RNA提取中基因组DNA残留解决方案.doc

解决RNA提取时候有基因组 DNA残留的问题第一种方法：传统的大家都知道的 RNase free的DNA酶消化的方法我就不多说了，我主要说说（DNA酶柱上柱上消化），这个方法简单些提取样品：葡萄叶片提取试剂盒： RN09 EASYspin植物RNA提取试剂盒J 基因组DNA残留J 28S RNA电泳图A电泳图B电泳图C图片说明：电泳图 A是未使用DNA酶消化直接提取得到的 RNA , B是洗脱下来RNA后，用DNA酶消化 的，可见明显基因组 DNA电泳图C是柱上消化之后的，未见基因组 DNA残留电泳图 C marker为 DL2000，最大条带是2kb客户柱上DNA酶消化方法：A: DNase I 工作液的配制： 40 pl RNase free DNase I （MBI fermentas） 1U/ 4 力口 35 pl 10 x DNase I Buffer轻柔混匀配成工作液体如果 DNA残留少，可以减少 DNA酶用量B:操作步骤：1 •前面按照正常步骤操作，在加入去蛋白液 RW步骤前按照以下步骤操作2. 向吸附柱RA中加入350 4去蛋白液RW1 12,000 rpm离心30-60秒，弃废液，将吸附柱放回收集管中。

3 .向吸附柱RA中央加入75 4的DNase I工作液，室温放置15分钟 4.向吸附柱RA中加入350 4去蛋白液RW1 12,000 rpm离心30-60秒，弃废液，将吸附柱放回收集管中5.接漂洗液RW步骤等后续步骤以Qiagen RNase free DNase set 举例（qiagen 货号：79254）A:DNase I储存液的配制：将DNase I干粉（1500 Kunitz 单位）溶解在550plRNase -free 水中，轻柔混匀，分装后 -20 C贮存（可保存9个月）注意从-20 'C融化后的DNase I储存液保存于4'C（可保存6周），不要再次冻存B: DNase I工作液的配制：取10 4 DNase I储存液加70 4 RDD（产品中附带）溶液，轻柔混匀操作步骤:1 •前面按照正常步骤操作，在加入去蛋白液 RW步骤前按照以下步骤操作2. 向吸附柱RA中加入350山去蛋白液RW1 12,000 rpm离心30-60秒，弃废液，将吸附柱放回收集管中3. 向吸附柱RA中央加入80 pl的DNase I工作液，室温放置15分钟4. 向吸附柱RA中加入350 p去蛋白液RW1 12,000 rpm离心30-60秒，弃废液，将吸附柱放回收集管中。

5. 接漂洗液RW步骤等后续步骤第二种方法：独家产品 RN38 EASYspin Plus 植物RNA提取试剂盒（RN09的基础上添加基因组清除柱子，提取过程种直接去除基因组 DNA残留）另外一个选择就是尝试使用我们独家产品 RN38使用基因组清除柱子，提取过程种直接清除掉基因组直接可以得到不残留基因组 DNA的 RNA不需要DNA酶消化，直接可以做荧光定量 PCR已经再多种植物上面获得成功但是注意：虽然成功例子很多了，但是植物千变万化，我们也不是 100%成功，部分样品可能不成功或者降低产量植物样品种类：短柄二穗草 1是叶子，2是根试剂盒： 使用RN38 EASYspin Plus 植物RNA提取试剂盒图片来源：广州中山大学1： Bd Ck S1 （第一次洗脱〉 2： BdCkRl （第一次洗脱） 3： BdCkSl （第二次洗脱） 4： BdCkRl〔第二次洗脱） M： DS 2000 marker图片说明：试剂盒提取草坪草茎干 RNA电泳图左为使用 RN09EASYspin植物RNA提取试剂盒结果,右为使用RN38 EASYspin Plus植物RNA提取试剂盒结果 可以看出，使用 RN09该种类植物依然有* DNA残留，但是使用RN38该种类植物残留DNA成功被消除。