基于多指标成分同时检测的六味地黄浓缩丸溶出度测定.doc

基于多指标成分同时检测的六味地黄浓缩丸溶出度测定［摘要］以没食子酸、马钱昔、芍药苜、丹皮酚的含量为指标，筛选 溶出度测定条件，建立六味地黄浓缩丸多指标成分的溶岀度测定方法，计 算并绘制累积溶出曲线，再通过相似因子(f2)比较不同厂家产品的溶出 度差异结果显示，最佳的溶出度测定条件为采用桨法，以250 mL 0.1 mol?L-l盐酸为溶出介质，转速100 r?min-lo不同厂家六味地黄浓缩丸 中4种成分的溶出曲线相似因子f2大多小于50,表明不同厂家六味地黄 浓缩丸溶出度存在显著性差异，为完善六味地黄浓缩丸的质量评价提供科 学依据［关键词］六味地黄浓缩丸；多成分；溶出度；相似因子［收稿日期12013-08-08［基金项冃］江西省卫生厅中医药科研计划项冃(2012A033)；江西省 教育厅科研项目(GJJ13584)；江西中医药大学重点学科青年教师培养计 划项日(2012jzzdxk020)［通信作者］*廖正根，教授，研究方向为中药制剂及新剂型，Tel: (0791) 87118658, E-mail： lyzlyg@［作者简介］罗云,博士，讲师，Tel: (0791) 87119011, E-mail： luoyunn@163. com药物溶出度与原料药、辅料的质量优劣、生产工艺等因素密切相关，具差异是临床疗效不一的原因之一，科学合理的溶出度质量 标准能体现口服固体制剂的内在品质［1-2］ o六味地黄浓缩丸收载于2010 年版《中国药典》一部，为滋阴补肾常用中成药，由熟地黄、山茱萸、牡 丹皮、山药、泽泻、茯苓等6种中药饮片制成，成分十分复朵、药效物质 基础不十分明确，加之生产厂家众多、所用药材原料质量不同、各厂家制 法虽按照药典标准但工艺参数可能不同，导致质量参差不齐［3］。

现行的 六味地黄浓缩丸质量标准仅以溶散时限作为其溶解释放的控制指标［4］, 尚无溶出度检查，而冃前多以其中某1〜2个化学成分为指标进行溶出度 研究［1, 5］,这与中药多成分、多靶点、多途径的作用特点不相符因此, 为提高和完善其质量标准，保证其临床疗效，有必耍建立符合中药特点的 六味地黄浓缩丸溶出度测定方法本研究在前期实验结果的基础上［6］, 以没食子酸、芍药昔、马钱昔、丹皮酚4种主要成分为指标，建立基于多 指标成分同时检测的六味地黄浓缩丸溶出度测定方法，并比较不同厂家六 味地黄浓缩丸的溶出度差异，为科学合理地制定其溶出度质量标准提供研 究基础和方法1材料ZRS-8G智能溶出试验仪（夭津天大天发科技有限公司）；Agilent 1260 型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；1/10万BT25S电子分析天平， 1/1力BSA124S电了分析天平（德国Sartorius公司）；JK-5200型超声波 清洗器（功率200 W,频率40 kHz,合肥金尼克机械制造有限公司）没 食子酸、马钱甘、芍药昔、丹皮酚（中国食品药品检定研究院，纯度分别 为 90.1%, 99. 2% , 96. 5% , 100% , 批号分别为 110831-200803 , 111640-201005, 110736-201035, 110708-200506）。

六味地黄浓缩丸（厂 家A,批号0030809；厂家B,批号10J410；厂家C,批号100831；厂家D, 批号 1005002；厂家 E,批号 1007167, 1009313, 1012322；厂家 F,批号 10010009；厂家G,批号201007014）色谱纯乙購（德国Merck公司）; 双蒸水（自制），其他试剂均为分析纯2方法与结果2. 1IIPLC测定没食子酸、芍药昔、马钱昔和丹皮酚的含量[6]2. 1. 1对照品溶液的制备分别精密称取没食子酸7. 20 mg,马钱背4. 73 mg,芍药昔3. 74 mg,丹皮酚7. 12 mg,置10 mL量瓶，加入50%甲醇，超 声使溶解，定容至刻度，即得混合对照品储备液，取lniL,置50mL量瓶, 加入50%甲醇，定容至刻度，混匀，即得混合对照品溶液（每lmL含没食 子酸 0.013 0 mg,马钱昔 0.009 4 mg,芍药＜ 0. 007 2 mg,丹皮酚 0.014 2 mg）o2. 1.2供试品溶液的制备取六味地黄浓缩丸，精密称定按照《中国 药典》2010年版二部附录XC溶出度测定法第三法（小杯法），溶出介质为 250 mL经脱气处理后的0. 1 mol?L-l盐酸,釆用桨法,转速100 r?min-l, 温度（37土0.5） °C,于 10, 20, 30, 45, 60, 90, 120 min 分别取样 2mL（同时补加同温溶出介质2mL）,立即用0.45 Pni微孔滤膜过滤，作为供 试品溶液。

2. 1. 3 色谱条件 Kromasil C18 色谱柱（4. 6 mmX250 mm, 5 U m）；流 动相乙膳（A） -0.015%磷酸溶液（B）,梯度洗脱，0〜3 min, 5% A； 3~ 10 min, 5% 〜10% A； 10〜15 min, 10% A； 15—43 min, 10%〜45% A； 43〜50 min, 45%〜100% Ao 流速 1.0 mL?min-l；检测波长 238 nm；柱温35 °Co2. 1.4系统适用性试验按2. 1. 3项下色谱条件进行检测，以没食子酸 计算理论塔板数大于3 000,分离度大于1・5对照品溶液及供试品溶液 的色谱图见图lo乩混合对照品溶液；b.溶出供试品溶液；1.没食子酸；2.马 钱背；3.芍药昔；4.丹皮酚图1对照品溶液和六味地黄浓缩丸HPLC图Fig.1HPLC chromatograms of the reference solution and Liuwei Dihuang concentrated pills 2. 1. 5线性关系考察精密吸取混合对 照品溶液0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 10 uL,按2.1.3项下色谱条件分别进样 测定。

以峰面积对进样量(ug)进行冋归，得线性方程，没食子酸： Y二740.4X+5.1 (r=0. 999 9),马钱昔:Y二 1 698. 5X+3. 9 (—0.999 9),芍 药昔:Y=1 192. 5X-2. 0 (r二0.999 9),丹皮酚：Y二 1 709. 3X+5. 2 (r=0. 999 9)o结果表明没食子酸、马钱苜、芍药苜、丹皮酚分别在0.006 5-0. 130 M g, 0.004 7 〜0. 094 Pg, 0. 003 6 〜0. 072 u g, 0. 007 1 〜0.142 m g 线性关系良好2. 2溶出条件的考察2.2. 1溶出介质的选择常用的溶出介质有蒸憾水、0.1 mol?L-l盐酸 溶液及不同pH的缓冲液等，木实验比较了浓缩丸以蒸他水和0.1 mol?L-l 盐酸作为溶出介质的溶出度参照《中国药典》2010年版二部附录XC溶 出度测定法，分别以900 mL脱气蒸憾水及0.1 mol?L-l盐酸为溶出介质,温度(37±0・5) °C,转速100 r?min-lo取六味地黄浓缩丸6丸，称定 质量，分别投入6个溶出杯内，立即启动旋转并开始计时，于10, 15, 30, 45, 60, 90, 120 min各取样2 mL （同时补加同温溶岀介质2 mL）,立即 用0.45 Pm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液，HPLC测定没食子 酸、马钱苛、芍药苜、丹皮酚4种主要成分含量，计算成分累积溶出率, 绘制累积溶出曲线，结果见图2。

以0.1 mol?L-1盐酸为溶出介质，溶出 速度较快，4种成分接近完全溶出，.1 0. 1 mol?L-l的盐酸溶液更接近于 人体胃部环境，因此选择0. 1 mol?L-l盐酸作为溶出介质但在此条件下, 由于溶出体积大，刚开始时溶出少，药液浓度较低，峰面积较小，积分不 准，导致数据波动较人，因此,溶出介质的体积有待进一步考察2. 2. 2溶出介质体积的选择在优选出溶出介质为0. 1 mol?L-l盐酸的 基础上，比较六味地黄浓缩丸在不同体积溶出介质中溶出的差异，根据溶 出杯的大小考察了 2种体积250, 900 mLo转速、溶出介质温度条件等其 他条件同2. 2.1项，测定没食了酸、马钱昔、芍药昔、丹皮酚4种主要成 分含量，计算成分累积溶出率，绘制累积溶出曲线，结果见图30 4种成 分在250, 900 mL的0. 1 mol?L-l盐酸累积溶出差别不大且都能完全溶岀, 250汕溶出介质体积小，药液浓度较大，测得峰面积较大，计算结果更准 确，因此，确定溶出介质体积为250 mLo2. 2. 3溶出方法的选择以250 mL 0. 1 mol?L-l盐酸为溶出介质,比较 桨法、篮法所测溶出度的差别。

根据《国家药品标准工作手册》对溶出度 的检杳与指导原则，桨法以50 r?min-l为主，其最能体现人体正常肠胃 蠕动状态，故选用50 r?min-l作为测定转速，其他条件同2.2. 1项测定没食子酸、马钱苛、芍药廿、丹皮酚4种主要成分含量，计算成分累积 溶出率，绘制累积溶出曲线，结果见图40 4种主要成分桨法溶出速度和 累积溶出度均大于转篮法，故选择桨法《中国药典》2010年版一部规定 浓缩丸溶散时限为2 h,但桨法在50 r?min-l下2 h内未达到完全溶出， 因此，桨法转速有待进一步考察a.没食子酸；b.马钱昔；c.芍药昔；d.丹皮酚（图3〜7同）图24种成分在不同溶出介质中的累积溶出曲线Fig・2Accumulation dissolution curves of four main components in different medium图3不同体积0. 1 mol?I-l盐酸中4种成分累积溶出曲线Fig・ 3Accumulation dissolution curves of four main components in different volume of medium2. 2.4转速的选择以250 mL 0. 1 mol?L-l盐酸为溶出介质，考察转速 为50, 75, 100 r?min-l对4种成分溶出的影响,其他条件同2. 2. 1项， 测定没食子酸、马钱苛、芍药苛、丹皮酚4种成分含量，计算成分累积溶 出率，结果见图5。

按《中国药典》要求，普通制剂45 min内的溶出量达 到标示量的70%,实验结果表明，只有在转速为100 r?min~l时，4种成 分的溶出才能达到要求，故选择转速为100 r?min-lo图4不同测定方法4种成分的累积溶出曲线Fig. 4Accumulation di ssolution curves of four main components measured by different method图5不同转速下4种成分的累积溶出曲线Fig. 5Accumulation di ssolution curves of four main componentsby different rotation speed综上所述，确定最佳的溶出度测定条件为：以250 mL经脱气处理的 0. 1 mol?L-l盐酸为溶出介质，桨法，温度（37±0.5） °C,转速100 r?min-lo 2. 3同一厂家不同批号六味地黄浓缩丸溶出度的测定取3批厂家E的六味地黄浓缩丸，按2. 2项下确定的溶出度测定条件 制备供试品溶液，按2.1项下的方法测定没食子酸、马钱昔、芍药昔、丹 皮酚4种主要成分含量，计算成分累积溶出率，绘制累积溶出曲线，结果 见图6。

图6同一厂家不同批号六味地黄浓缩丸4种成分累积溶出曲线Fig・6Accumulation dissolution curves of four main compon。