小鼠及蛙类实验基本技术.ppt

小鼠及蛙类基本实验技术小鼠及蛙类基本实验技术 Basic Experimental Technique Basic Experimental Technique of Mouseof Mouse and Frogand Frog医学基础实验教学中心洪天国 2012年5月u小鼠及蛙类基本实验技术实验目的实验目的 PurposePurpose一一实验材料实验材料 MaterialMaterial二二实验方法实验方法 MethodMethod三三注意要点注意要点 PrecautionPrecaution四四一、实验目的1.学习并掌握小鼠捉拿和各种给药方法 腹腔注射，灌胃给药 Ø Intraperitoneal Injection and Intragastric Administration 2.学习并掌握蛙类捉拿及常用实验技术 坐骨神经干腓肠肌标本制备，坐骨神经干分离 Ø Making of Ischiatic Nerve -Gastrocnemius Muscle Specimen Ø Free of Sciatic Nerve 3.熟悉机能实验室动物实验规章制度动物领取，动物处理 Ø Animal Collection and Burial二、实验材料与动物1. 试剂 （Agent） 0.9%NaCl溶液（生理盐水），任氏液（Ringer’s）2. 器材 （Equiment）1ml注射器，小鼠灌胃器，蛙类基本手术器械（包括粗剪 刀、眼科剪、组织镊、刺蛙针、锌铜弓、玻璃分针、蛙板 等），图钉，玻璃平皿，手术线，纱布等。

3. 动物 （Animal） 小鼠（每组2只），蟾蜍（每组2只）1.小鼠捉拿 （Mice Seizure） 1）双手捉拿方法三、实验方法：小鼠实验技术右手抓尾后拉，左 手拇指和食指抓住 小鼠头颈部皮肤， 将其固定于左手大 鱼际处；拉直四肢并用左手 无名指、小指压紧 尾和后肢，右手即 可作注射或其它实 验操作2)单 手 捉 拿 方 法31242.小鼠腹腔注射（Intraperitoneal Injection）左手固定小鼠，使腹部朝 上，右手持注射器，取45°角 刺入左侧下腹部向头端刺入腹 腔进针部位不宜太高，刺入 不能太深，以免伤及内脏，推 注前应回抽确认注射量一般为0.1～0.2 ml/10g体重 三、实验方法：小鼠实验技术3.小鼠灌胃 （Intragastric Administration）1小 白 鼠1灌胃量一般为 0.1～0.3ml/10g体重 2以左手捉持小鼠，使 头部朝上，保持头颈部平 直右手持装有灌胃针头 的注射器，自右口角插人 口腔，从上腭进入食管 如遇阻力，应退出后重插 ，不能强力插，以免穿破 食管或误入气管三、实验方法：小鼠实验技术三、实验方法：蟾蜍(Toad )的捉拿用左手将动物贴 紧在手掌中，并以左 手中指、无名指、小 指压住其左腹侧和后 肢，拇指和食指分别 压住背部、头部和前 肢，右手进行操作。

根据实验需要， 可用图钉，采取俯卧 位或仰卧位固定在蛙 板上 注意:抓取蟾蜍时，禁忌挤压两侧耳部毒腺，以免毒液射入眼中枕骨大孔左手握蟾蜍，食指下 压吻端，拇指按压背部， 其余三指紧贴腹部找到 枕骨大孔刺入1-2mm，分 别捣损脑组织和脊髓※脑和脊髓完全破坏的标 志是：呼吸停止，四肢松 软并处于对称位置 三、实验方法：蛙类坐骨神经腓肠肌标本制备1.破坏脑脊髓 （Damage of Spinal Cord and Brain）三、实验方法：蛙类坐骨神经腓肠肌标本制备在骶髂关节水平上 1cm处剪断脊柱，去除 头、前肢和内脏，保 留部分脊柱和下肢 用任氏液小心冲洗坐 骨神经及其周围组织 上的血液2.剪除躯干上部及内脏 （Prune of Upper Part of Torso and Viscera）剪去尾骨,剥 去余下组织的皮 肤,沿脊柱正中到 耻骨联合将标本 剪开,标本放到盛 有任氏液的烧杯 中三、实验方法：蛙类坐骨神经腓肠肌标本制备3.剥皮 （Skinning）4.游离坐骨神经 （Free of Sciatic Nerve） 腓肠肌向上将标本固定于蛙板上，由脊柱仔细 将坐骨神经分离至膝关节处，并在脊柱旁结扎。

三、实验方法：蛙类坐骨神经腓肠肌标本制备5.制成坐骨神经—腓肠肌标本（Making of Ischiatic Nerve -Gastrocnemius Muscle Specimen ）腓肠肌向上将标本固定于蛙板上，由脊柱仔细 将坐骨神经分离至膝关节处，并在脊柱旁结扎6.标本检验 (Specimen Examination)用锌铜弓（任氏液预先湿润）轻轻刺激坐骨神 经，腓肠肌收缩即表示标本制备完好三、实验方法：蛙类坐骨神经腓肠肌标本制备四、注意事项1.捉拿小鼠时应规范操作，避免被咬2.腹腔注射时，针头刺入部位不宜太接近上腹部或 太深，以免刺破内脏针头与腹腔的角度不宜太 小，避免刺入皮下3.灌胃时，针头沿鼠口角通过食管进入胃内灌时 如很通畅，则表示针头已进入胃内；如动物有呕 吐或强烈挣扎，必须拔出后按上述方法重新操作 如进针不顺，决不可硬向里插Ø 小鼠实验1. 抓取蟾蜍时，小心毒液四、注意事项Ø 蛙类实验1. 抓取蟾蜍时，小心毒液2. 分离神经时，应用玻璃分针3. 保持坐骨神经腓肠肌标本活性（加任氏 液、不要用手和器械夹捏）四、注意事项Ø 蛙类实验玻璃分针u机能实验室动物实验规章制度1. 动物领取：实验开始后，按规定数量在动物房领取，领完动物后及时关闭鼠笼或蛙笼。

实验过程中非操作因素导致动物死亡，须经主讲老师批准后方可重新领取，严禁擅自拿取2. 动物实验：应爱惜实验动物，严禁浪费3. 动物尸体处理：实验完毕后，动物尸体集中于回收桶，由值日同学负责处理小鼠及蛙类实验基本技术器械清单器材数量器材数量小鼠灌胃器11ml注射器针头2脸盆12. 蛙类实验基本技术器材数量器材数量蛙板2粗剪刀1刺蛙针2组织剪1锌铜弓1组织镊2图钉4眼科剪1玻璃平皿1玻璃分针21:小鼠灌胃、腹腔注射方法鼠灌胃器锌铜弓。