吉林省长市实验中学高中生物选修一微生物的实验室培养ppt课件.ppt

课题1￿￿微生物的微生物的实验室培育室培育专题2:微生物的培育与运用〔一〕微生物的〔一〕微生物的类群群微微生生物物原核原核类:真核真核类非非细胞胞类：：细菌、支原体、放菌、支原体、放线菌、菌、蓝藻藻个体微小、构造个体微小、构造简单酵母菌、霉菌、食用菌酵母菌、霉菌、食用菌真真￿￿￿￿￿菌：菌：原生生物：原生生物：显微藻微藻类、原生生物、原生生物病毒、病毒、类病毒、病毒、朊病毒病毒◆微生物的共同特点：微生物的共同特点：一、根底知一、根底知识1.细细菌的形状菌的形状二分裂二分裂2.细细菌的繁衍菌的繁衍3.细细菌的菌落菌的菌落￿〔〔1〕概念：〕概念：￿单个或少数个或少数细菌在固体培育基上菌在固体培育基上￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿大量繁衍大量繁衍时，构成的一个肉眼可，构成的一个肉眼可见的、具有一定的、具有一定形状构造的子形状构造的子细胞群体，叫做菌落胞群体，叫做菌落〔〔2〕特征：〕特征：大小、外形、光大小、外形、光泽度、度、颜色、硬度、色、硬度、透明度等透明度等〔〔3〕功能：〕功能： 每种每种细菌在一定条件下所构成的菌菌在一定条件下所构成的菌落，可以作落，可以作为菌种菌种鉴定的重要根据。

定的重要根据几种菌落及其形状微生物需求的五大微生物需求的五大类营养要素物养要素物质：：〔二〕微生物需求的〔二〕微生物需求的营养物养物质及功能及功能1.碳源碳源￿2.氮源氮源￿3.生生长长因子因子￿4.无机无机盐盐￿5.水水：凡是能：凡是能为微生物提供碳元素的微生物提供碳元素的营养物养物质①无机碳源：无机碳源：CO2；；NaHCO3等等②有机碳源：糖有机碳源：糖类类、脂肪酸、石油等、脂肪酸、石油等①构成构成细细胞物胞物质质和一些代和一些代谢产谢产物物②异养微生物的能源异养微生物的能源⑴概念概念⑵来源：来源：⑶作用：作用：1.碳源碳源①①无机氮源：无机氮源：无机氮源：无机氮源：N2N2、、、、NH4+NH4+、、、、NO3-NO3-、、、、NH3NH3等②②有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨胨胨胨、、、、￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿氨基酸等氨基酸等氨基酸等氨基酸等凡是可以凡是可以凡是可以凡是可以为为微生物提供微生物提供微生物提供微生物提供NN元素的元素的元素的元素的营营养物养物养物养物质质。

主要用于合成蛋白主要用于合成蛋白主要用于合成蛋白主要用于合成蛋白质质、核酸及含、核酸及含、核酸及含、核酸及含NN的代的代的代的代谢谢产产物2.氮源氮源⑴⑴概念：概念：概念：概念：⑵⑵来源：来源：来源：来源：⑶⑶作用：作用：作用：作用：3.生生长长因子因子⑶⑶常常常常见见见见的生的生的生的生长长长长因子：因子：因子：因子：⑴⑴概念：概念：概念：概念：⑵⑵作用：作用：作用：作用：微生物生微生物生微生物生微生物生长长不可短少的微量有机物不可短少的微量有机物不可短少的微量有机物不可短少的微量有机物酶酶和核酸的和核酸的和核酸的和核酸的组组成成分维维生素、氨基酸、生素、氨基酸、生素、氨基酸、生素、氨基酸、嘌嘌呤、呤、呤、呤、嘧啶嘧啶等〔三〕培育基〔三〕培育基￿￿1.概念概念￿：人：人们们按照微生物按照微生物对营对营养物养物质质的不同需的不同需求，配制出供其生求，配制出供其生长长繁衍的繁衍的营营养基养基质质2.培育基的培育基的类类型和用途型和用途3.不同培育基配方不同培育基配方(参考教材附参考教材附录录3)￿4.不不论论哪种培育基，普通都含有水、碳源、氮源、哪种培育基，普通都含有水、碳源、氮源、无机无机盐盐等等营营养物养物质质，另外，另外还还需求需求满满足微生物生足微生物生长长对对pH、特殊、特殊营营养物养物质质〔 〔如如:生生长长因子因子〕 〕以及氧气、以及氧气、二氧化碳、浸透二氧化碳、浸透压压等的要求。

等的要求￿划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分用途培育基的种类不加凝固不加凝固剂加凝固加凝固剂，如，如琼脂脂工工业消消费察看微生物的运察看微生物的运动、分、分类鉴定定微生物分微生物分别、、鉴定、活菌定、活菌计数、保藏菌种数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物含化学成分不明确的天然物质工工业消消费培育基成清楚确培育基成清楚确分分类、、鉴定定在培育基中参与某种化学物在培育基中参与某种化学物质,以抑制不需求的微生物的生以抑制不需求的微生物的生长,促促进所需求的微生物的生所需求的微生物的生长培育、分培育、分别出出特定微生物特定微生物在培育基中参与某种指示在培育基中参与某种指示剂或或化学化学药品品,用以用以鉴别不同种不同种类的的微生物微生物鉴别不同种不同种类微生物微生物选择培育基培育基液体培育基液体培育基半固体培育基半固体培育基固体培育基固体培育基天然培育基天然培育基合成培育基合成培育基鉴别培育基培育基液体培育基：液体培育基：外表生外表生外表生外表生长长均匀混均匀混均匀混均匀混浊浊生生生生长长沉淀生沉淀生沉淀生沉淀生长长backback半固体培育基：半固体培育基：( (能否运能否运动动) ) 无无无无动动力力力力有有有有动动力力力力( (弥散弥散弥散弥散) )固体培育基：菌落固体培育基：菌落分分别导入了目的基因的受体入了目的基因的受体细胞胞几种几种选择培育基培育基参与青霉素的培育基参与青霉素的培育基分分别酵母菌、霉菌等真菌酵母菌、霉菌等真菌不加氮源的无氮培育基不加氮源的无氮培育基分分别固氮菌固氮菌不加含碳有机物的无碳培育基不加含碳有机物的无碳培育基分分别自养型微生物自养型微生物参与青霉素等抗生素的培育基参与青霉素等抗生素的培育基backback伊伊红————美美蓝培培育育基基〔四〕无菌技〔四〕无菌技术1.1.概念概念概念概念￿ ￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿无菌操作泛指在培育微生物的操作中，一切防无菌操作泛指在培育微生物的操作中，一切防无菌操作泛指在培育微生物的操作中，一切防无菌操作泛指在培育微生物的操作中，一切防止止止止杂杂菌菌菌菌污污染的方法。

染的方法染的方法染的方法⑴⑴消毒定消毒定消毒定消毒定义义义义：：：：￿￿￿￿￿￿￿￿利用化学或物理方法，利用化学或物理方法，利用化学或物理方法，利用化学或物理方法，杀杀杀杀死部份微生物的死部份微生物的死部份微生物的死部份微生物的过过过过程2.2.消毒与消毒与消毒与消毒与灭灭灭灭菌菌菌菌￿ ￿⑵⑵灭灭灭灭菌的定菌的定菌的定菌的定义义义义：：：：　　以化学　　以化学　　以化学　　以化学试剂试剂或物理方法消或物理方法消或物理方法消或物理方法消灭灭一切微生物，包括一切微生物，包括一切微生物，包括一切微生物，包括一切一切一切一切细细菌的繁衍体、芽菌的繁衍体、芽菌的繁衍体、芽菌的繁衍体、芽孢孢、霉菌及病毒，而到达完、霉菌及病毒，而到达完、霉菌及病毒，而到达完、霉菌及病毒，而到达完全无菌之全无菌之全无菌之全无菌之过过程￿￿￿￿￿￿￿￿①煮煮￿沸沸￿消消￿毒毒￿法：法：￿￿100℃煮沸煮沸5-6min②巴巴￿氏氏￿消消￿毒毒￿法：法：￿￿￿70-75℃下煮下煮30min或或￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿80℃下煮下煮15min③化学化学药剂药剂消毒法：用消毒法：用70%酒精等酒精等进进展皮肤展皮肤￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿消消￿毒；毒；氯氯气消毒水源。

气消毒水源④紫紫￿外外￿线线￿消消￿毒毒￿法法〔〔1〕消毒的方法〕消毒的方法3.常用的消毒与常用的消毒与灭灭菌的方法菌的方法①灼灼烧灭烧灭菌菌②干干热灭热灭菌菌￿￿￿￿160-170￿℃下下加加热热1-2h③高高压压蒸气蒸气灭灭菌菌￿￿￿100kPa、、121￿℃下下维维持持15-30min.〔〔2〕〕灭菌的方法菌的方法￿￿￿1.无菌技术除了用来防止实验室的培育物被其他外来微生物污染外,还有什么目的？2.请他判别以下资料或器具能否需求消毒或灭菌假设需求，请选择适宜的方法〔1〕￿培育细菌用的培育基与培育皿〔2〕￿玻棒、试管、烧瓶和吸管〔3〕￿实验操作者的双手无菌技无菌技术还能有效防止操作者本身被微生物感染能有效防止操作者本身被微生物感染消毒消毒￿灭菌菌二、二、实验操作操作(以培育大以培育大肠杆菌杆菌为例例)〔一〕制〔一〕制备牛肉膏蛋白牛肉膏蛋白胨培育基培育基1.计计算算2.称量称量3.溶化溶化4.灭灭菌菌:￿￿￿￿￿￿将将锥锥形瓶放入高形瓶放入高压压蒸气蒸气灭灭菌菌锅锅，在，在压压力力为为100kPa、温度、温度为为121℃，，灭灭菌菌15～～30min5.倒平板倒平板:￿￿￿￿￿￿待培育基冷却到待培育基冷却到50￿℃左右左右时时，在酒精灯，在酒精灯附近倒平板。

附近倒平板2d后察看平板，无后察看平板，无杂杂菌菌污污染才可染才可用来接种用来接种1.培育基培育基灭灭菌后，需求冷却到菌后，需求冷却到50￿℃左右左右时时，才干，才干用来倒平板他用什么方法来估用来倒平板他用什么方法来估计计培育基的温度培育基的温度？？问题讨论1 1￿￿￿￿￿￿￿可用手触摸可用手触摸锥形瓶，形瓶，觉得温度下降到得温度下降到刚刚不不烫手手时，就可以倒平板了就可以倒平板了2.为什么需求使锥形瓶的瓶口经过火焰？￿￿￿￿￿经过灼灼烧灭菌，防止瓶口的微生物菌，防止瓶口的微生物污染培育基染培育基3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，假设不小心将培育基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培育微生物吗？为什么？￿￿￿￿￿￿平板冷凝后，皿盖上会凝平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后水珠，凝固后的培育基外表的湿度也比的培育基外表的湿度也比较高，将平板倒置，高，将平板倒置，既可以使培育基外表的水分更好地既可以使培育基外表的水分更好地挥发，又可，又可以防止皿盖上的水珠落入培育基，呵斥以防止皿盖上的水珠落入培育基，呵斥污染￿￿￿￿￿￿￿空气中的微生物能空气中的微生物能够在皿盖与皿底之在皿盖与皿底之间的培的培育基上繁殖，因此最好不要用育基上繁殖，因此最好不要用这个平板培育微生物。

个平板培育微生物〔二〕〔二〕纯化大化大肠杆菌杆菌平板划平板划线法和稀法和稀释涂布平板法涂布平板法1.微生物的接种的常用接种方法：微生物的接种的常用接种方法：2.平板划平板划线线的操作方法的操作方法平板划平板划线的操作的操作1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作终了时，依然需求灼烧接种环吗？为什么？￿￿￿￿￿￿￿操作的第一步灼操作的第一步灼烧接种接种环是是为了防止接种了防止接种环上能上能够存在的微生物存在的微生物污染培育物；每次划染培育物；每次划线前灼前灼烧接种接种环是是为了了杀死上次划死上次划线终了后，接种了后，接种环上残留的菌种，使下一上残留的菌种，使下一次划次划线时，接种，接种环上的菌种直接来源于上次划上的菌种直接来源于上次划线的末端，的末端，从而从而经过划划线次数的添加，使每次划次数的添加，使每次划线时菌种的数目逐菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落划减少，以便得到菌落划线终了后灼了后灼烧接种接种环，能及，能及时杀死接种死接种环上残留的菌种，防止上残留的菌种，防止细菌菌污染染环境和感染境和感染操作者问题讨论2 2￿￿￿￿￿￿￿2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进展划线？￿￿￿￿￿￿以免接种以免接种环温度太高，温度太高，杀死菌种。

死菌种￿￿￿￿￿￿￿3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开场划线？￿￿￿￿￿￿￿划划线后，后，线条末端条末端细菌的数目比菌的数目比线条起条起始始处要少，每次从上一次划要少，每次从上一次划线的末端开的末端开场，能，能使使细菌的数目随着划菌的数目随着划线次数的添加而逐次数的添加而逐渐减少，减少，最最终能得到由能得到由单个个细菌繁衍而来的菌落菌繁衍而来的菌落问题讨论2 23.稀稀释释涂布平板的操作方法涂布平板的操作方法￿￿￿￿涂布平板的一切操作都应在火焰附近进展结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进展无菌操作？￿￿￿￿￿￿￿应从操作的各个从操作的各个细节保保证“无菌〞例如，酒无菌〞例如，酒精灯与培育皿的精灯与培育皿的间隔要适宜、吸管隔要适宜、吸管头不要接触任何不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等问题讨论3 35.菌种的保管菌种的保管 接种到固体斜面接种到固体斜面培育基，菌落培育基，菌落长成后成后置于置于4℃4℃冰箱保管冰箱保管4.微生物的恒温培育微生物的恒温培育⑵ ⑵ 长长期保管：期保管：甘油冷甘油冷冻管藏法管藏法⑴⑴暂时暂时保藏：保藏：三、三、结果分析与果分析与评价价￿〔一〕培育基的制造能否合格〔一〕培育基的制造能否合格￿￿￿￿￿￿假假设未接种的培育基在恒温箱中保温未接种的培育基在恒温箱中保温1～～2d后后无菌落生无菌落生长，，阐明培育基的制明培育基的制备是是胜利的，否那利的，否那么需求重新制么需求重新制备。

〔二〕接种操作能否符合无菌要求〔二〕接种操作能否符合无菌要求￿￿￿￿￿￿￿假假设培育基上生培育基上生长的菌落的的菌落的颜色、外形、大色、外形、大小根本一致，并符合大小根本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，那么杆菌菌落的特点，那么阐明接种操作是符合要求的；假明接种操作是符合要求的；假设培育基上出培育基上出现了其他菌落，那么了其他菌落，那么阐明接种明接种过程中，无菌操作程中，无菌操作还未到达要求，需求分析未到达要求，需求分析缘由，再次由，再次练习〔三〕能否〔三〕能否进展了及展了及时细致的察看与致的察看与记录￿￿￿￿￿￿￿培育培育12h与与24h后的大后的大肠杆菌菌落的大小会有杆菌菌落的大小会有明明显不同，及不同，及时察看察看记录的同窗会的同窗会发现这一点，一点，并能察看到其他一些并能察看到其他一些细微的微的变化￿￿￿￿￿￿￿￿例:某同窗用新颖的泡菜滤液为实验资料纯化乳酸菌分别纯化所用固体培育基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培育基中的碳酸钙回答以下问题：〔1〕分别纯化乳酸菌时，首先需求用__________对泡菜滤液进展梯度稀释，进展梯度稀释的理由是:无菌水无菌水￿￿￿￿￿在稀在稀释释度足度足够够高的菌液里，聚集在一同的乳高的菌液里，聚集在一同的乳酸菌将被分散成酸菌将被分散成单单个个细细胞，从而能在培育基外表胞，从而能在培育基外表构成构成单单个的菌落。

个的菌落 〔〔2〕推〕推测在分在分别纯化所用的培育基中参与碳化所用的培育基中参与碳酸酸钙的作用有的作用有_______________________________和和______________________________________分别纯化化时应挑挑选出出____________________的菌落作的菌落作为候候选菌〔〔3〕乳酸菌在〕乳酸菌在￿-20℃长期保管期保管时，菌液中常，菌液中常需求参与一定量的需求参与一定量的_______〔填〔填“蒸蒸馏水〞、水〞、“甘油〞或甘油〞或“碳酸碳酸钙〞〕中和乳酸菌代中和乳酸菌代谢过程中程中产生的乳酸生的乳酸￿￿￿在平板上有溶在平板上有溶钙圈圈甘油甘油 利于乳酸菌的利于乳酸菌的识别和分和分别￿营养类型营养类型营养类型营养类型能源能源能源能源氢的供体氢的供体氢的供体氢的供体基本碳源基本碳源基本碳源基本碳源微生物举例微生物举例微生物举例微生物举例代代谢类型型光能无机光能无机光能无机光能无机营营养养养养( ( ( (光能自养型光能自养型光能自养型光能自养型) ) ) )光能有机光能有机光能有机光能有机营营养养养养( ( ( (光能异养型光能异养型光能异养型光能异养型) ) ) )化能无机化能无机化能无机化能无机营营养养养养( ( ( (化能自养型化能自养型化能自养型化能自养型) ) ) )化能有机化能有机化能有机化能有机营营养养养养( ( ( (化能异养型化能异养型化能异养型化能异养型) ) ) )光光光光光光光光无无无无机机机机物物物物有有有有机机机机物物物物无机物无机物无机物无机物有机物有机物有机物有机物无机物无机物无机物无机物有机物有机物有机物有机物二氧化碳二氧化碳二氧化碳二氧化碳二氧化碳二氧化碳二氧化碳二氧化碳及及及及简单简单有有有有机物机物机物机物二氧化碳二氧化碳二氧化碳二氧化碳有机物有机物有机物有机物大多数知大多数知大多数知大多数知细细菌菌菌菌和全部真核微和全部真核微和全部真核微和全部真核微生物生物生物生物硝化硝化硝化硝化细细菌菌菌菌氢细氢细菌菌菌菌紫色非硫紫色非硫紫色非硫紫色非硫细细菌菌菌菌蓝细蓝细菌菌菌菌绿绿色硫色硫色硫色硫细细菌菌菌菌藻藻藻藻类类本本课题知知识小小结: :。