温朋飞毕业论文答辩6月14日.ppt

猪传染性胃肠炎病毒S基因的 扩增及序列测定,姓 名： 温朋飞 班 级： 动物医学092班 指导教师： 何雷,1.研究背景 2.材料和方法 3.结果 4.结论 5.致谢,主要内容,1.研究背景,猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)是猪的一种重要的传染病病毒，给养猪业造成巨大经济损失近几年来，随着分子生物学技术的广泛应用．在TGEV的各个方面的研究都取得了长足进展．积累了丰富的资料有效的疫苗接种是目前大多数国家控制本病流行的重要措施在过去的十年中，人们重点构建基因工程疫苗，但效果不一灭活苗或弱毒活苗虽然仍显示着良好的优势，但一种安全、有效新型疫苗的研制已成为必然趋势由于S蛋白是TGEV的主要抗原蛋白，近年来利用基因重组技术表达S蛋白从而在动物体内产生免疫抗体，成为TGEV疫苗研究的热点S基因的特点： 1、S基因全长约为4300bp，由其合成的S蛋白为1447个氨基酸 2、S蛋白共有11个抗原决定簇，其中5个是与中和作用相关的重要抗原决定簇 3、S蛋白携带主要的B 淋巴细胞抗原决定簇，是惟一能诱导产生中和抗体和提供免疫保护作用的结构蛋白 4、S蛋白具有细胞膜融合作用，使病毒核蛋白进入细胞浆 。

2、材料和方法,◆细胞培养 本实验采用的细胞是ST细胞 （1）细胞的复苏 （2）细胞的传代 ◆病毒接种及细胞病变观察 ◆病毒RNA的提取 ◆目的基因cDNA的合成 ◆目的基因的PCR扩增 ◆目的基因的序列测定 ◆建立S基因的基因进化树，并进行同源性分析3、结果,病毒引起的细胞病变 ：,正常的ST细胞对照,接毒36h后的ST细胞,RT-PCR的结果： 利用设计的一对引物，通过两步法RT-PCR扩增出基因通过凝胶电泳分析（如下图所示），扩增出的基因约为4300bp，说明已成功扩增出目的基因测序结果： 测序结果显示，TGEV S基因全长为4344bp S基因的基因进化树： 从GenBank中选出5种不同地方分离株的S基因核苷酸序列，采用DNAstar分析软件进行建树分析，绘制出S基因系统树S基因的同源性分析结果： 结果显示，TH-98株与美国的PUR46-MAD、日本的TOY56-165、韩国的KT2, KT3、河南的HN2002、陕西的TSX、黑龙江的HR、EP2316960、WO2007062851株的核苷酸同源性分别为99.6%、98.1%、98.2%、98.3%、97.9%、95.7%、99.7%、99.4%、99.4%。

4、结论,1.运用基本的病毒鉴定方法和RT-PCR技术成功地鉴定出猪传染性胃肠炎病毒 2. 测序结果表明，TGEV TH-98株的S基因克隆成功，并进行了序列分析同源性分析结果表明，不同来源的毒株，S基因核苷酸的同源性较高,致 谢,◆大学本科的学习生活即将结束在此，我要感谢所有曾经教导过我的老师和关心过我的同学，他们在我成长过程中给予了我很大的帮助本文能够顺利完成，要特别感谢我的导师何雷老师，感谢各位学院的老师的关心和帮助 ◆最后向所有关心和帮助过我的人表示真心的感谢感谢各位老师莅临指导！,谢谢观赏！,。