作为阴性对照，察看结果件下培育作为阴性对照，察看结果3、结果察看与记录、结果察看与记录〔〔1〕出现紫色或紫红色者〕出现紫色或紫红色者,为阳性，记为阳性，记录为录为+；；〔〔2〕与对看管颜色一样者〕与对看管颜色一样者,为阴性，记为阴性，记录为录为-复习题1、什么是生化实验、什么是生化实验?2、做生化实验要留意哪些事项？、做生化实验要留意哪些事项？3、简述糖醇类发酵实验的原理，写出其实验、简述糖醇类发酵实验的原理，写出其实验方法和结果的记录方法和结果的记录5、简述甲基红实验〔、简述甲基红实验〔MR〕的原理，写出其实〕的原理，写出其实验方法和结果的记录验方法和结果的记录〔一〕靛基质〔吲哚〕实验〔一〕靛基质〔吲哚〕实验〔二〕〔二〕H2S实验实验〔三〕尿素酶实验〔三〕尿素酶实验〔四〕氨基酸脱羧酶实验〔四〕氨基酸脱羧酶实验〔五〕苯丙氨酸脱氨酶实验〔五〕苯丙氨酸脱氨酶实验 (六六) 明胶〔明胶〔Gelatin〕液化实验〕液化实验三、氨基酸和蛋白质代谢实验三、氨基酸和蛋白质代谢实验〔一〕〔一〕 靛基质实验靛基质实验1、原理：某些细菌含有色氨酸酶，能分解、原理：某些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质〔吲哚〕。

蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质〔吲哚〕吲哚与对二甲氨基苯甲醛结合，可构成红吲哚与对二甲氨基苯甲醛结合，可构成红色化合物，即玫瑰吲哚，以此鉴别细菌　色化合物，即玫瑰吲哚，以此鉴别细菌　2、实验方法：、实验方法：所用试剂:〔1〕柯凡克(Kovacs)试剂;或〔2〕欧—波试剂             将待检菌小量接种于培育基中，于36±1 ℃培育24~48h时后，参与柯凡克试剂数滴，轻摇试管，呈红色者为阳性              或沿试管壁缓慢参与欧-波试剂约0.5ml覆盖液面，两液接触处呈现玫瑰红色者，为阳性反响，无红色者为阴性反响靛基质实验原理及照片靛基质实验原理及照片 靛基质+3、结果察看与记录、结果察看与记录呈现玫瑰红色，为阳性反响，记+无红色者，为阴性反响，记-〔二〕〔二〕 硫化氢〔硫化氢〔H2S〕实验〕实验1、原理：、原理： 某些细菌可分解培育基中的含硫氨某些细菌可分解培育基中的含硫氨基酸或含硫化合物，产生硫化氢，硫基酸或含硫化合物，产生硫化氢，硫化氢遇铅盐或铁盐可生成黑色沉淀物化氢遇铅盐或铁盐可生成黑色沉淀物PbS或或FeS，以此鉴别细菌以此鉴别细菌2、实验方法：、实验方法： 挑取待检菌，用穿刺接种法接挑取待检菌，用穿刺接种法接种于三糖铁培育上，于种于三糖铁培育上，于36±1℃℃培育培育24~48h，察看结果。

察看结果3、结果察看与记录、结果察看与记录•培育基底部呈黑色，为阳性，记培育基底部呈黑色，为阳性，记+•培育基底部无黑色，为阴性，记培育基底部无黑色，为阴性，记-〔三〕〔三〕 尿素酶实验尿素酶实验1、原理：、原理： 某些细菌能产生尿素酶，将尿素某些细菌能产生尿素酶，将尿素分解产生氨，氨使培育基变为碱性，分解产生氨，氨使培育基变为碱性，使培育基中的酚红指示剂呈粉红色，使培育基中的酚红指示剂呈粉红色，培育基由黄色变为红色，为阳性以培育基由黄色变为红色，为阳性以此鉴别细菌　此鉴别细菌　2、实验方法：、实验方法：                挑取大量培育18~24h的待试菌，浓密涂布接种于尿素琼脂斜面上，不要到达底部，留底部作变色对照培育2、4和24h分别察看一次结果，培育基变为粉红色为阳性，颜色不变者为阴性如阴性应继续培育至4天，作最终断定尿素酶实验图尿素酶实验图 阳性3、结果察看与记录、结果察看与记录•培育基变呈粉红色，为阳性，记培育基变呈粉红色，为阳性，记 +•培育基颜色不变，为阴性，记培育基颜色不变，为阴性，记 -〔四〕〔四〕 氨基酸脱羧酶实验氨基酸脱羧酶实验1、原理：某些细菌能产生氨基酸脱羧酶, 可使赖氨酸、鸟氨酸消费脱羧作用, 生成胺类物质和CO2。

胺类物质使培育基呈碱性变紫色，为阳性, 如呈黄色为阴性，以此鉴别细菌2、实验方法、实验方法 取待检菌，分别接种于含有氨基酸取待检菌，分别接种于含有氨基酸的培育基内和不含氨基酸的对照培育的培育基内和不含氨基酸的对照培育基内，在基内，在36±1 ℃℃培育培育1~4天，每天察天，每天察看结果3、结果察看与记录、结果察看与记录•实验管呈紫色，对看管呈黄色，为阳实验管呈紫色，对看管呈黄色，为阳性，记性，记 +•实验管、对看管都呈黄色，为阴性，实验管、对看管都呈黄色，为阴性，记记 -实实验验管管对看管阳性+阴性-对看管变黄实实验验管管变变黄黄阳性反响实验管颜色变化过程阳性反响实验管颜色变化过程紫色紫色→黄色黄色→紫色紫色原理：原理：对看管呈黄色，阐明有细菌生长在培育的早期对看管呈黄色，阐明有细菌生长在培育的早期〔〔10~12h〕，细菌发酵葡萄糖产酸使培育液〕，细菌发酵葡萄糖产酸使培育液PH下降，指示剂溴甲酚紫由紫色变为黄色，下降，指示剂溴甲酚紫由紫色变为黄色，以后由于氨基酸脱羧生成胺，以后由于氨基酸脱羧生成胺，PH又上升至碱又上升至碱性，指示剂显紫色性，指示剂显紫色阳性反响实验管颜色变化过阳性反响实验管颜色变化过程：程：紫色紫色→黄色黄色→紫色紫色〔五〕〔五〕 苯丙氨酸脱氨酶实验苯丙氨酸脱氨酶实验1、原理：、原理： 某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶，某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基，构成苯丙酮酸，使苯丙氨酸脱去氨基，构成苯丙酮酸，苯丙酮酸与氯化铁作用生成绿色化合苯丙酮酸与氯化铁作用生成绿色化合物，以此鉴别细菌。

物，以此鉴别细菌2、实验方法、实验方法•从待检菌琼脂斜面上挑取大量培育物，从待检菌琼脂斜面上挑取大量培育物，接种于苯丙氨酸培育基上，在接种于苯丙氨酸培育基上，在36±1 ℃℃培育培育18~24h后，参与氯化铁溶液后，参与氯化铁溶液4~5滴，转动试管，使试剂与菌苔外滴，转动试管，使试剂与菌苔外表充分接触，立刻察看结果表充分接触，立刻察看结果3、结果察看与记录•实验管立刻出现绿色，为阳性，记 +•无色为阴性，记  -加氯化铁试剂出现绿色+〔六〕〔六〕 明胶液化实验明胶液化实验　1、原理     　有些细菌具有明胶酶〔亦称类蛋白水解酶〕，能将明胶先水解为多肽，又进一步将多肽水解为氨基酸，明胶失去凝胶性质，使培育基由固态变为液态2、实验方法、实验方法 挑取培育挑取培育18~24h的待试菌，以较大量穿的待试菌，以较大量穿刺接种于明胶高层约刺接种于明胶高层约2/3深度于20~22℃℃培培育育7~14天明胶高层亦可培育于天明胶高层亦可培育于36±1℃℃另取一支未接种的培育基一同培育作对照，每取一支未接种的培育基一同培育作对照，每天取出两支试管，放入冰箱放置天取出两支试管，放入冰箱放置20~30min后，再察看结果。

后，再察看结果3、结果察看与记录、结果察看与记录•明胶液化，为阳性，+•明胶凝固，为阴性，-复习题1、简述靛基质实验的原理，写出其实验方法、结、简述靛基质实验的原理，写出其实验方法、结果的记录和本卷须知果的记录和本卷须知2、简述硫化氢实验的原理，写出其实验结果的记、简述硫化氢实验的原理，写出其实验结果的记录和本卷须知录和本卷须知3、简述尿素酶实验的原理，写出其实验方法、结、简述尿素酶实验的原理，写出其实验方法、结果的记录果的记录4、简述氨基酸脱羧酶实验的原理，写出结果的记、简述氨基酸脱羧酶实验的原理，写出结果的记录、阳性反响实验管颜色变化过程和原理录、阳性反响实验管颜色变化过程和原理四、四、 有机酸盐和铵盐的利用实验有机酸盐和铵盐的利用实验Ü枸橼酸盐利用实验Ü丙二酸盐利用实验〔一〕〔一〕 枸橼酸盐利用实验枸橼酸盐利用实验1、原理：、原理： 某些细菌能利用柠檬酸盐作为独一某些细菌能利用柠檬酸盐作为独一碳源，分解枸橼碳源，分解枸橼(柠檬柠檬)酸盐生成碳酸盐；酸盐生成碳酸盐；同时分解培育基的铵盐生成氨，使培育同时分解培育基的铵盐生成氨，使培育基变为碱性，使指示剂溴麝香草酚蓝由基变为碱性，使指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿转为深蓝色，为阳性。

淡绿转为深蓝色，为阳性2、实验方法、实验方法 挑取待检菌，在西蒙枸橼酸盐培育基斜挑取待检菌，在西蒙枸橼酸盐培育基斜面上密集划线接种，在面上密集划线接种，在36±1 ℃℃培育培育1~4天，每天察看结果天，每天察看结果3、结果察看与记录、结果察看与记录•斜面有菌苔生长，培育基斜面变为蓝斜面有菌苔生长，培育基斜面变为蓝色或深蓝色，为阳性，记色或深蓝色，为阳性，记+；；•无菌苔生长，培育基斜面仍为绿色者，无菌苔生长，培育基斜面仍为绿色者，为阴性，记为阴性，记-枸椽酸盐实验原理及斜面照片 阳性+〔二〕〔二〕 丙二酸盐利用实验丙二酸盐利用实验1.原理原理: 某些细菌可以利用培育基中的丙某些细菌可以利用培育基中的丙二酸盐作为独一碳源二酸盐作为独一碳源,丙二酸盐被分解丙二酸盐被分解成碳酸钠成碳酸钠,使培育基变为碱性使培育基变为碱性,培育基由培育基由草绿色变成蓝色，为阳性，以此鉴别草绿色变成蓝色，为阳性，以此鉴别细菌2、实验方法、实验方法 取待检菌新颖纯培育物，接种于取待检菌新颖纯培育物，接种于丙二酸钠培育基上，于丙二酸钠培育基上，于36±1 ℃℃培育培育48h，察看结果。

察看结果3、结果察看与记录、结果察看与记录•培育基由草绿色变成蓝色培育基由草绿色变成蓝色,为阳性为阳性,记记+;•培育基无颜色变化培育基无颜色变化,为阴性为阴性,记记-五、五、 呼吸酶类实验呼吸酶类实验F氧化酶实验F过氧化氢酶实验F硝酸盐复原实验F氰化钾实验〔一〕〔一〕 氧化酶实验氧化酶实验1.原理原理: 氧化酶使细胞色素氧化酶使细胞色素C氧化后，氧化氧化后，氧化型细胞色素型细胞色素C再使盐酸二甲基对苯二胺再使盐酸二甲基对苯二胺氧化，使生成玫瑰红色到暗紫色的醌类氧化，使生成玫瑰红色到暗紫色的醌类化合物化合物,再和再和α-萘酚结合萘酚结合,生成吲哚酚蓝生成吲哚酚蓝,呈蓝色反响，为阳性呈蓝色反响，为阳性试剂•1% α-萘酚萘酚-乙醇液乙醇液•1%盐酸二甲基对苯二胺盐酸二甲基对苯二胺2、实验方法、实验方法•用滴管直接滴加1%盐酸二甲基对苯二胺试剂1~2滴在培育物上,再参与1% α-萘酚-乙醇液1~2滴, 在30秒内断定实验结果3、结果察看与记录、结果察看与记录•在30秒内呈蓝色反响,为阳性,记  +•不变色或为红色者,为阴性,记  -成蓝色为+不变色或为红色为不变色或为红色为-〔二〕〔二〕 过氧化氢酶实验过氧化氢酶实验1.原理：原理： 某些细菌可分泌过氧化氢酶，某些细菌可分泌过氧化氢酶，参与过氧化氢后，可将过氧化氢分参与过氧化氢后，可将过氧化氢分解生成水和氧气，产生气泡，即为解生成水和氧气，产生气泡，即为阳性反响。

阳性反响2、实验方法、实验方法•挑取固体培育基上的新颖菌落一环，置于干挑取固体培育基上的新颖菌落一环，置于干净玻片上〔或试管〕，滴加净玻片上〔或试管〕，滴加3%过氧化氢液过氧化氢液数滴，或在琼脂斜面培育物上直接滴加过氧数滴，或在琼脂斜面培育物上直接滴加过氧化氢液，立刻察看结果化氢液，立刻察看结果3、结果察看与记录、结果察看与记录•产生气泡者，为阳性，记产生气泡者，为阳性，记+•不产生气泡者，为阴性，记不产生气泡者，为阴性，记-〔三〕硝酸盐复原实验〔三〕硝酸盐复原实验1、原理：某些细菌具有复原硝酸盐的才干，、原理：某些细菌具有复原硝酸盐的才干，可将硝酸盐复原为亚硝酸盐，在酸性条件下，可将硝酸盐复原为亚硝酸盐，在酸性条件下，亚硝酸盐可生成亚硝酸，亚硝酸与对氨基苯亚硝酸盐可生成亚硝酸，亚硝酸与对氨基苯磺酸作用，生成重氮苯磺酸，重氮苯磺酸再磺酸作用，生成重氮苯磺酸，重氮苯磺酸再与与α-萘胺作用，生成红色的化合物，呈红色萘胺作用，生成红色的化合物，呈红色反响，为阳性反响反响，为阳性反响试剂•A、对氨基苯磺酸试剂•B、α-萘胺试剂2、实验方法、实验方法•取待检菌新颖纯培育物，在硝酸盐培育取待检菌新颖纯培育物，在硝酸盐培育基上接种，在基上接种，在36±1 ℃℃培育培育1~4天，每天天，每天取取2mL培育液培育液,参与参与A、、B试剂的等量混试剂的等量混合物各二滴混匀，立刻察看结果。

合物各二滴混匀，立刻察看结果3、结果察看与记录•呈现红色，为阳性，记呈现红色，为阳性，记+•假设无红色出现，为阴性，记假设无红色出现，为阴性，记-〔四〕〔四〕 氰化钾实验氰化钾实验1.原理：原理： 氰化钾是细菌呼吸酶系统的抑制剂氰化钾是细菌呼吸酶系统的抑制剂,可与可与呼吸酶作用使酶失去活性呼吸酶作用使酶失去活性,抑制细菌的生长抑制细菌的生长,但有的细菌在一定浓度的氰化钾存在时仍但有的细菌在一定浓度的氰化钾存在时仍能生长能生长,以此鉴别细菌以此鉴别细菌.2、实验方法、实验方法•     取培育20～24h的营养肉汤培育液或菌落1环，接种至对照培育基及氰化钾培育基内，立刻以橡胶塞塞紧，36±1 ℃培育24～ 48h，察看结果3、结果察看与记录、结果察看与记录•对看管有菌生长，实验管有菌生长对看管有菌生长，实验管有菌生长为阳性，记为阳性，记+•对看管有菌生长，实验管无菌生长对看管有菌生长，实验管无菌生长为阴性记为阴性 六、毒性酶类实验六、毒性酶类实验F溶血实验溶血实验F链激酶实验链激酶实验F卵磷脂酶实验卵磷脂酶实验F血浆凝固酶实验血浆凝固酶实验〔一〕〔一〕 溶血实验溶血实验1、原理：、原理： 某些细菌在代谢过程中能产生溶血某些细菌在代谢过程中能产生溶血素，可使人或动物的红细胞发生溶解，素，可使人或动物的红细胞发生溶解，不同的细菌有不同的溶血反响，借此不同的细菌有不同的溶血反响，借此可鉴别细菌。

可鉴别细菌2、实验方法、实验方法有二种：有二种：平板法平板法试管法试管法平板法平板法 将培育物接种于血平板培育基上，将培育物接种于血平板培育基上，36±1 ℃℃培育培育24～～ 48h，察看结果察看结果溶血实验的溶血类型及景象溶血实验的溶血类型及景象〔〔1〕〕 α〔甲型〕溶血〔甲型〕溶血: 菌落周围出现较窄菌落周围出现较窄的半透明的草绿色溶血环的半透明的草绿色溶血环〔〔2〕〕 β 〔乙型〕溶血〔乙型〕溶血: 菌落周围出现较宽菌落周围出现较宽的透明溶血环的透明溶血环〔〔3〕〕γ〔〔-丙型〕溶血丙型〕溶血: 菌落周围无溶血环菌落周围无溶血环甲型〔α-〕溶血乙型〔β-〕溶血丙型〔γ-〕溶血试管法 将待检菌培育液与等量的将待检菌培育液与等量的2%羊血球混羊血球混合，在合，在36±1 ℃℃培育培育16～～ 18h，察看结果察看结果如溶血，培育液可出现透明状如溶血，培育液可出现透明状3、结果察看与记录、结果察看与记录•有溶血景象，为阳性，记有溶血景象，为阳性，记+；；•无溶血景象，为阴性，记无溶血景象，为阴性，记 -〔二〕〔二〕 链激酶实验链激酶实验1、原理：、原理： A群链球菌群能产生链激酶，该酶能使血群链球菌群能产生链激酶，该酶能使血液中的纤维蛋白酶原变成纤维蛋白酶，而液中的纤维蛋白酶原变成纤维蛋白酶，而后溶解纤维蛋白，使血凝块溶解后溶解纤维蛋白，使血凝块溶解 ,为阳性反为阳性反响。

响 此实验用于测定链球菌的致病性阳性此实验用于测定链球菌的致病性阳性反响具有致病性反响具有致病性2、实验方法、实验方法 汲取草酸钾血浆汲取草酸钾血浆0.2 mL(0.01 g草酸钾加草酸钾加5 mL兔血浆混匀，经离心沉淀，汲取上清液兔血浆混匀，经离心沉淀，汲取上清液)，，参与参与0.8 mL生理盐水，混匀后，再参与待检菌生理盐水，混匀后，再参与待检菌36℃℃下培育下培育18-24h肉汤培育物肉汤培育物0.5 mL和和0.25％％氯化钙氯化钙0.25 mL，混匀，放，混匀，放37℃℃水浴中，水浴中，2 min察看一次察看一次 待血浆凝固后继续察看待血浆凝固后继续察看并记录溶化时间如并记录溶化时间如2 h内不内不溶化，继续放置溶化，继续放置24 h后察看同时用肉浸液肉汤做阴性对同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用知的链激酶阳性的菌照，用知的链激酶阳性的菌株做阳性对照株做阳性对照3、结果察看与记录、结果察看与记录•如凝块全部溶化如凝块全部溶化,为阳性为阳性+，，•凝块凝块24 h仍不溶化仍不溶化,为阴性为阴性-〔三〕卵磷脂酶实验〔三〕卵磷脂酶实验1、原理：、原理： 某些微生物能产生卵磷脂酶，在钙离子存某些微生物能产生卵磷脂酶，在钙离子存在时，能迅速分解卵磷脂，生成不溶性甘油在时，能迅速分解卵磷脂，生成不溶性甘油酯和水溶性磷酸胆碱，在卵黄琼脂平板上菌酯和水溶性磷酸胆碱，在卵黄琼脂平板上菌落周围构成不透明的乳浊环或混浊白环，或落周围构成不透明的乳浊环或混浊白环，或使血清、卵黄液变混浊，以此鉴别细菌。

使血清、卵黄液变混浊，以此鉴别细菌2、实验方法、实验方法〔〔1〕卵黄平板法：〕卵黄平板法： A法：法： 将待检菌培育物划线接种或点种于卵将待检菌培育物划线接种或点种于卵黄琼脂平板上，黄琼脂平板上，36±1 ℃℃培育培育3～～ 6h，察看，察看结果 菌落白色混浊环，B 法：法： 先用卵黄磷脂酶抗血清将平板涂一半，置于先用卵黄磷脂酶抗血清将平板涂一半，置于36 ℃℃待干后，将待检菌接种于未涂抗血清的一半待干后，将待检菌接种于未涂抗血清的一半卵黄琼脂平板上，再转划已涂过抗血清的一半，卵黄琼脂平板上，再转划已涂过抗血清的一半，36±1 ℃℃厌氧培育厌氧培育24～～ 48h，察看结果察看结果 在未涂抗血清的一半平板上，菌落周围构成在未涂抗血清的一半平板上，菌落周围构成较大的不透明乳白色混浊区，在涂抗血清的一半较大的不透明乳白色混浊区，在涂抗血清的一半平板上，菌落周围无不透明混浊区，为阳性平板上，菌落周围无不透明混浊区，为阳性 两边均无不透明区，为阴性两边均无不透明区，为阴性菌落周围无混浊白环菌落周围有混浊白环乳糖卵黄琼脂平板,借以确定该菌可否产生卵磷脂酶。

卵磷脂酶具抗原性，其活性可被相应抗血清所抑制，〔〔2〕卵黄盐水法〕卵黄盐水法 将庖肉培育基培育物经除菌过滤，搜将庖肉培育基培育物经除菌过滤，搜集滤液在两支灭菌试管内，每管参与集滤液在两支灭菌试管内，每管参与1%卵黄盐水卵黄盐水0.4mL,在一管中参与滤液在一管中参与滤液0.2mL，另一管参与生理盐水，另一管参与生理盐水0.2mL作对照在作对照在36 ℃℃ 水浴中，经水浴中，经2h、、 4h、、 8h、、 24h察察看结果 管底发生混浊沉淀，对看管无沉淀者，管底发生混浊沉淀，对看管无沉淀者，为阳性3、结果察看与记录、结果察看与记录菌落周围构成较大的不透明区，为阳性菌落周围构成较大的不透明区，为阳性两边均无不透明区，为阴性两边均无不透明区，为阴性管底发生混浊沉淀，对看管无沉淀者，为阳性管底发生混浊沉淀，对看管无沉淀者，为阳性两管无沉淀者，为阴性两管无沉淀者，为阴性〔四〕〔四〕 血浆凝固酶实验血浆凝固酶实验1、原理：致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，、原理：致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白，可使血浆中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白，附着在细菌的外表，构成凝块；或作用于血附着在细菌的外表，构成凝块；或作用于血浆凝固酶原，使它成为血浆凝固酶，从而使浆凝固酶原，使它成为血浆凝固酶，从而使抗凝的血浆发生凝固景象抗凝的血浆发生凝固景象,为阳性。

为阳性2、实验方法、实验方法〔〔1〕玻片法：〕玻片法： 取清洁枯燥载玻片，一端滴加一滴生理盐取清洁枯燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水，另一端滴加一滴兔〔人〕血浆，挑取菌落水，另一端滴加一滴兔〔人〕血浆，挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合，分别与生理盐水和血浆混合，5 min内内,如血浆如血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊，那么为阳性混浊，那么为阳性;如两者呈均匀混浊，无凝如两者呈均匀混浊，无凝固那么为阴性固那么为阴性有凝块均匀混浊血浆生理盐水血浆凝固酶实验〔〔2〕试管法〕试管法 取灭菌小试管取灭菌小试管3支，各参与血浆支，各参与血浆①①－无菌水－无菌水(1:1)0.5ml，，1支参与被检菌株的营养肉汤培育液支参与被检菌株的营养肉汤培育液〔或浓菌悬液〕〔或浓菌悬液〕0.5ml；其他；其他2支作对看管，支作对看管，1支参支参与金黄色葡萄球菌的营养肉汤培育液或菌悬液与金黄色葡萄球菌的营养肉汤培育液或菌悬液0.5ml作阳性对照作阳性对照;另另1支参与营养肉汤或支参与营养肉汤或0.9％氯％氯化钠溶化钠溶0.5ml作空白对照。

将作空白对照将3管同时放管同时放37℃℃温箱温箱或水浴中培育，每或水浴中培育，每0.5 h察看一次，察看一次， 4 h 内无凝固内无凝固景象者，察看直至景象者，察看直至24小时阳性反响阴性反响不凝固少量、零散凝固明显的块状凝固宏大块凝固完全凝固，倒置不流动金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验 3、试管法的结果察看与记录、试管法的结果察看与记录•空白对看管的血浆流动自若，阳性对看管空白对看管的血浆流动自若，阳性对看管血浆凝固，实验管血浆凝固者为阳性；血浆凝固，实验管血浆凝固者为阳性；•均无凝固那么为阴性均无凝固那么为阴性七、七、 三糖铁〔三糖铁〔TSI〕实验〕实验1、三糖铁实验的原理、三糖铁实验的原理 假设细菌可利用乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产假设细菌可利用乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气，培育基全部变黄；假设只可以利用葡萄糖，葡气，培育基全部变黄；假设只可以利用葡萄糖，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培育的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培育基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面最后为红基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面最后为红色，底部由于是在厌氧形状下，酸类不被氧化，仍色，底部由于是在厌氧形状下，酸类不被氧化，仍坚持黄色。

坚持黄色 假设细菌又能分解含硫化合物，产生硫化氢，假设细菌又能分解含硫化合物，产生硫化氢，培育基底部变黑培育基底部变黑 制好的培育基对看管斜面红色，底面黄色培育基全黄色斜面、底部黄色，并产生H2S斜面红色，底部黄色，产生H2S底面黄色，并产生CO22、实验方法、实验方法 以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培育物，穿刺接种并涂布于斜面，置育物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃℃培育培育18~24h，察看结果察看结果思索题•提问：提问：•志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发志贺氏菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生酵乳糖，不产生H2S在培育基上应该产生什么景在培育基上应该产生什么景象？象？•大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解大肠杆菌，能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生乳糖，不产生H2S在培育基上应该是什么景象？在培育基上应该是什么景象？•沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产沙门氏菌，能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生生H2S，多数产气，在培育基上应该是什么景象？，多数产气，在培育基上应该是什么景象？下面照片所示2-3-4，能够是大肠杆菌、沙门氏菌还是志贺氏菌？ •答案：答案：•2－志贺氏菌　－志贺氏菌　3－沙门氏菌　　－沙门氏菌　　4－大肠杆菌－大肠杆菌复习题1、什么是生化实验、什么是生化实验?2、做生化实验要留意哪些事项？、做生化实验要留意哪些事项？3、简述糖酵解实验的原理，写出其实验方法和结果的、简述糖酵解实验的原理，写出其实验方法和结果的记录记录4、简述甲基红实验〔、简述甲基红实验〔MR〕的原理，写出其实验方法〕的原理，写出其实验方法和结果的记录和结果的记录5、简述靛基质〔、简述靛基质〔Imdole〕〕 (吲哚吲哚)实验的原理，写出其实验的原理，写出其实验方法、结果的记录和本卷须知实验方法、结果的记录和本卷须知6、简述硫化氢〔、简述硫化氢〔H2S〕实验的原理，写出其实验结果〕实验的原理，写出其实验结果的记录和本卷须知的记录和本卷须知7、简述尿素酶〔、简述尿素酶〔Urease〕实验的原理，写出其实〕实验的原理，写出其实验方法、结果的记录验方法、结果的记录8、简述氨基酸脱羧酶实验的原理，写出结果的记录、、简述氨基酸脱羧酶实验的原理，写出结果的记录、阳性反响实验管颜色变化过程和原理阳性反响实验管颜色变化过程和原理9、简述氰化钾实验的原理，写出其实验方法、结果、简述氰化钾实验的原理，写出其实验方法、结果的记录和本卷须知的记录和本卷须知10、写出溶血实验的溶血类型及景象11、简述链激酶实验的原理，12、简述血浆凝固酶实验的原理，并写出玻片法的实验方法13、简述三糖铁〔TSI〕实验的实验的原理第二节  血清学实验血清学反响：血清学反响： 指相应的抗原与抗体在体外一定条指相应的抗原与抗体在体外一定条件下作用，所出现肉眼可见的沉淀、凝件下作用，所出现肉眼可见的沉淀、凝集景象。

集景象一、抗原与抗体一、抗原与抗体〔一〕抗原〔一〕抗原1、抗原的概念、抗原的概念　　　　 抗原抗原(Ag)：是指凡能刺激机体免疫系：是指凡能刺激机体免疫系统诱导免疫应对，并能与应对产生的抗体统诱导免疫应对，并能与应对产生的抗体或致敏淋巴细胞发生特异反响的物质或致敏淋巴细胞发生特异反响的物质 2、抗原的特性、抗原的特性免疫原性免疫原性免疫反响性免疫反响性〔二〕抗体〔二〕抗体1、抗体、抗体是指机体内的淋巴系统细胞在抗原物质是指机体内的淋巴系统细胞在抗原物质的激发下，所合成的一种具有特异性的激发下，所合成的一种具有特异性免疫功能的球蛋白免疫功能的球蛋白(免疫球蛋白免疫球蛋白)　　　　2、抗体的理化性质、抗体的理化性质〔〔1〕抗体是球蛋白〕抗体是球蛋白 〔〔2〕免疫球蛋白〕免疫球蛋白                                                                                                      图2-1 兔血清电泳分别图其后，经对不同免疫血清的电泳分析，超速离心分析和分子量测定等方法，发现大部分抗体活性存在于γ球蛋白内，但有小部分抗体活性可存在于β球蛋白内。

它们的离心常数分别为7S和平共处9S，分子量分别为16万和万因此它们分别被命名为7Sγ球蛋白分子〔16万〕19S,β2巨球蛋白分子(β2M,90万)和β2A球蛋白分子，所以从早期对抗体性质的研讨证明抗体不是由均质性球蛋白组成，而是由异性球蛋白组成  图2-2 不同类免疫球收白的电泳分别图〔三〕抗原抗体反响〔三〕抗原抗体反响   抗原抗体反响：          是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反响      1、抗原抗体反响的化学本质、抗原抗体反响的化学本质〔〔1〕构造根底〕构造根底〔〔2〕、化学变化：〕、化学变化：①① 四四种种分分子子间间作作用用力力参参与与并并促促进进Ag-Ab的反响的反响电荷引力电荷引力范登华引力范登华引力氢键结合力氢键结合力疏水作用疏水作用抗原抗体反响的胶体形状的变化过程总结如下 Ag+Ab                                                                   (AgAb) n               特异性结合       AgAb          电解质亲水胶体 带电荷的疏水胶体 疏水胶体凝集 ②②理化性质改动：亲水胶体转化理化性质改动：亲水胶体转化为疏水胶体为疏水胶体　　　　2. 反响过程：反响过程：①①不可见阶段不可见阶段②②可见阶段可见阶段二、血清学反响的特点：二、血清学反响的特点：1、具有特异性与交叉性、具有特异性与交叉性2、具有敏感性、具有敏感性3、具有定理特性。

具有定理特性4、反响的两个阶段性、反响的两个阶段性5、反响的稳定性与可逆性的反响的稳定性与可逆性的                         图9-1沉淀反响中没淀量与抗原抗体的比例关系Ag：抗原；Ab：抗体三、影响血清学实验的的要素三、影响血清学实验的的要素1.抗体抗体2.抗原抗原3. 电解质电解质:常用常用:0.85％氯化钠或各种缓冲液％氯化钠或各种缓冲液作作用用:中中和和胶胶体体粒粒子子上上的的电电荷荷，，使使胶胶体体粒粒子子的的电电势势下下降降，，促促使使抗抗原原抗抗体体复复合合物物从从溶溶液液中中析出，构成可见的沉淀物或凝集物析出，构成可见的沉淀物或凝集物4. 酸碱度酸碱度: pH为为6～～8进展进展5. 温度温度:普通以普通以15~40℃℃为宜，最适为为宜，最适为37℃℃，，四、四、 血清学反响的种类血清学反响的种类1 1、凝集反响、凝集反响2 2、沉淀反响、沉淀反响 3 3、中和反响、中和反响4 4、标志抗体技术、标志抗体技术〔一〕凝集实验〔一〕凝集实验           颗粒性抗原〔细菌、红细胞等〕与相应抗体结合，在电解质参与下所构成的肉眼可见的凝集景象，称为凝集反响鲜血者红细胞鲜血者红细胞受血者血清受血者血清O型型(抗抗A、抗、抗B)A型型(抗抗B)B型型(抗抗A)AB型型(无无)O型型----A型型+-+-B型型++--AB型型+++- 注注:“+〞表示有凝集反响〞表示有凝集反响,“-〞表示无凝集反响〞表示无凝集反响〔二〕、〔二〕、 凝集实验的方法凝集实验的方法1．直接凝集法．直接凝集法 　　2．间接凝集法．间接凝集法 　　3．抗球蛋白实验．抗球蛋白实验〔三〕、直接凝集实验〔三〕、直接凝集实验1、玻片凝集法〔1〕原理:用知抗体作为诊断血清，来检测未知抗原,以鉴定相应的抗原。

〔〔2〕方法步骤〕方法步骤:①①、于干净玻片的一端加诊断血清、于干净玻片的一端加诊断血清1滴，另一滴，另一端加生理盐水端加生理盐水1滴作为阴性对照滴作为阴性对照②②、用接种环取待检菌或血细胞的悬液分别涂、用接种环取待检菌或血细胞的悬液分别涂于诊断血清和生理盐水中于诊断血清和生理盐水中③③、悄然转动玻片，使其充分混匀，静置数分、悄然转动玻片，使其充分混匀，静置数分钟，察看结果钟，察看结果抗血清生理盐水待检菌凝集者为+未凝集〔〔4〕诊断血清及类型〕诊断血清及类型•诊断血清：将知的抗原注射于动物体，使其产生相应诊断血清：将知的抗原注射于动物体，使其产生相应的抗体，采出动物的血液，分别出含有大量抗体的血的抗体，采出动物的血液，分别出含有大量抗体的血清，称为诊断血清〔或抗血清、免疫血清〕清，称为诊断血清〔或抗血清、免疫血清〕•抗抗O O血清：用菌体抗原〔血清：用菌体抗原〔O O抗原〕免疫动物后所获得的抗原〕免疫动物后所获得的血清•抗抗H H血清：用鞭毛抗原〔血清：用鞭毛抗原〔H H抗原〕免疫动物后所获得的抗原〕免疫动物后所获得的血清•外表抗原血清：用含有外表抗原的菌体免疫动物后所外表抗原血清：用含有外表抗原的菌体免疫动物后所获得的血清。

获得的血清•多价诊断血清：用含有两种〔型〕的菌体免疫动多价诊断血清：用含有两种〔型〕的菌体免疫动物后所获得的血清物后所获得的血清•单价诊断血清：只含有一种〔型〕特异性抗体的单价诊断血清：只含有一种〔型〕特异性抗体的血清•因子诊断血清：因子诊断血清：• 把含有多种抗体的混合免疫血清，器具有共把含有多种抗体的混合免疫血清，器具有共同抗原成分的有关细菌将其共同抗体吸收，只留同抗原成分的有关细菌将其共同抗体吸收，只留下一种或几种所需的特异性抗体的血清下一种或几种所需的特异性抗体的血清诊断血清的运用与保管诊断血清的运用与保管•保管：保管：2~10 ℃℃冰箱；冰箱；•无菌取用，有效期无菌取用，有效期2年年操作方法操作方法1、制备待检菌悬浮液：、制备待检菌悬浮液： 1~2×108个个/ml，， 〔四〕试管凝集法〔四〕试管凝集法2、稀释待检血清：、稀释待检血清：取取10支试管，依次编号，用吸管参与生理盐水，第支试管，依次编号，用吸管参与生理盐水，第1管管0.9ml，其他各管均为，其他各管均为0.5ml然后汲取然后汲取0.1ml待检血清参与第待检血清参与第1管内，吹打管内，吹打3次，使混匀，该管次，使混匀，该管含含1:10稀释血清。

接着用同一吸管从第稀释血清接着用同一吸管从第1管吸出管吸出0.5ml参与第参与第2管内，按上法混合，以同法延续稀管内，按上法混合，以同法延续稀释至第释至第9管，从该管内汲取管，从该管内汲取0.5ml弃去如此每管弃去如此每管内所含受检血清浓度为前一管的一半，即内所含受检血清浓度为前一管的一半，即1:10、、1:20、、1:40…1:2560，最后一管留作对照最后一管留作对照3 3、参与抗原：各管参与诊断菌液、参与抗原：各管参与诊断菌液0.5ml0.5ml，振摇试，振摇试管架，充分混匀管架，充分混匀4 4、保温静置：鞭毛凝集反响最好先、保温静置：鞭毛凝集反响最好先37℃37℃静置静置2h2h，初步判读结果，然后移放冰箱过夜，再次判，初步判读结果，然后移放冰箱过夜，再次判读菌体凝集实验需较高的温度和较长的时间，读菌体凝集实验需较高的温度和较长的时间，最好是放最好是放37℃37℃后，移置后，移置55℃ 24h55℃ 24h而布鲁菌凝而布鲁菌凝集反响以放置集反响以放置55℃255℃2天最正确天最正确试管号试管号123456789对对照照生理盐水生理盐水（（ml)0.90.50.5 0.5 0.5 0.50.50.50.50.5稀释血清稀释血清（（ml)0.10.50.5 0.5 0.5 0.50.50.50.50.5血清稀释血清稀释度度1:101:201:401:801:1601:3201:6401:12801:2560菌悬浮液菌悬浮液（（ml)0.50.50.5 0.5 0.5 0.50.50.50.50.5血清最后血清最后稀释度稀释度1:201:401:801:1601:3201:6401:12801:25601:5120试管凝集实验稀释步骤试管凝集实验稀释步骤结果记录结果记录〔〔1〕完全凝集：凝集块完全沉于管底。

上层液〕完全凝集：凝集块完全沉于管底上层液体廓清，以体廓清，以++++记录记录〔〔2〕凝集块沉于管底上层液体稍混浊，以〕凝集块沉于管底上层液体稍混浊，以+++记录记录〔〔3〕部分凝集，上层液体混浊以〕部分凝集，上层液体混浊以++记录记录〔〔4〕很少凝集，液体较混浊以〕很少凝集，液体较混浊以+记录记录〔〔5〕与对看管一样，无变化，以〕与对看管一样，无变化，以-记录记录复习题1、血清学反响、抗原、抗体、抗原抗体反、血清学反响、抗原、抗体、抗原抗体反响的概念响的概念2、影响血清学实验的要素有哪些？、影响血清学实验的要素有哪些？3、血清学实验常用的电解质有哪些，有什、血清学实验常用的电解质有哪些，有什么作用？么作用？4、写出血清学实验中玻片凝集法的原理和、写出血清学实验中玻片凝集法的原理和实验的方法步骤实验的方法步骤5、诊断血清、抗、诊断血清、抗O血清、抗血清、抗H血清、多价诊血清、多价诊断血清、单价诊断血清、因子诊断血清的断血清、单价诊断血清、因子诊断血清的概念概念。