生物组织中还原性糖脂肪蛋白质的鉴定.ppt

生物组织中还原性糖、脂肪、蛋白质的鉴定生物组织中还原性糖、脂肪、蛋白质的鉴定1.1.1.1.实验原理实验原理实验原理实验原理 某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应颜色反应颜色反应颜色反应 （（（（1 1 1 1）还原糖）还原糖）还原糖）还原糖+ + + +斐林试剂斐林试剂斐林试剂斐林试剂 砖红色沉淀砖红色沉淀砖红色沉淀砖红色沉淀 （现用现配）（现用现配）（现用现配）（现用现配） 还原糖：葡萄糖、果糖、麦芽糖（蔗糖、淀粉等是非还原糖）还原糖：葡萄糖、果糖、麦芽糖（蔗糖、淀粉等是非还原糖）还原糖：葡萄糖、果糖、麦芽糖（蔗糖、淀粉等是非还原糖）还原糖：葡萄糖、果糖、麦芽糖（蔗糖、淀粉等是非还原糖）（（（（2 2 2 2）脂肪）脂肪）脂肪）脂肪+ + + + 水浴加热水浴加热苏丹苏丹ⅢⅢ染液染液苏丹苏丹ⅣⅣ染液染液镜检镜检镜检镜检 橘黄色橘黄色 红色红色双缩脲双缩脲（（NHNH2 2-CO-NH-CO-NH-CO-NH-CO-NH2 2））是两个分子是两个分子脲脲（即尿（即尿素）经素）经180℃180℃左右加热，放出一个分子左右加热，放出一个分子氨氨（（NH3NH3）后）后得到的产物。

得到的产物3 3 3 3）蛋白质）蛋白质）蛋白质）蛋白质+ + + +双缩脲试剂双缩脲试剂双缩脲试剂双缩脲试剂 紫色紫色紫色紫色双缩脲反应双缩脲反应即在碱性溶液（即在碱性溶液（NaOHNaOH）中，双缩脲能与铜）中，双缩脲能与铜离子（离子（Cu2+Cu2+）作用，形成紫红色络合物作用，形成紫红色络合物双缩脲试剂双缩脲试剂用于通过用于通过双缩脲反应双缩脲反应检测双缩脲，因蛋白检测双缩脲，因蛋白质中也有质中也有-CONH--CONH-基也可用于检验蛋白质，与蛋白质接基也可用于检验蛋白质，与蛋白质接触后的颜色呈紫色触后的颜色呈紫色4 4 4 4）淀粉）淀粉）淀粉）淀粉+ + + +碘液碘液碘液碘液 蓝色蓝色蓝色蓝色2.2.2.2.实验步骤：实验步骤：实验步骤：实验步骤：（（1 1）还原糖的鉴定）还原糖的鉴定1 11 11 1（（（（2 2 2 2）脂肪的鉴定）脂肪的鉴定）脂肪的鉴定）脂肪的鉴定取材：花生种子浸泡取材：花生种子浸泡取材：花生种子浸泡取材：花生种子浸泡3 3 3 3～～～～4 4 4 4 h h h h，将子叶削成薄片，将子叶削成薄片，将子叶削成薄片，将子叶削成薄片制片制片制片制片镜检镜检：在低倍：在低倍：在低倍：在低倍镜镜下找到已着色的花生子叶最薄下找到已着色的花生子叶最薄下找到已着色的花生子叶最薄下找到已着色的花生子叶最薄处处 然后用高倍然后用高倍然后用高倍然后用高倍镜观镜观察察察察结论结论：脂肪能被：脂肪能被：脂肪能被：脂肪能被苏苏丹丹丹丹ⅢⅢⅢⅢ染液染成橘黄色或被染液染成橘黄色或被染液染成橘黄色或被染液染成橘黄色或被苏苏丹丹丹丹ⅣⅣⅣⅣ染成红色染成红色染成红色染成红色①①①①取最理想的薄片取最理想的薄片取最理想的薄片取最理想的薄片②②②②染色：滴染色：滴染色：滴染色：滴2 2 2 2～～～～3 3 3 3滴滴滴滴苏苏丹丹丹丹ⅢⅢⅢⅢ染色染色染色染色3 3 3 3 minminminmin或苏丹或苏丹或苏丹或苏丹Ⅳ1minⅣ1minⅣ1minⅣ1min③③③③去浮色：去浮色：去浮色：去浮色： 1 1 1 1～～～～2 2 2 2滴滴滴滴50%50%50%50%的酒精的酒精的酒精的酒精④④④④制成制成制成制成临时临时装片：吸、滴、盖装片：吸、滴、盖装片：吸、滴、盖装片：吸、滴、盖（（（（3 3 3 3）蛋白质的鉴定）蛋白质的鉴定）蛋白质的鉴定）蛋白质的鉴定 1 11 13.3.3.3.实验注意问题实验注意问题实验注意问题实验注意问题 （（（（1 1 1 1）实验材料的选择）实验材料的选择）实验材料的选择）实验材料的选择 在物质的鉴定实验中在物质的鉴定实验中在物质的鉴定实验中在物质的鉴定实验中, , , ,选择无色或颜色较浅的材，以避选择无色或颜色较浅的材，以避选择无色或颜色较浅的材，以避选择无色或颜色较浅的材，以避免材料本身颜色的干扰。

免材料本身颜色的干扰免材料本身颜色的干扰免材料本身颜色的干扰 （（（（2 2 2 2）物质鉴定的实验一般不设立对照组（自身前后对）物质鉴定的实验一般不设立对照组（自身前后对）物质鉴定的实验一般不设立对照组（自身前后对）物质鉴定的实验一般不设立对照组（自身前后对照），若设立，对照组应加入成分已知的物质（标准对照），若设立，对照组应加入成分已知的物质（标准对照），若设立，对照组应加入成分已知的物质（标准对照），若设立，对照组应加入成分已知的物质（标准对照）辨析比辨析比较 斐林试剂与双缩脲试剂的比较分析斐林试剂与双缩脲试剂的比较分析•(2)(2)盐盐酸可改酸可改变细变细胞膜的通透性，加速染色胞膜的通透性，加速染色剂进剂进入入细细胞，同胞，同时时使染色使染色质质中的中的DNADNA与蛋白与蛋白质质分离，有利于分离，有利于DNA￿DNA￿与染色与染色剂结剂结合合实验：观察实验：观察DNADNA和和RNARNA在细胞中的分布在细胞中的分布•2．实验流程•冲洗涂片：用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10￿s•3．实验现象及相关结论￿实验结果示例实验结果示例材料选择材料选择1.1.生物实验选材基本要求生物实验选材基本要求: :①①符合实验要求符合实验要求②②易获取的原则易获取的原则③③不对实验结果产生干扰不对实验结果产生干扰2.2.本实验选材初步分析：本实验选材初步分析：￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿真核细胞真核细胞（如：洋葱鳞片叶表皮细胞，人的口腔上皮细胞等。

如：洋葱鳞片叶表皮细胞，人的口腔上皮细胞等该实验不宜选用绿色植物的叶肉细胞该实验不宜选用绿色植物的叶肉细胞本实验的注意事项•(1)(1)几种液体在几种液体在实验实验中的作用中的作用•①0.9%①0.9%的的NaClNaCl溶液：保持口腔上皮溶液：保持口腔上皮细细胞正常形胞正常形态态•②8%②8%的的盐盐酸：酸：•a.a.改改变细变细胞膜的通透性胞膜的通透性•b b．使染色体中．使染色体中DNADNA与蛋白与蛋白质质分离分离•③③蒸蒸馏馏水：水：a.a.配制染色配制染色剂剂；；b.b.冲洗冲洗载载玻片玻片(2)(2)关于甲基绿和吡罗红溶液的配制：甲基绿关于甲基绿和吡罗红溶液的配制：甲基绿吡罗红染色液包括吡罗红染色液包括A A液和液和B B液，使用时液，使用时现用现现用现配配。