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新型冠状病毒核酸检测方法在临床中的应用 韦蓉麦Summary：现阶段随着新冠病毒的不断发展，对其进行迅速且准确的检测是保证疫情防控效果的关键随着对病毒的不断了解以及在临床治疗当中的不断积累，对新冠病毒的检测方法也在不断的发展和进步基于此，本文针对现阶段几种新型冠状病毒核酸检测方法以及临床应用进行概述Key：新型冠状病毒;核酸检测;临床应用新型冠状病毒（ SARS -CoV-2）是一种单股正链RNA病毒，其主要传播途径为飞沫以及接触传染，现阶段已经成为在全球范围内广泛流行的病毒，由该病毒引起的新型冠状病毒肺炎（COVID-19）对人体的呼吸系统带来非常严重的影响，并且会威胁到患者的生命[1]进行核酸检测使所使用的标本主要包括鼻、咽拭子等上呼吸道标本和肺泡灌洗液等下呼吸道标本，还可以使用一些血液，体液，粪便标等本核酸检测具有较高的诊断准确率，可以为临床医生提供科学的诊断依据[2]一、荧光PCR法荧光PCR （ real-time polymerase chain reaction， RT-PCR ）使用特异性引物和TaqMan探针，对整个检查的过程进行实时监测，可以做到对新冠病毒靶基因的定性检测。
这种检查方法具有非常高的灵敏度，并且重复性非常好，目前实验室新冠核酸检测都使用该检测方法不过该方法检测时间较长实验室确认阳性病例需满足以下两个条件中的一个：（1）同一份标本中新型冠状病毒2个靶标（ORFlab、N）实时荧光RT-PCR检测结果均为阳性如果出现单个靶标阳性的检测结果，则需要重新采样，重新检测如果仍然为单靶标阳性，判定为阳性2）两种标本荧光RT-PCR同时出现单靶标阳性，或同种类型标本两次采样检测中均出现单个靶标阳性的检测结果，可判定为阳性 核酸检测结果阴性不能排除新型冠状病毒感染，需要排除可能产生假阴性的因素，包括：样本质量差，比如口咽等部位的呼吸道样本;样本收集的过早或过晚;没有正确的保存、运输和处理样本;技术本身存在的原因，如病毒变异、PCR抑制等二、等温扩增法该方法也叫作实时荧光核酸等温扩增技术（Simultaneous Amplification and Testing， SAT），是使用 M-MLV 反转录酶、T7 RNA 聚合酶和优化探针进行RNA病毒的检测该检测方法具有较高的特异性以及灵敏度，并且其反应也很稳定三、环介导的等温扩增环介导的等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification， LAMP）通过特异位点设计的4条引物以及链置换DNA聚合酶进行扩增，现将该检测技术进行优化，在其中增加两条环引物促使目的基因扩增速度加快，进而提高扩增效率。
该技术具有体积小，检测快的特点，但是这种方式的重复性以及通量都不太理想[4]四、双扩增法RNA恒温扩增后经过多生物素信号放大，最后通过化学发光检测这种方式具有通量高，效率高的特点五、RNA恒温扩增-金探针层析法RNA恒温扩增后与特异探针杂交，最后通过层析显色判定结果该方法可以直接裂解样本，检测效率比较高，并且操作方法也很简单，对设备没有特别高的要求六、RNA 捕获探针法特异靶标捕获法磁珠提取技术和实时荧光等温扩增检测技术相结合该方法可以在同一反應管中同时完成核酸提取及扩增，并可以进行连续并行检测[5]七、杂交捕获免疫荧光法这是一种杂交捕获和免疫荧光相结合的技术，也就是HC-IFA 技术，利用探针捕获靶基因后采用免疫荧光技术来判断结果该检查方法所使用的设备体积比较小，并且对单个样本进行检测的用时会更短一些八、联合探针锚定聚合测序法配合测序系统使用的全基因组测序技术该检测方法具有较高的准确率，但是检测成本比较高，且时间也较长，并不适合进行临床检测九、数字 PCR 法基于数字 PCR 系统设计优化相应的引物、探针、对照、内参基因等来检测新冠病毒核酸这种方法比荧光PCR技术的灵敏度要高，并且其可靠性和重复性都比较高，但是该检查方法所使用的时间更长，并且成本比较高。
总结，核酸检测作为新冠病毒检测的“金标准”，对新冠肺炎的判断具有非常重要的意义，在检测的过程中选择适当的方式进行有效的检查可以提高疾病的检出率，对疫情法防控具有深远的临床意义Reference：[1]杨思园，王涵，于凤婷，等. 新型冠状病毒核酸检测方法在临床中的应用[J]. 国际病毒学杂志，2020，27（5）：425-428.[2]代芳芳，娄金丽，于艳华，等. 新型冠状病毒不同核酸检测方法在临床应用中的评价[J]. 标记免疫分析与临床，2020，27（11）：1973-1975.[3]Lu R， Zhao X， Li J， et al. Genomic characterisation and epidemiology of 2019 novel coronavirus： implications for virus origins and receptor binding[J]. Lancet， 2020， 395（10224）： 565- 574.[4]Chang CK， Lo SC， Wang YS， et al. Recent insights into the development of therapeutics against coronavirus diseases by targeting N protein[J]. Drug Discov Today， 2016， 21（4）： 562-572.[5]陈伟，吴成就，彭丽，等. 新型冠状病毒核酸和抗体联合检测的应用价值[J]. 临床检验杂志，2020，38（6）：405-407.3023500589280 -全文完-。
