临床化学的干扰试验(EP7)修改版.doc

. 临床化学的干扰试验（EP7-A）NCCLS文件（2002年7月翻译）摘要NCCLS EP7-A文件使临床实验室方法的干扰特性评估方式的一直EP7-A表达了厂商过筛可能的干扰物、确认干扰作用、和肯定病人样品中的干扰等的方法这个文件也表达了临床实验室为了确认干扰结果、和研究因为未预期干扰物使结果离散的方法提供了详细的例子EP7-A也含有干扰实验概念的背景信息，分析物和预期干扰物实验推荐浓度表，以与数据收集和分析工作表前言干扰物可以是临床检验的显著误差[1，2，3]常规使用部质量控制监测精密度，和参考材料的比较确认准确度，但是实验室不能方便地检测干扰物引起的误差虽然不断改进方法的特异性是一个目标本文件让实验室和以医学需要来评估干扰物注意到严密评估方案和配合评价技术的灵活性间的平衡实验室和厂商需要理解一些概念，进行必要的选择，并且一起实现改善病人结果的共同目标很清楚，证实某干扰的作用、确定它的原因、设计改进方法等都需要实验室和厂商的合作资料包括解释化学和统计的概念注意：本文件注重分析过程的干扰不是因药物和它的代物引起的生理作用1 引言1.1 目的本文件用于以下2个目的：1) 支持厂商和方法的开发人员确定方法对干扰物敏感的做法通过科学的证实的实验设计、规定实验的相应物质和浓度、明确数据分析和解释的方法，这样得到有意义的结果给用户。

2) 使实验室在研究因干扰造成结果离散时，进行系统的研究，明确数据收集和分析要求，鼓励实验室用户和厂商间的紧密合作，才能证实、揭示、最终消除新的干扰物1.2 采用的用户2 围2.1 分析方法任何分析方法，定量或定性的，都会受干扰本文件适用各种方法和分析仪2.1.2 干扰物干扰物来自源性和外源性：● 在病理条件下产生的代物，如：糖尿病，多发性骨髓瘤，胆汁阻塞性肝炎，等● 在病人治疗中引入的化合物，如：药物，非肠道（注射）引入的营养物，血浆扩充剂，抗凝剂，等● 病人摄入的物质，如：酒精，毒品，营养补充物，各种食物和饮料，等● 在标本准备时外加的物质，如：抗凝剂，防腐剂，稳定剂，等● 标本本身的基体效应，如：其化学和物理性质和理想的新鲜标本的差异2.2 概念和科学原理2.2.1 干扰对不准确度的影响不准确度（总分析误差）主要有3个因素：不精密度、方法特定的偏倚、和样品特定的偏倚方法评价一般仅估计了前2个样品特定的偏倚（即干扰）常对个别特殊样品的问题处理，而不是作为方法的确认特性从方法评价的做法上，干扰引起的系统偏倚，具有系统和随即误差二者，这2种误差统计上都是不准确度（总分析误差）的组分● 对某指定的病人群体，在标本中的干扰物平均浓度引起系统偏倚，包括在方法偏倚的估计中。

对于这个平均偏倚的各个离散，在和较好的方法作比较时，表现为总的随机误差对某些方法，随机干扰作用超出了作为随机误差主要来源的不精密度● 对某个别病人，干扰物造成的偏倚，依赖于病人标本中干扰物的浓度偏倚岁干扰物浓度而异，如：因清除或代当病人状况变化时，造成偏倚的改变也许会对病人有错误的解释2.2.2 临床的关系检验医学必须把干扰和临床观点相结合临床表现确定，分析结果的影响是否应看作干扰检测的分析物形式和它的浓度必须明确地确定一些分析方法的似是而非结果也许反映了真实的分析物浓度，但是没有临床意义例如，火焰光度法和间接离子选择性电极法能准确检测血浆中的钠，和脂肪浓度无关但是，如果脂肪浓度很高，这些方法将出现假性的低钠直接离子法在这种情况下能正确地报告正常钠，因为此时结果是血浆中水组分的钠活度所以，对样品中总钠的过分估计是临床的要求很重要的是在解释干扰实验结果前，首先确定临床关心的浓度2.2.3 分析前的影响在分析前，分析物或它的浓度出现了变化，称为“分析前影响”这些不是分析干扰分析方法在分析时检测样品中所有的分析物，不论它原先有多少常见的分析前影响有：● 体药物的（生理）作用，如：药物作用使循环激素浓度的变化；● 分析物因水解、氧化的化学变化；● 分析物的物理变化，如酶的失活；● 标本的蒸发或稀释；● 被外加分析物的污染（如静脉注射的盐，血液标本长期不分离造成葡萄糖的损失，溶血使红细胞减少）。

2.2.4 相对干扰对控制品或基础混合血清检测的分析物具有的干扰，经计算是相对的有时候，控制品或混合血清中含有在的干扰物，如：在获得混合血清的病人群体某物质的平均浓度常见的是胆红素、蛋白、和脂肪有些方法校正或纠正了干扰物的平均浓度，所以对病人群体的干扰作用已经降至很小典型的方法包括标本的预处理、空白纠正、以血清为基础的校准品、和计算纠正但是当干扰物浓度大于或小于病人标本的平均浓度时，会出现误差例如，某药物检测受蛋白影响，约每10.0g/L蛋白的偏倚为0.05mmol/L由于血清中的平均蛋白浓度为70.0g/L，相对于无蛋白液的偏倚为0.35mmol/L如果某方法已经对平均偏倚纠正了，当各个标本的蛋白浓度和平均浓度70.0g/L有偏离，每相差10.0g/L使药物结果±0.05mmol/L蛋白浓度为75.0g/L的标本具有的偏倚为0.025mmol/L，不是0.40mmol/L除非标本蛋白浓度正好为70.0g/L，每个病人的药物结果都有小量的正或负偏倚，和实际蛋白浓度有关以下表归纳以上的例子假定药物浓度为25.0 mmol/L，检测受蛋白的影响如上述注意：作空白测定后引入的偏倚仅±0.20 mmol/L，而不作空白测定的偏倚为＋0.15 mmol/L到＋0.55 mmol/L。

在蛋白浓度（g/L）不作血清空白的测定作血清空白的测定结果（mmol/L）偏倚（mmol/L）结果（mmol/L）偏倚（mmol/L） 30.0 25.15 0.15 24.80 -0.20 50.0 25.25 0.25 24.90 -0.10 70.0 25.35 0.35 25.00 0.00 90.0 25.45 0.45 25.10 0.10 110.0 25.55 0.55 25.20 0.202.2.5 干扰的机制干扰物对分析过程影响的方式有：·化学作用 干扰物和试剂竞争或抑制指示反应，干扰了结果也可以因为络合或沉淀改变了分析物形式，产生干扰·物理作用 可能干扰物具有和分析物相似的性质，如能产生荧光、颜色、光散射、洗脱的位置、或电的相应等被检测和测量的信号·基体效应 干扰物可能改变标本基体的物理性质，如粘度、表面力、浊度或离子强度等，是检测的分析物浓度发生明显的变化·酶的抑制 干扰物能通过抑制金属激活剂、和催化点的结合、或氧化必须的巯氢基等改变酶（分析物或试剂）活力干扰物也能竞争酶反应中底物，形成干扰。

例如，腺苷激酶会竞争和肌酸激酶（CK）反应的腺二磷（ADP），因此在某些CK测定方法中产生假阳性·非特异性 干扰物会和分析物以同样方式参与反应虽然不同干扰物的非特异性有差异，但是它们在检验中的实际作用是一样的如：在碱性苦味酸的肌酐方法中酮酸的干扰；在一些重氮胆红素方法中受吲哚硫酸盐的干扰等·交叉反应 在免疫化学方法中，干扰物的结构相似于抗原，也能和抗体“交叉反应”这是一种非特异性例如：在茶碱测定时咖啡因的干扰交叉反应的程度是免疫化学方法特异性的度量，但它不是对干扰敏感的估计·水取代作用非水物质（蛋白、脂肪）占据了血浆中水的体积，影响了活度的检测在报告血浆水中分析物浓度时，这些作用就不认为是干扰3．定义（略）4．干扰试验的判断限（Decision Criteria）在进行评估实验前，为了确保实现目标，应该事先决定可承受限值评估者必须确定检验结果用于临床时，干扰对分析影响的大小，因为在设计干扰实验时取决于离散多大时被认为在临床上有意义在确定可承受规格时，要区分临床意义和统计意义二者均重要4.1 临床可承受的限值由干扰引起的允许误差的大小取决于检验结果的临床应用一些项目的准确度要求（总允许误差）已经有了建议；可参见文献。

有些项目的准确度限值用以下的方法确定可以将准确度（允许误差）分解为偏倚、不精密度、和干扰因素，从中建立允许的干扰限值在总允许误差中，除了方法偏倚和不精密度，以与分析物的生物变异外，余下的为干扰部分视作各个变量）4.1.1 从生理变异考虑的限值依据分析物的生理变异建立准确度要求的一种方法原则上，认为相对于分析物在个体或群体中固有的变异（取决于检验项目的临床应用）可以消除的分析变异量为误差限值这个方法对生理控制的分析物（项目）是适宜的4.1.2 从临床经验考虑的限值常以临床专家的协调来建立准确度的要求依据他们的经验，参与者同意误差的限值，超过限值的误差将影响他们做出诊断或治疗的决定可以由相关学科的临床专家共同确定准确度和干扰限值4.1.3 从分析变异考虑的限值从检测方法的总长期不精密度也可以得到干扰的限值如果干扰作用相对于分析变异很小，如小于一个标准差；则由可能的干扰引起的误差增量不会影响临床的决定，该物质也不认为是一个干扰物这个方法的缺点是许多现代系统具有很好的精密度，则干扰的限值比医学的必要性更重要4.2 统计意义（显著性）和作用在确定某物质是否为干扰物前，评估者必须确认结果在统计上是有意义的。

要求作适当的重复，这样可以有充分的把握来检出临床上有意义的干扰，也可以有足够的可信水平肯定不存在临床上重要的偏倚见第6.1节依据检出可能性和可信限确定样品的大小本导则适用的统计方法称为“假设检验”评估者事先决定病人结果中多大的偏倚在临床是显著的这个允许偏倚量被认为是干扰限值检验的无效假设认为没有干扰（即：偏倚不超过这个限值），另一种假设认为有干扰（即：偏倚超过了限值）4.3 实验的分析物浓度应该在分析物的两个医学决定水平处进行初步的干扰评估如果费用或其他问题限制初步实验只能作一个浓度，要知道；有可能遗漏了其他浓度处临床上有意义的干扰附录A列出了许多常见项目推荐的实验浓度已经出版的临界或决定值被选用在缺少医学协调下的有些项目实验浓度是认为设定的绝大多数项目是按照临床应用选择参考围的上下限和病理浓度4.4 可能的干扰物依据方法的特性，编辑了可能是干扰物的单子列出的物质存在于病人标本中，也考虑了方法的化学反应和它的应用以以下各点为导则l 常见的标本不正常表现，如溶血、黄疸、和脂血l 常用药物和非处方药l 在病人群体中预期的不正常代物l 检验项目涉与的病人群体常见处方药l 药物包括其代物，因为它们的化学和物理性质可能会干扰检测方法。

l 在相似方法报告有干扰的物质见Young等、Tryding和Roos等的文献l 标本添加剂，如抗凝剂（肝素、EDTA、柠檬酸盐、草酸盐等），和防腐剂（NaF、碘乙酸、HCl等）l 在收集和处理标本时接触的物质，如血清分离器用品、标本收集管和它的管塞，导管、导管的冲洗液、皮肤清洁剂、手洁净剂和洗液、玻璃清洗表面活性剂、涂粉的手套等l 抑制影响某些检验的饮食（咖啡、b萝卜素、罂粟花籽等）涉与的物质很多属于以下的因为不是重要的干扰物，没有什么问题的可以不考虑：· 基本上和清单上列出的某物质具有相同的组成和结构·依据相同的科学原理，说明对方。