血细胞化学染色.ppt

第三章 血细胞化学染色 一、概述（一）研究对象 外周血和骨髓新鲜涂片单个细胞中的化学物质：酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等（二）临床应用 1.鉴别各类血细胞2.辅助血液系统等疾病诊断和鉴别诊断3.观察疾病疗效和判断预后二、常用细胞化学染色方法Ø 过氧化物酶染色Ø 中性粒细胞碱性磷酸酶染色Ø 过碘酸-雪夫反应Ø α-醋酸萘酚酯酶染色Ø 铁染色过氧化物酶染色（peroxidase,POX）POX 新生态氧[O]↑过氧化氢 （基质中）四甲基联苯胺（无色）联苯胺蓝（蓝色）亚硝基铁氰化钠蓝色颗粒 （浆内酶部位）粒、单核 细胞胞浆【原理】【结果判断】-、+、++、+++、++++Ø弱阳性 颗粒小，分布稀疏Ø阳性 颗粒稍粗，分布较密集Ø强阳性 颗粒粗大，密布于整个胞浆【正常血细胞染色反应】1.粒细胞系统 POX主要存在于粒系细胞中分化差的原粒细胞阴性; 分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞各阶段均呈阳性，阳性反应程度随细胞的成熟逐渐增强 2.单核细胞系统 阴性或弱阳性3.淋巴细胞系统红细胞系统巨核细胞系统 阴性浆细胞组织细胞【临床评价】 急性髓细胞白血病急性淋巴细胞白血病鉴别1. 急性髓细胞白血病（1）急性粒细胞白血病 阳性反应（2）急性单核细胞白血病弱阳性反应2. 急性淋巴细胞白血病阴性反应或阳性率 3%(残留原粒细胞)中性粒细胞碱性磷酸酶染色（neutrophilic alkalinephosphatase，NAP）磷酸萘酚钠（基质中）中性粒细胞 胞浆中NAP磷酸钠α-萘酚重氮盐 （坚牢蓝盐RR ）＋紫黑色偶氮染料（胞浆中）水解【原理】Kaplow偶氮偶联法【结果判断】胞浆中有紫黑色颗粒为阳性(+~++++）【正常血细胞染色反应】 1. 中性成熟粒细胞阳性反应其他细胞呈阴性反应2.NAP积分值计数100个成熟中性粒细胞（杆状和分叶）,分别记录其分级情况：(-) 0分(+) 1分(++) 2分(+++) 3分(++++) 4分阳性率 全部阳性反应细胞之和积分值 各种阳性程度细胞的分值之和3.参考值积分值 35-70分( 各实验室参考值不同)【临床评价】 （1）细菌性感染与病毒性感染（尤其是化脓性感染）明显增加 无明显变化(2）类白血病反应与慢性粒细胞白血病明显增加 明显下降且常为零分，缓解时又上升到正常过碘酸-雪夫反应( 糖原染色 )（periodic acid-Schiff reaction，PAS）双醛基过碘酸雪夫试剂中 的无色品红紫红色化合物(附于含多糖类的胞浆内)乙二醇基(多糖类物质含有)氧化【原理】【结果判断】阳性 胞浆内红色阳性物呈弥散状、颗粒状或块状。

阴性 胞浆内无色或无颗粒,核淡绿正常血细胞染色反应】1.粒细胞系统 分化差的原粒细胞为阴性；分化好的原粒细胞至中性分叶核粒细胞各阶段均呈阳性反应，阳性程度随细 胞的成熟逐渐增强 阳性物呈细颗粒、均匀红色2.红细胞系统 阴性3.单核细胞系统 绝大多数阳性呈细颗粒，有时分布于 细胞边缘的阳性颗粒较粗大4.淋巴细胞系统 大多数淋巴细胞呈阴性；少于20%淋巴细胞呈粗颗粒状或块状阳性5.巨核细胞系统 呈颗粒状或块状阳性（含血小板）临床评价】1.红血病或红白血病 幼红细胞阳性巨幼细胞性贫血 幼红细胞阴性3.鉴别急性白血病类型（1）急性淋巴细胞白血病阳性率20%-80%，呈红色粗颗粒状或块状2）急性粒细胞白血病少数阳性，呈细颗粒状或均匀红色3）急性单核细胞白血病可阳性，呈细颗粒状、弥散分布，有时胞质边缘处颗粒较粗大α-醋酸萘酚酯酶染色（α-naphthol acetate esterase，α-NAE）α-醋酸萘酚酯酶（细胞内）α-醋酸萘酚（基质液中）α-萘酚重氮盐 （坚牢蓝B）胞浆不溶性灰黑色或棕黑色沉淀水解【原理】【结果判断】胞浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒状沉淀为阳性。

氟化钠抑制试验在基质液中加入适量NaF,其余染色方 法同上两种方法染色后用油镜计数100或200个 被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后 的阳性率或阳性积分氟化钠抑制率=抑制前阳性率或阳性积分 - 抑制后阳性率或阳性积分抑制前阳性率或阳性积分×100%【正常血细胞染色反应】1.单核细胞系统 Ø 原始单核细胞分化差 阴性分化好 阳性Ø 幼稚及成熟单核细胞阳性被氟化钠抑制2.粒细胞系统 原粒细胞阴性或弱阳性以下阶段为弱阳性3.淋巴细胞系统 多数阴性，少数弱阳性不被氟化钠抑制【临床评价】急单 急粒 急性早幼粒 急粒单 急淋α-NAE +++或 -或 ++ 阳性 -++++ 弱+ NaF 被抑制 不被 不被抑制 部分被抑制抑制 部分未被抑制主要用于鉴别急性白血病类型铁 染 色（ferric stain）亚铁氰化钾亚铁氰化铁 (蓝色沉淀在含Fe部位)铁＋酸性环境普鲁士蓝反应骨髓小粒中的含Fe血黄素（细胞外铁） 骨髓中贮存铁幼红细胞内的Fe（细胞内铁）原理【结果判断】幼红细胞核染色为鲜红色,铁粒呈蓝绿色Ø 细胞外铁低倍镜观察涂片尾部和骨髓小粒,细胞外铁位于幼红细胞外或骨髓小粒巨噬 细胞浆内，呈蓝色颗粒状、小珠状或团 块状。

再用油镜判断阳性程度，根据铁量多少分五级:（-）（+）（++）（+++）（++++）Ø 细胞内铁存在于中幼红细胞、晚幼红细胞及成熟红细胞中的铁油镜下计数100个中幼红细胞和晚幼红细胞，记录胞浆中含有蓝色颗粒细胞的百分率根据细胞内铁颗粒的数目、大小、染色深浅和颗粒分布情况,将铁粒 幼红细胞分为四型:Ⅰ型Ⅱ型Ⅲ型Ⅳ型细胞内铁1.细胞外铁 +～++，约2/3人为++，约1/3人为+2.细胞内铁 阳性率19%～44%Ⅰ型为主，少数为Ⅱ型（无环形铁粒幼红细胞 和铁粒红细胞）【参考值】【临床评价】1.诊断缺铁性贫血、指导铁剂治疗细胞内、外铁明显减低甚至消失，经铁剂治疗有效后，其细胞外铁、内铁先后增多2.诊断铁粒幼细胞性贫血 铁粒幼红细胞、环形铁粒幼红细胞均增 多，细胞外铁也常明显增多1．掌握常用细胞化学染色方法的结果判断和临床意义2．熟悉常用细胞化学染色方法的原理本章目的要求完。