实验一油镜的使用和细菌形态观察及革兰氏染色.doc

微生物学实验指导老师:实验要求・坚持课前预习・不迟到，不早退，更不能无故缺课；・严格按正确规范实验方法进行实验，作好记录;・保持实验室整洁•注意安全・事实求是地、独立地写好实验报告实验报告・姓名、班级和学号・实验题目・实验原理（略写）・实验操作（（略写）•实验结果-画图-文字描述・分析和讨论・思考题实验一、显微镜油镜的使用和细菌形态的观察、细菌的革兰氏染色教学目标或要求:※巩固和掌握显微镜油镜的正确使用;※学习细菌制片和单染色技术；※对人体微生物染色检查，初步建立无菌操 作的概念※学习细菌的革兰氏染色方法显微镜油镜的使用•油镜头的识别和重要参数•油镜物镜的工作原理•油镜的使用方法和注意事项油镜头的识别和重要参数工作距离/刚—100/1.25160/0.17蓟值孔径放大倍数40/0.65160/0.17油镜物镜的工作原理・使用油质作为玻片与接物镜 之间的介质——油浸系・可以增加显微镜的放大倍数・可以增加视野的照明度・可以增大显微镜的分辨率d=Wa2Vi4 = wXsinB油镜的使用方法和注意事项1、 用低倍镜对光最大光圈2、 低倍镜观察（寻找观察目标）适当缩小光圈1=INi3、 高倍镜观察（选取理想的观察目标）。

4、 油镜观察：高倍镜观察后•上升镜筒-油镜转至正下方，在 载玻片上加一小滴油-小心地下降镜筒使镜头浸在油里-用粗 螺旋将镜筒缓慢上升，寻找目标（物象）用细螺旋调节，使 物象清晰-观察记录最大光圈5、 观察完毕上升镜筒，转动物镜转换器，使油镜物镜偏位 用干净擦镜纸擦去镜头上的油迹，再取一张擦镜纸醮上二甲 苯擦去镜头上残留的香柏油，最后再用一张干净的擦镜纸擦 去残留在镜头上的二甲苯6、 将显微镜各部分还原，放回箱中细菌的制片与染色巴单染色 巴复染色染料多数染料都是中性有机盐据着色基的不同可分为 以下类型：①碱性染料(basic dye)—带正电染料其阳离子部分为发色基团，可与细胞中带负电的组分结合如结晶紫 沙黄，甲基蓝，碱性复红等②酸性染料(Acid dye)—带负电染料其阴离子部分为发色基团，可与细胞中带正电的组分结合如刚果红、 酸性复红等③脂溶性染料一如Sudan black细菌的单染色涂片干燥固定水洗、吸干镜检染色1〜2min革兰氏染色法(Gram Stain)由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立结果：革兰氏染色法•操作步骤涂片——干燥——固定 结晶紫lmin——水洗V95%乙醇脱色约10〜20s水洗I-KI lmin水洗▼沙黄或石炭酸复红lmin—水洗干燥一镜检• p45革兰氏染色注意事项实验内容1、用美蓝对苏云金芽抱杆菌进行单染色,在显微镜油镜下观察形态;2、用混合涂片的方法对大肠杆菌、苏云金芽抱杆菌进行革兰氏染色3、自选材料：用牙签挑取牙垢观察实验报告绘出革兰氏染色后大肠杆菌和苏云金芽抱杆菌的形态图并说明染色结果 •思考题：你认为那些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？如何使你的染色结果可信?。