毕业论文《大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验》.doc

河南农业大学本科生毕业论文（设计）题 目 鸡大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验学 院 牧医工程学院 专业班级 2011届动物医学专升本3班学生姓名 指导教师 （教授）撰写日期：2011年5月10日鸡大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验(2011届动物医学专升本3班)摘要：为了对巩义某鸡场疑似鸡大肠杆菌病的鸡群进行确诊，并为有效防治提供依据，本研究利用细菌学 检验方法对采集的典型病料进行细菌分离鉴定和细菌药敏试验通过细菌分离培养、形态学观察、生化试 验、动物试脸和血清学试脸结果表明：该鸣群中分离到的病原菌为鸡大肠杆菌动物攻毒试验结果表明： 分离的鸡大肠杆菌具有明显的致病作用，雏鸡发病率为100%(5/5),死亡率达60%(3/5)o血清学鉴定结果显 示，该分离茵血清型为O］药敏试验结果表明：该细菌对头葩曲松、头孑包哇林、阿米卡星、复方新诺明(磺 胺甲恶哇)、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、氨节西林、米诺环素和庆大霉素均敏感，对阿莫西林和阿 奇霉素为中度敏感;但对罗红霉素和四环素耐药本研究结果对准确诊断和有效防治该病提供了依据和条 件关键词：鸡；大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验Isolation, Identification and Antibiotic Sensitivity Testof Chicken Escherichia Collwang zhangfan(Class 3 of Veterinary Medicine, Graduated in 2011)Abstract： In order to make a definite diagnosis for the suspend Chicken Escherichia Coli about chicken house from Gongyi and provide a reference for effective prevention and treatment・ Tlie bacteria was isolated and identified from typical samples and antibiotic sensitivity test was also adopted・ By bacterial separate cultures, morphological obsenation, biochemical tests, animal experiment and serological tests, the pathogen of this chickens is pathogenic E.coli bacteria. The result of animal experiment showed: this Escherichia coli had obviously pathogenic; the morbidity of chicklings was 100% (5/5) and the mortality was 60%(3/5).Serological testing results indicated: the serotype of this strain was Ot. The antibiotic sensitivity test results illuminated: the sensitivity of the strain to ceftriaxone > cefazolin and other 8 kinds of drug were sensitive: and the drug sensitivity to amoxicillin and azithromycin arc intcrmcdiatc;but the strain were drug resistant to roxithromycin and achcomycin・ This research provided a scientific basis and qualification for exact diagnosis and effective prevention and treatment to Escherichia coli.Key word: Chicken.Eschenc/iia Coli, Isolation and Identification, Antibiotic Sensitivity Test鸡大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(avian pathgenicity E, coli, APEC)引起的急性或慢 性细菌性传染病，各种H龄的鸡均可发病，但雏鸡和产蛋鸡更易发病，其常与其他疾病混合 感染加重病情，该病表现不同的病型，常见的病型有急性败血症、气囊炎、腹膜炎、卵巢炎、 输卵管炎、脐炎、肉芽肿等卩役现有的研究表明，APEC抗原性复朵、血淸型多样，不同种 类之间和不同地区之间致病菌的血淸型差别很人34。

鸡大肠杆菌病-•年四季均可发生，各 品种和各年龄的鸡均可感染，尤其是雏鸡发病率最高，可达55%以上若不及时采取有效的 防治措施，便会导致大量死亡，病死率可达75% —100%；成鸡一般为慢性或隐性感染⑸ 其造成的牛长发育迟缓、牛产性能下降、饲料报酬下降、种鸡及产蛋鸡的蛋品品质下降和孵 化率的降低、死淘率及屠宰废弃率增加以及药费的增加筹,给养殖业造成了极大的经济损失 木研究对河南省巩义地区鸡群发生的疑似鸡人肠杆菌病进行了临床初步诊断，并采集典型病 料进行病原菌的分离鉴定与药敏试验，取得了理想效果，为该病的确切诊断和有效防治提供 了可靠依据现将有关情况报告如下：1材料与方法1.1试验地点、时间2011年3月1 口〜4月30 口在河南农业大学垂点开放实验室工程楼0909室进行本研 究1.2病料来源与采集对來自巩义地区的疑似鸡大肠杆菌病的病例进行临床初步诊断，并尢菌操作采集典型病 料心、月T、脾、十二指肠等1.3实验动物及分组一日龄健廉罗曼粧鸡15只，购口丁•大河遗址孵化场将雏鸡按照每组五只随机分为3 组，其中攻毒组、空白对照组和普通营养肉汤对照组各一组以上三组雏鸡均按正常饲养标 准隔离饲养，经过3天观察，各雏鸡均正常，以备攻毒试验。

1.4主要试剂1.4.1培养基和生化鉴定管制备普通肉汤培养基，营养琼脂培养基，伊红美蓝琼脂培养基， 麦康凯琼脂培养基，乳糖发酵管培养基，V-P培养基，MR培养基，以上培养基均按常规 方法冋配制其所需试剂有:蛋白腺（批号：20100702）,牛肉粉（批号：20080712）, 均由北京奥廨星生物技术有限责任公司生产；氯化钠（批号：20110104）,由天津市瑞金特 化学品有限公司生产;琼脂粉rtl XinTai in Japan生产;猪胆盐（批号：20090823）,由北 京双旋微牛物培养基制品厂牛产；乳糖（批号：20070308）,由天津市北方天医化学试剂厂 生产；中性红（批号：2-60-12-15），次甲基蓝（美兰）（批号：4-61-08-20）,均山中国公 私合营新中化学厂生产；曙红Y （伊红）（批号：F 20011209）,市中国医约（上海）化学 试剂公司生产；磷酸氢二钾（批号：20050906）,由广西汕头帀西龙化工厂生产；葡萄糖（批 号：20070910）,由中国郑州派尼化工试剂厂生产;麦芽糖（批号:19910926）,由中科院 上海生化所东风生化技术公司生产；甘露醇（批号：20081015）,由北京中联化工试剂厂生 产；蔗糖（批号：9840220）,山北京化工厂生产。

1.4.2革兰氏染液自制革兰氏染液，按文献要求配制⑹1.4.3药敏纸片 阿莫西林（10pg/片，批号：100301）,氨节西 林（10卩g/片，批号：1009211）, 头抱哋林（30隅/片，批号：1009171）,头砲曲松（30pg/片,批号：1011031）,罗红霉素（15pg/ 片，批号：100531）,庆大霉素（10pg/片，批号：1001201）,阿米卡星（30卩妙片，批号： 1010221）,米诺环素（30卩妙片，批号：1010132），阿奇霉素（15gg/片，批号：101213）, 磺胺甲噁啤（23.75/1.25|ig/片,批号：1009031）,四环素（30yg/片,批号:1008311）, 环丙沙星（5憾/片，批号：100901）,诺氟沙星（10憾/片，批号：1009252）和氧氟沙星 （5山g/片，批号:1009022）,均由北京天坛药物生物技术开发公司生产以上药敏纸片均 购自河南省牛物所1.4.4 大肠杆菌诊断血清共 26 种 O. （5120*,批号 20090416）, 02 （10240*，批号 200901）, 05 （2560*,批号 200605）, O8 （2560*,批号 200901）, O9 （2560*,批号 200901）, OH （5120*,批号 200904）, Ou （640*扌比号 200211）, 0!5 （5120*,批号 200709）, O18 （5120*,J比号 200408）, 0,9 （2560*,批号 200709）, O20 （2560*,批号 200407）, O2| （5120*,批号 200901）, O24 （640*,批号 200709）, 026（2560*,批号 200709）, O35 （5120*,）比号 200901）, 036（2560*,批号 200505）, O50 （2560*,批号 200505）, O54 （1280*,批号 200709）, O74 （1280*,批号 200211）, 5 （1280*,批号 200612）, 088 （1280*,批号 200901）, Om （10240*,批号 200605）, O】 （640*,批号 200104）, Oi4i （2560*,批号 200901）, Oi47（1280*,批号 20080327）, 0|57 （2560*J比号 200901）,以上血清 均购口中国兽医药品监察所，均在有效期内。

用时按照使川说明书要求进行稀释，4C保存 备用1.5主要仪器.超净工作台（型号：SW-CJ-IC）,中口合资苏净集团安泰公司制造；高压蒸馅灭菌器（型号：LDZX-30KBS），上海申安哭疗器械厂制造；显微镜（型号：AC220VIN）,重庆 光电仪器总公司制造；恒温培养箱（型号：PYX-DHS-50X65-BS-II）,上海跃进医疗器械 厂制造；电子天平（型号：11636920） , Made by Sartorius AG制造等1.6分离鉴定方法1.6.1细菌分离培养川接种环无菌操作从病料中挑取病原菌，并接种于普通营养肉汤中进行 增菌培养，然后分别在普通营养琼脂平板和伊红美蓝琼脂平板划线，于37C培养24ho1.6.2抹片染色镜检 挑取分离到的可疑单个菌落进行抹片、革兰氏染色和油镜观察细菌形态 排列及染色特性，镜检后将可疑单-个菌落的剩余部分接于普通肉汤中做纯培养染色方法按 照文献要求进行切1.6.3生化试验参照文献血引进行各项牛化试验将分离菌株分别接种于乳糖发酵管培养基、 V-P培养基，MR培养基中，37C培养3d,观察并记录生化反应结果1.6.4动物试验 从分离的鸡大肠杆菌株，采用平板表血散布法进行活菌计数后，吸取肉汤纯 培养物（平均浓度为30.7亿个/mL活菌）分别接种于3日龄雏鸡进行攻毒，采用腹腔注射 0.2mUR；用同样的方法给肉汤（介质）对照组雏鸡注射普通营养肉汤0.2mL/R；空白对 照组不做任何处理。

接种后隔离饲养，观察每组发病和死亡情况，记录结果，剖检病变，并 冋收接种细菌1.6.5血清学试验首先制备凝集抗原：将分离鉴定为大肠杆菌的菌株纯培养物，。