公开课血红蛋白的提取和分离.ppt

血液有哪些成分？血液有哪些成分？血液有哪些成分？血液有哪些成分？血血血血液液液液血浆血浆血浆血浆水水水水 分分分分其他物质：其他物质：其他物质：其他物质：血浆蛋白血浆蛋白血浆蛋白血浆蛋白、、、、无机盐、磷脂、葡萄糖等无机盐、磷脂、葡萄糖等无机盐、磷脂、葡萄糖等无机盐、磷脂、葡萄糖等血细胞血细胞血细胞血细胞白细胞白细胞白细胞白细胞血小板血小板血小板血小板红细胞红细胞红细胞红细胞（最多）（最多）（最多）（最多）血红蛋白血红蛋白血红蛋白血红蛋白（（（（90909090％）％）％）％）血红蛋白血红蛋白血红蛋白血红蛋白两个两个两个两个αααα－肽链－肽链－肽链－肽链两个两个两个两个ββββ一肽链一肽链一肽链一肽链四个亚铁四个亚铁四个亚铁四个亚铁血血红素基团红素基团红素基团红素基团 每个每个肽链环绕一个肽链环绕一个亚铁血亚铁血红素基团红素基团，，此此基团可携带基团可携带一分一分子氧或一分子子氧或一分子二氧化碳二氧化碳，，血红血红蛋白因含有蛋白因含有血红素血红素而呈而呈红色2 2、血红蛋白的特点：、血红蛋白的特点： 血血红蛋白蛋白是人和其他脊椎是人和其他脊椎动物物红细胞胞的主要的主要组成成分成成分,负责血液中血液中O2和和CO2的运的运输。

 原理：根据蛋白质原理：根据蛋白质理化性质理化性质的差异，如的差异，如分子的形状分子的形状和和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对大小、所带电荷的性质和多少、溶解度和吸附的性质和对其他分子的亲和力其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同蛋白质等等，可以用来分离不同蛋白质 在本在本课题中，我中，我们将以血将以血红蛋白蛋白为实验材抖，学材抖，学习蛋蛋白白质提取和分离的一些基本技提取和分离的一些基本技术 : ① ①凝胶色谱法凝胶色谱法 ② ②电泳法电泳法 ③ ③缓冲溶液缓冲溶液 ④ ④它们在血红蛋白的提取中分别起到什么作用它们在血红蛋白的提取中分别起到什么作用实验专题实验专题- -血红蛋白的提取和分离血红蛋白的提取和分离选修一教材选修一教材P64实验操作实验操作 哺乳动物哺乳动物的的红细胞红细胞无无细胞核细胞核，，结构简单结构简单，，血红血红蛋白含量丰富蛋白含量丰富，便于，便于提取血红蛋白提取血红蛋白。

1 1、选材：、选材：最好选用哺乳动物红细胞最好选用哺乳动物红细胞样品处理样品处理2 2、实验步骤：、实验步骤：①①①①红细胞红细胞红细胞红细胞的洗涤的洗涤的洗涤的洗涤粗分离：粗分离：②②②②血红蛋白血红蛋白血红蛋白血红蛋白的释放的释放的释放的释放③③③③分离分离分离分离血红蛋白溶液血红蛋白溶液血红蛋白溶液血红蛋白溶液纯化：纯化：纯度鉴定纯度鉴定透析透析凝胶色谱法凝胶色谱法SDS-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳教材教材P66教材教材P67一、样品的处理一、样品的处理去除去除杂质血浆蛋白杂质血浆蛋白，以利于后续步骤的分离，以利于后续步骤的分离纯化1 1. .红细胞的洗涤红细胞的洗涤 (1)(1)洗涤洗涤的的目的：目的：(2)(2)洗涤的过程：洗涤的过程：①①采集血样采集血样( (每每100ml100ml加加3.0g3.0g柠檬酸钠柠檬酸钠）②②低速低速短时间短时间离心离心（（速度速度越高越高和时间和时间越长越长，会使，会使白细胞白细胞和淋巴细胞等一同沉淀和淋巴细胞等一同沉淀，达不到分离的效果，达不到分离的效果））③③吸取吸取血浆：血浆：上层透明的黄色血浆上层透明的黄色血浆。

④④生理盐水生理盐水洗涤洗涤：：用用五倍体积五倍体积的质量的质量分数为分数为0.90.9％的氯％的氯化钠化钠溶液洗涤溶液洗涤⑤⑤低速离心：低速离心：（（低速短时间低速短时间））缓慢搅拌缓慢搅拌10min10min⑥⑥重复重复4 4、、5 5步骤三步骤三次次 直至上清液中已没有黄色，表直至上清液中已没有黄色，表明洗涤干净明洗涤干净2.2.释放血红蛋白释放血红蛋白阅读思考：阅读思考：1.释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了哪些物质哪些物质？？目的分析：目的分析：①①蒸馏水蒸馏水的作用是的作用是______________________________②②加入加入40%体积甲苯体积甲苯的作用是的作用是____________________使红细胞大量吸水胀裂使红细胞大量吸水胀裂溶解红细胞的细胞膜溶解红细胞的细胞膜加速红细胞的破裂加速红细胞的破裂2.2.使用使用磁力搅拌器磁力搅拌器充分搅拌充分搅拌，，充分搅拌的目的是充分搅拌的目的是____________________________教材教材P67有机有机溶剂：溶剂：血红蛋白血红蛋白溶液：溶液：红细胞破碎物红细胞破碎物沉淀：沉淀：离离心心后后分分层层示示意意图图脂类脂类物质：物质：3.3.分离血红蛋白分离血红蛋白 ③ ③ ③ ③分离：分离：分离：分离：用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体红色透明液体。

① ① ① ①过程：过程：过程：过程：将搅拌好混合液转移到离心管内，以将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min2000r/min的速度离心的速度离心10 min10 min无色透明的甲苯层无色透明的甲苯层白色薄层固体白色薄层固体红色透明液体红色透明液体暗红色沉淀物暗红色沉淀物教材教材P67二、粗提取：透析二、粗提取：透析 （（（（1 1 1 1）过程）过程）过程）过程：：：：取取1ml1ml的血红蛋白溶液的血红蛋白溶液装入装入透析袋透析袋中，将中，将透析袋放入盛有透析袋放入盛有300ml300ml的物质的量浓度为的物质的量浓度为20mmol/l20mmol/l的的磷磷酸缓冲液酸缓冲液中（中（pHpH为为7.07.0），透析），透析1212小时 ①①透析袋：由透析袋：由半透膜半透膜制成，常用制成，常用玻璃纸、肠衣、膀胱膜玻璃纸、肠衣、膀胱膜能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内②②缓冲溶液：在一定范围内能够抵制缓冲溶液：在一定范围内能够抵制外界的酸或碱外界的酸或碱对溶对溶液的液的PHPH值值的影响，维持的影响，维持PH PH 基本不变基本不变 在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是在血红蛋白整个实验室中用的缓冲液是磷酸缓冲磷酸缓冲液液, ,利用缓冲液利用缓冲液模拟细胞内的模拟细胞内的PHPH环境环境，，保证血红蛋白保证血红蛋白的正常结构和功能。

的正常结构和功能教材教材P67装置中，装置中，B是血红蛋白溶液，则是血红蛋白溶液，则A是是 ；； 该装置该装置用于用于_________，目的是，目的是 ，， 磷酸缓磷酸缓冲液冲液 透析（粗透析（粗分离）分离） 去除样品中分子去除样品中分子量较小的杂质量较小的杂质 透析透析-----去除样品中分子量较小的杂质去除样品中分子量较小的杂质三、纯化三、纯化------凝胶色谱（凝胶色谱（分配色谱法分配色谱法））1 1、凝胶：、凝胶： 一些一些微小多孔的球体微小多孔的球体（（内含许多贯穿的通内含许多贯穿的通道道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖），由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖）2 2、原理：、原理：根据根据相对分子质量的大小相对分子质量的大小分离蛋白质的方法分离蛋白质的方法 当当不同的蛋白质通过凝胶不同的蛋白质通过凝胶时，（时，（ ））的蛋白质容易进入的蛋白质容易进入凝胶内部凝胶内部的通道，路程（的通道，路程（ ），移动速度（），移动速度（ ），而（），而（ ））的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（）移动，路程（ ），移动速度（），移动速度（ ），），相相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。

相对分子质量较小相对分子质量较小较长较长较慢较慢相对分子质量较大相对分子质量较大凝胶外部凝胶外部较短较短较快较快教材教材P64凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示 洗脱洗脱：：从色谱柱上端不断注入缓冲液从色谱柱上端不断注入缓冲液，， 促使促使蛋白质分子的差速流动蛋白质分子的差速流动混合物混合物上上 柱柱洗洗脱脱大分子流动大分子流动快快小分子流动小分子流动慢慢收收 集集大分子大分子收收 集集小分子小分子 纯化（凝胶色谱）纯化（凝胶色谱）1.1.凝胶色谱柱的凝胶色谱柱的制作制作：：2.2.凝胶色谱柱的凝胶色谱柱的装填装填：：教材图教材图5－－193.3.样品的样品的加入和加入和洗脱洗脱去除相对分子量较去除相对分子量较大的杂质蛋白大的杂质蛋白 1.1.凝胶色谱柱的凝胶色谱柱的制作制作：：①①取长取长4040厘米，内径厘米，内径1.61.6厘米的厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平玻璃管，两端需用砂纸磨平②②底塞的制作：底塞的制作：打孔打孔→→挖出凹穴挖出凹穴→→安装移液管头部安装移液管头部→→覆盖尼龙网，覆盖尼龙网，再用再用100100目尼龙纱包好目尼龙纱包好，插到玻璃管，插到玻璃管的的一一端。

端③顶塞的制作：顶塞的制作：打孔打孔→→安装玻璃管安装玻璃管④④组装：组装：将上述三者按相应位置组装成将上述三者按相应位置组装成一个整体一个整体⑤⑤安装其他附属结构安装其他附属结构 ① ①凝胶的选择：凝胶的选择： A A、材料：、材料：交联葡聚糖凝胶（交联葡聚糖凝胶（G-75G-75）） B B、代表意义：、代表意义： “G G”表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围 7575表示凝胶的得水值，即每克凝胶膨表示凝胶的得水值，即每克凝胶膨胀时吸水胀时吸水7.57.5克 ②凝胶的前处理：凝胶的前处理： 配置配置凝胶悬浮液：凝胶悬浮液：计算并称取计算并称取一定量的凝胶浸泡一定量的凝胶浸泡于于蒸馏水或洗脱液中蒸馏水或洗脱液中充充分溶胀后，配成分溶胀后，配成凝胶悬浮液凝胶悬浮液2.2.凝胶色谱柱的凝胶色谱柱的装填装填：： A A、固定：、固定：将色谱柱装置固定在支架上。

将色谱柱装置固定在支架上B B、装填：、装填：将凝胶悬浮液一次性缓慢倒入色将凝胶悬浮液一次性缓慢倒入色谱柱内，装填时谱柱内，装填时轻轻敲动轻轻敲动色谱柱，使色谱柱，使凝胶填凝胶填装均匀装均匀注意：注意：1 1、凝胶装填时、凝胶装填时尽量紧密尽量紧密，以降低凝胶颗粒，以降低凝胶颗粒之间的空隙之间的空隙 2 2、装填凝胶柱时、装填凝胶柱时不得有气泡存在不得有气泡存在：：因为气因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果分离效果③③凝胶色谱柱的装填方法：凝胶色谱柱的装填方法： ④④④④洗涤平衡：洗涤平衡：洗涤平衡：洗涤平衡：装填完毕后，装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在立即用缓冲液洗脱瓶，在50cm50cm高的操作压下，用高的操作压下，用300ml300ml的的20mmol/l20mmol/l的磷酸缓冲液（的磷酸缓冲液（pHpH为为7.07.0）充分洗涤平衡）充分洗涤平衡1212小时小时注意注意：：1 1、液面不要低于凝、液面不要低于凝胶表面，胶表面，否则可能有气泡否则可能有气泡混入混入，影响液体在柱内的，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物流动与最终生物大分子物质的分离效果质的分离效果。

2 2、不能发生洗脱液流干，、不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象露出凝胶颗粒的现象缓冲液缓冲液缓冲液缓冲液3 3、样品、样品加入与洗脱加入与洗脱①①加样前加样前 打开下端出口，使柱内凝打开下端出口，使柱内凝胶面上的（胶面上的（ ）缓）缓慢下降到与（慢下降到与（ ））平齐，关闭出口平齐，关闭出口缓冲液缓冲液凝胶面凝胶面缓冲液缓冲液作为作为洗脱液洗脱液②②加加透析透析样样品品①①调整缓冲液面：调整缓冲液面：与凝胶面平齐与凝胶面平齐②②滴加透析样品：滴加透析样品：用用吸管吸管将将1ml1ml透析液透析液的样品加到色谱柱的的样品加到色谱柱的顶端顶端③③样品渗入凝胶床：样品渗入凝胶床：样品完全进凝胶层样品完全进凝胶层④④洗脱：洗脱：打开下端，用磷酸缓冲液洗脱打开下端，用磷酸缓冲液洗脱⑤⑤收集：收集：待待红色的蛋白质红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每集流出液，每5ml5ml收集一试管连续收集收集一试管连续收集注意注意注意注意：：：：1 1、不要触及并破坏凝胶面不要触及并破坏凝胶面2 2、贴壁加样、贴壁加样。

3 3、使吸管管口沿管壁环绕移动使吸管管口沿管壁环绕移动问题思考：问题思考： 让让血红蛋白处在稳定的血红蛋白处在稳定的pHpH范围内，维持结构和功范围内，维持结构和功能正常 1 1、在血红蛋白纯化的整个过程中不断用磷酸缓、在血红蛋白纯化的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理的目的是什么？冲液处理的目的是什么？ 2 2、与其他蛋白质相比，血红蛋白有什么特点？、与其他蛋白质相比，血红蛋白有什么特点？这一特点对你进行血红蛋白的分离有什么启示？这一特点对你进行血红蛋白的分离有什么启示？ 血红蛋白血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液以通过观察颜色来判断什么时候应该收集洗脱液这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作  如果如果凝胶色谱柱装填得很成功凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作、分离操作也正确的话，能也正确的话，能清楚地看到清楚地看到血红蛋白的血红蛋白的红色区红色区带均匀、狭窄、平整带均匀、狭窄、平整，随着洗脱液缓慢流出，随着洗脱液缓慢流出；； 如果如果红色区带歪曲、散乱、变宽红色区带歪曲、散乱、变宽，说明，说明分分离的效果不好离的效果不好，这与，这与凝胶色谱柱的装填有关凝胶色谱柱的装填有关。

3 3、你能观察到蛋白质的分离过程中，红色、你能观察到蛋白质的分离过程中，红色区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并区带的移动吗？请描述红色区带的移动情况，并据此判断分离效果？据此判断分离效果？三、三、 电泳电泳------血红蛋白的分离鉴定方法血红蛋白的分离鉴定方法1.1.概念：概念：带电粒子带电粒子在在电场电场作用作用下下发生发生迁移迁移的的过程2.2.原理：原理： 许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有具有可解离可解离的的基团，在一定的基团，在一定的PHPH下，这些基团会带下，这些基团会带上上正电正电或或负电负电在电场的作用下，这些带电分子会在电场的作用下，这些带电分子会向着向着与其所带电荷相反与其所带电荷相反的的电极电极移动 电泳利用了待分离样品中电泳利用了待分离样品中各种分子各种分子带电性质带电性质的差异的差异以及以及分子本身分子本身的的形状形状、、大小大小的不同，使带电的不同，使带电分子产生分子产生不同的不同的迁移速度迁移速度，从而实现样品中各种分，从而实现样品中各种分子的分离。

子的分离3 3、类型：、类型： 琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等4 4、测定蛋白质分子量使用方法：、测定蛋白质分子量使用方法：SDS-SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳聚丙稀酰胺凝胶电泳（（1 1））组成：组成： 是是由由单体丙烯酰胺单体丙烯酰胺和和交联剂交联剂N,NN,N ′— ′—亚亚甲基双丙烯酰胺甲基双丙烯酰胺在在引发剂引发剂和和催化剂催化剂的作用下的作用下聚合交联成的聚合交联成的具有三维网状结构具有三维网状结构的的凝胶凝胶 聚聚丙稀酰胺凝胶电泳丙稀酰胺凝胶电泳 蛋白质蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率迁移率取决于它所带取决于它所带净电荷的多少净电荷的多少以及以及分子的大小分子的大小等因素 为了为了消除消除净电荷对迁移率的影响，净电荷对迁移率的影响，可以在凝胶中加可以在凝胶中加入入SDSSDS2 2）原理：）原理：（（3 3））作用机理作用机理: : ①①SDSSDS能使能使蛋白质蛋白质发生发生完全变性完全变性由几条肽链组成由几条肽链组成的的蛋白质复合体蛋白质复合体在在SDSSDS的作用下会的作用下会解聚成单条肽链解聚成单条肽链解聚成单条肽链解聚成单条肽链，，因此测定的结果只是因此测定的结果只是单条肽链的分子量单条肽链的分子量单条肽链的分子量单条肽链的分子量。

② ②SDS能与各种蛋白质形成能与各种蛋白质形成蛋白质蛋白质-SDS复合物复合物，，SDS所带所带负电荷负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量的量大大超过了蛋白质分子原有电荷量 因而因而掩盖了掩盖了不同种蛋白质间不同种蛋白质间的的电荷差别电荷差别，使，使电电泳迁移率泳迁移率完全取决于完全取决于（（ ）分子的大小分子的大小4 4、测定血红蛋白的方法：、测定血红蛋白的方法：SDS-SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳聚丙稀酰胺凝胶电泳电泳迁移率电泳迁移率完全取决于完全取决于（（ ）分子的大小分子的大小4、纯度鉴定（电泳）、纯度鉴定（电泳）SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳－聚丙烯酰胺凝胶电泳 通过电泳去点位置的对比，确定蛋白质通过电泳去点位置的对比，确定蛋白质的纯度或相对分子质量的纯度或相对分子质量 即即可选可选用一组用一组已知已知纯度（或相对纯度（或相对分子量分子量））的的标准标准蛋白蛋白与与需要鉴定的蛋白质需要鉴定的蛋白质同时同时进行电进行电泳泳，，通过通过比对二者电泳的区带位置比对二者电泳的区带位置，确定需，确定需要鉴定的蛋白质的纯度（或相对分子质量）要鉴定的蛋白质的纯度（或相对分子质量） 观察你处理的血液样品离心后观察你处理的血液样品离心后是否分层是否分层（见教科书图（见教科书图5-185-18），），如果分层不明显，可能如果分层不明显，可能是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因是洗涤次数少、未能除去血浆蛋白的原因。

此外此外，，离心速度过高和时间过长离心速度过高和时间过长，会使，会使白白细胞细胞和和淋巴细胞一同沉淀淋巴细胞一同沉淀，也，也得不到纯净的红得不到纯净的红细胞细胞，影响后续血红蛋白的提取纯度影响后续血红蛋白的提取纯度三、实验结果分析与评价三、实验结果分析与评价 1 1、你是否完成了对血液样品的处理？你能、你是否完成了对血液样品的处理？你能描述处理后的样品发生了哪些变化吗？描述处理后的样品发生了哪些变化吗？三、实验结果分析与评价三、实验结果分析与评价2 2、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你、你装填的凝胶色谱柱是否有气泡产生？你的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？的色谱柱装填得成功吗？你是如何判断的？ 由于凝胶是由于凝胶是一种半透明一种半透明的的介质介质，因此，因此可以在可以在凝胶柱旁放一支凝胶柱旁放一支与与凝胶柱垂直凝胶柱垂直的的日光灯日光灯，检查，检查凝凝胶是否胶是否装填得装填得均匀均匀 此外此外，还可以，还可以加入大分子加入大分子的的有色物质有色物质，例如，例如蓝色葡聚糖蓝色葡聚糖—2000—2000或红色葡聚糖，观察或红色葡聚糖，观察色带移动色带移动的的情况情况( (如果如果色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色带均匀、狭窄、平整，说明凝胶色谱柱的性能良好色谱柱的性能良好。

如果如果色谱柱出现纹路或是气色谱柱出现纹路或是气泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重泡，轻轻敲打柱体以消除气泡，消除不了时要重新装柱新装柱) ) 1．已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子，其．已知某样品中存在甲、乙、丙、丁、戊五种蛋白质分子，其分子大小、电荷的性质和数量情况如右图所示，下列有关蛋白质分子大小、电荷的性质和数量情况如右图所示，下列有关蛋白质分离的叙述正确的是分离的叙述正确的是 ( )0A A．将样品装入透析袋中透析．将样品装入透析袋中透析12h12h，若，若分子乙保留在袋内，则分子丙也保留分子乙保留在袋内，则分子丙也保留在袋内在袋内B B．若用凝胶色谱柱分离样品中的蛋白．若用凝胶色谱柱分离样品中的蛋白质，则分子甲移动速度最快质，则分子甲移动速度最快C C．若将样品以．若将样品以2000r/min2000r/min的速度离心的速度离心10min10min，分子戊存在于沉淀中，则分子，分子戊存在于沉淀中，则分子甲也存在于沉淀中甲也存在于沉淀中D D．若用．若用SDS—SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样品中的蛋白质分子，则分子甲和离样品中的蛋白质分子，则分子甲和分子戊形成的电泳带相距最远分子戊形成的电泳带相距最远 答答：让血红蛋白处在：让血红蛋白处在稳定的稳定的pHpH范围内范围内，，维持维持结结构和功能。

构和功能 1 1、在血红蛋白的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理、在血红蛋白的整个过程中不断用磷酸缓冲液处理的目的是什么？的目的是什么？ 4 4 4 4、、、、与其他真核细胞相比，红细胞有什么特点？这一与其他真核细胞相比，红细胞有什么特点？这一与其他真核细胞相比，红细胞有什么特点？这一与其他真核细胞相比，红细胞有什么特点？这一特点对你进行蛋白质的分离有什么意义？特点对你进行蛋白质的分离有什么意义？特点对你进行蛋白质的分离有什么意义？特点对你进行蛋白质的分离有什么意义？ 答答：血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分：血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过离时可以通过观察颜色观察颜色来判断什么时候应该收集洗来判断什么时候应该收集洗脱液这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简脱液这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操作化了实验操作 课后练习课后练习 血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，血红蛋白提取和分离的程序可分为四大步，包括：包括：样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定样品处理、粗分离、纯化和纯度鉴定 首先首先通过通过洗涤洗涤红细胞、血红蛋白的释放、离心红细胞、血红蛋白的释放、离心等操作等操作收集到收集到血红蛋白溶液血红蛋白溶液，即，即样品的处理样品的处理；； 再再经过经过透析透析去除分子量较小的杂质，即去除分子量较小的杂质，即样品的样品的粗分离粗分离；； 然后然后通过通过凝胶色谱法凝胶色谱法将相对分子质量较大杂质将相对分子质量较大杂质蛋白除去，即蛋白除去，即样品的纯化样品的纯化；； 最后最后经经聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳进行进行纯度鉴定纯度鉴定。

3 3、你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？、你能描述血红蛋白分离的完整过程吗？。