加压毛细管电色谱仪的ppt课件.ppt
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加压毛细管电色谱仪的原理及运用 Capillary ElectrochromatographyAdvances and Applications分子生物研讨中心主讲人:李少伟 CEC根本原理1微型分别技术2micro-HPLC 和 CE的结合3电渗流 (EOF) 为流动向的推进力4二维分别机理：液相色谱和电泳之和〔分配和电泳淌度〕 用途:分析生物活性肽中草药多糖等的成分分析.建立中草药的指纹图谱.药品的质量监控.结合高电压系统可提高分析效率.并使图谱更明晰明了. 图形分析:黑色代表普通HPLC的血清肽图谱.粉色代表加-10KV电压后血清肽图谱.黄色代表加+20KV电压后血清肽图谱.阐明分析: 加负电压后血清肽的出峰时间向后延迟,加正电压后出峰时间向前平移.阐明血清肽合流动相后显负电性.样本在淌度和电压共同作用下谱图有变化.可以发现更多成分.同时提高分别效率.由于同一成分在流动相一样的情况下只是淌度不同.如今加了高电压.使以前需很长时间才干出现的峰如今只需很短时间就可出现. 黑色代表普通HPLC的脾肽图谱.蓝色代表加-5KV电压后脾肽图谱.粉色代表加-10KV电压后脾肽图谱.黄色代表加-15KV电压后脾肽图谱. 出峰时间从5.6分提早到了3.4分.效率几乎底稿50%.而且各主要成分均完美再现.没有漏掉主要的峰. TriSepTM-2100加压毛细管电色谱仪操作流程 预备任务：样品：过滤〔0.45或0.22μm滤膜〕流动相：过滤〔0.45或0.22μm滤膜〕，脱气, (留意：超声脱气时，水太热了要换) 仪器 主要包括四个模块：流体保送单元〔Solvent Delivery Module〕；微流控制单元〔Micro Flow Control Module〕；高压电源〔High Voltage Module〕；检测器〔Detection Module〕和数据采集软件。
各部分分别开关、设置任务参数和程序 运用温度10-35℃，相对湿度不大于75%可以进展毛细管微柱色谱、毛细管电色谱、加压毛细管电色谱、毛细管电泳分析 各单元参数设置及操作 1．溶剂保送单元1．1 参数设置：反复按 FUNC/BACK 键至显示所要设置的参数，按数字键输入后，ENTER 确认；设置下一参数，主要参数设置完成，按CE 回到初始画面常用参数包括流速FLOW〔正常流速为0.02-0.05mL/min, 假设在这个流速范围内进样量太大，就添加流速；反之就减小流速〕、最高、最低限压P.MAX/P.MIN 等〔最低限压建议设置大于0的数值，否那么漏夜、进气维护功能不能发扬作用〕 1．2 输液方式 1．2．1 单泵恒比例送液：运用两个溶剂保送单元中的一个，按比例配好流动相并超声脱气，设置流速，按PUMP开场输液1．2．2 双泵恒比例送液：一种方式是分别在两个溶剂保送单元上分别设置流速，保送需求混合的A、B两种溶剂；另一种方法是设置主泵和从泵：FUNC/BACK 滚动至SYS 项，将主泵设为2，〔从泵此项为1〕，此时主泵面板上的G.E.灯亮，在主泵面板上设置两种溶剂的比例CONC和总流速FLOW后，按主泵PUMP开场送液〔留意，辅泵的流速是总流速乘梯度的比例后的值，此值最好不要小于0.005mL/min, 否那么辅泵流速不稳，影响梯度基线〕 1 1．．2 2．．3 3 编辑编辑梯度送液程序：在主梯度送液程序：在主泵泵上上设设置流速置流速FLOWFLOW、、根本根本输输液比例液比例CONCCONC，，编辑时间编辑时间程序：程序： EDIT EDIT 进进入入编辑编辑形形状，状，输输入入时间时间数数值值，，滚动滚动FUNC/BACK FUNC/BACK 到到BCNCBCNC输输入入B B相相的梯度比例数的梯度比例数值值，按，按ENTERENTER确确认认。
常用的参数如常用的参数如BCNCBCNC〔〔A A、、B B液比例〕、液比例〕、FLOWFLOW〔流速〕、〔流速〕、STOPSTOP〔停〔停顿顿程序程序〕〕……等程序编编好后，反复按好后，反复按ENTERENTER查查看，按看，按DELDEL去除去除错误错误的程序步按主的程序步按主泵泵RUNRUN键键运运转时间转时间程序程序, , 关掉关掉RUNRUN键键，，泵泵按梯度初始化条件走按梯度初始化条件走确认各溶剂系统互溶、缓冲溶液中确认各溶剂系统互溶、缓冲溶液中溶质不会析出结晶！溶质不会析出结晶！ 1．3 系统排气或快速改换溶剂系统 把泵的吸滤头放进曾经过滤并除气后的流动相中，加电时出口缓冲瓶中也装满一样的缓冲溶液将Drain阀向OPEN方向〔逆时针〕旋转180度，按Purge键，约3分钟后自动停顿， 也可本人调整Purge 时间，直到管线内〔由溶剂瓶到泵入口〕无气泡为止Close Drain阀把流速调成1ml/min，把四通处衔接反压阀的peek螺丝松开，非常钟后再把流速调成0.05ml/min, 把反压阀的peek螺丝拧紧 2 2．紫外．紫外- -可见检测器可见检测器开启电源后，经过短暂的时间，氘灯点亮，波长显示为开启电源后，经过短暂的时间，氘灯点亮，波长显示为254 nm254 nm。
(不一定是不一定是254nm254nm，而是上次关机时运用的波长，而是上次关机时运用的波长) )，按，按FUNC/BACKFUNC/BACK键到改波优点，输入实验需求的波长键到改波优点，输入实验需求的波长值，值， ENTER ENTER确认，检测器普通确认，检测器普通30-60min30-60min的预热，然后按的预热，然后按ZEROZERO基线调零后，基线稳定后，可以进样基线调零后，基线稳定后，可以进样 留意：开色谱软件前要把微流控单元的开关翻开否那么软件打不开 3 3．高．高压电压电源源输输出出电压电压：：0-30kV0-30kV；；电电流：流：0-100μA0-100μA；最大功率：；最大功率：1W1W留意：当留意：当设设置置10kV10kV以上以上电压时电压时，，应设应设置置较长较长升升压时间压时间〔〔如如1010秒〕，忽然升秒〕，忽然升压压可可导导致破坏性后果；当致破坏性后果；当环环境潮湿境潮湿时时，，不要不要设设置超越置超越10kV10kV的的电压电压3 3．．1 1 开机后，按开机后，按MENU MENU ，以上下箭，以上下箭头选择头选择分析方式：分析方式：电电色色谱谱< CEC >< CEC >或或电电泳泳
确确认检测认检测器和器和微流控制微流控制单单元元仓门仓门封封锁锁、背板、背板电缆衔电缆衔接正确，按接正确，按RUN RUN 执执行行留意，改留意，改动电压输动电压输出极性出极性时时，，还还要改要改动动后面板高后面板高压线压线的的插孔位置，插孔位置，设设置置输输出出为为正正电压时电压时，后面板高，后面板高压线压线插在插在“HV+“HV+〞孔，〞孔，设设置置输输出出为负电压时为负电压时，后面板高，后面板高压线压线插在插在“HV-“HV-〞孔，地〞孔，地线线一直接在一直接在“HV0“HV0〞孔不〞孔不变变；；设设置好置好输输出出电电压压极性，按极性，按ENTERENTER键键 确定确定 3 3．．3 < CE >3 < CE >方式下，还需输入电动进样的电压和时间方式下，还需输入电动进样的电压和时间把进样条件和运转电泳的条件设好后，首先运转一下把进样条件和运转电泳的条件设好后，首先运转一下RUN RUN ，按，按RESETRESET键断电后按键断电后按INJECT INJECT ，系统执行进样设，系统执行进样设置，完成后电压降至置，完成后电压降至0 0〔每次改条件后都要先运转一下〔每次改条件后都要先运转一下RUNRUN后才干进样〕后才干进样〕3 3．．4 RESET4 RESET键：进样、升压时按下，电压降至键：进样、升压时按下，电压降至0 0；分析；分析完成，按此键退至上级菜单。
完成，按此键退至上级菜单 装柱： 1.装柱前首先把毛细管检测窗口和检测池装检测窗口的位置都用分析纯的乙醇擦干净，等乙醇挥发完后，可以装柱〔留意不要用口吹干〕2.把柱子的检测窗口对准检测池的小球，对着光看，是透光的阐明位置正好3．固定柱子的PEEK螺丝的PEEK管要插究竟部固定螺丝，否那么毛细管装好后还会挪动4．然后盖上盖子，按对角顺序上四个螺丝并固定住〔留意不要一次性拧紧一个螺丝〕5．螺丝固定后，把出口端的毛细管插到PEEK管里，把池子安装到检测器上，6．翻开检测器，自检终了后，按FUNC/BACK 滚动至看Sample和reference 值能否正常，假设sample值太小，阐明柱子没装好7．卸柱子时，一定要把柱子出口端的毛细管从PEEK管里拔出，是毛细管柱子处于自在形状后才卸四个螺丝否那么容易把柱子折断 分析样品1．确认各部分正确衔接，开启电源，启动数据采集软件UnimicroTriSep Workstation设置参数及程序，平衡色谱柱2．设置任务站信号采集时间等，任务站工具栏绿色表示灯形状，预备采集信号3．当进样控制面板的LOAD灯亮时，用微量进样器进样，此时，样品被注入到进样阀的定量环中，定量环的体积是固定的2 l〔本系统中见入毛细管柱内的样品量通常是10 L或20 L〕，与实践进样量无关，多余的样品会流到样品废液瓶中。
但应留意，由于在进样孔与进样阀之间存在一个衔接纳，其体积约10 L，因此，每当进一个新的样品时，第一次进样的进样量要大于40 L，以确保样品置换了进样管路里一切的溶液到达进样阀的定量环，以后每次进样，进样量只须5L即可要将样品注入色谱柱中时，按进样控制面板上的按键，经过约1 s后，INJECT灯亮，表示样品池已被连入流路系统，样品开场进入色谱柱当INJECT灯亮时系统自动开场采集数据同时需按下主泵RUN键开场梯度程序、高压电源RUN 启动高压电场 4．分析终了，存储色谱数据，RESET停顿高压5．清洗色谱柱、仪器管路、进样针，进样口；封锁各部分电源；填写运用记录。
