糖苷演示文稿3.ppt

单击此处编辑母版标题样式,,单击此处编辑母版文本样式,,第二级,,第三级,,第四级,,第五级,,*,,*,四、苷分子中苷元和糖、糖和糖之间,,连接位置的确定,,（一）苷元和糖之间连接位置的确定,,1、通过化学降解或酶解所得产物,,※,2、通过NMR谱-尤,13,C-NMR：,,判断端基碳原子-苷化位移规律（GS）,,,①苷元羟基的成苷碳原子（α碳）,,与其相邻的碳原子（β碳）的信号发生位移，,,,,，,1,,而其它距苷键较远的碳原子的信号几乎不变；,,同时苷分子上的糖部分，其端基碳原子的信号与游离单糖端基碳信号比较，也发生了位移（苷化位移规律-GS）,,②苷元羟基性质不同，位移方向不同,,＊,醇类羟基：,,,,苷元α碳低场移(4-10ppm),,β碳高场移(-0.9—4.6ppm),2,,＊酚类羟基：,,苷元α碳高场移,,β碳低场移,,比较苷和苷元碳谱-找出苷元与糖连接处,,,3,,3、近年2D-NMR谱中HMBC谱已广泛应用,,可确定糖和苷元的连接位置,,（二）糖与糖之间连接位置的确定,,化学法及光谱NMR法,,4,,1、化学法：甲基化→甲醇解,,,5,,＊苷的甲基化反应常用的方法四种：,,,经典两种,,①Haworth法：试剂，较弱、需多次反,,应、,,②Purdie法：试剂，不能用于还原糖,,半微量现代法两种,,①kuhn改良法：试剂，反应较缓慢,,★ ②Hakomari法（箱守法）：,试剂，,,,6,,,室温连续、反应迅速完全、无需,,特殊装置。

最常用2、NMR法：,,①应用碳谱的苷化位移规律,,如:苷中两单糖的连接位置,可将该糖的碳,,谱数据与单糖比较-内端糖连糖的碳原子,,会向低场移4～7,其相邻两碳略高移1～4,,②应用HMBC谱也十分有效而常用.,,,7,,五、苷中糖和糖之间连接顺序的确定,,-部分水解法和波谱解析法,,（一）部分水解法,,1、缓和酸水解,,,试剂-低浓度无机强酸或中强度的,,有机酸,8,,2、全甲基化→甲醇解,,3、乙酰解,,（二）波谱分析,,1、MS法,,,EI-MS中：全乙酰化、全三甲基硅,,醚化物等的MS谱中，有各种特征,,性的糖基离子峰，全乙酰化的单糖,,及低聚糖的特征性的碎片离子峰，,,可证明糖链及末端糖9,,,FD-MS，或FAB-MS谱中，有各种脱去不同程度糖基的碎片离子峰，证明糖与糖的连接顺序例如：,人参皂苷Rb2,(P67),,10,,2、NMR法,,①,13,C-NMR,,② 碳原子的自旋-驰豫时间（T,1,）的,,大小苷中糖的NT,1,随糖链距离的增加而,,增加,,11,,六、 苷键构型的确定,,（一）利用酶水解,,,麦芽糖酶 → α-苷键,,苦杏仁苷酶 → β-苷键,,（二）利用Klyne经验公式进行计算,,计算公式,：(表3-3糖甲苷分子比旋数值）,,,,,12,,实例：,豆甾醇-D-葡萄糖,的苷键构型,,豆甾醇-D-葡萄糖的,,[α],D,,(,旋光度)=-47.56° M=574,,,,[M],D,苷元=,[α]D =-50.98,13,,△,[M],D,=[M],D,苷,-[M],D,苷元,,=-273.03-(-210.04°)=,-62.99,,查表可知:,,α-D-葡萄糖甲苷的,[M],D,α,=+308.6°,,β-D-葡萄糖甲苷的,[M],D,β,,=-66.4°,,-62.99与-66.4°接近,,∴可确定其苷键为,β构型,14,,（三）利用NMR谱确定苷键构型,,1、,1,H-NMR（PMR）法：,,组成苷的糖上端基质子的偶合常数判,,断苷键的构型。

可直接对苷进行测定,,糖上端基质子与其它质子相比较,较低场,,如葡萄糖苷(糖为优势构象)的透视式和,,部分纽曼式中,,15,,2、,13,C-NMR法（CMR）,,,利用,δ、J,值推测苷键构型,,① 糖与苷元连接后，糖中端基碳原子,,的,δ,值明显增大，其它变化不大；,,某些α-和β-构型的甲苷中，,,端基糖碳原子,δ,值常相差很大(下图),,,16,,表3-4几个α-和β-甲基吡喃糖端基碳的,δ,值（溶剂D,2,O）-,大多相差4,构,,型,,甲基吡喃糖苷,,,,D-木糖,D-葡萄糖,L-阿拉伯糖,α,100.6,100.6,105.1,β,105.1,104.6,101.1,17,,②利用C谱的,J,值推测苷键构型,,(表3-5),,几种糖甲苷α和β构型的JC,1,-H,1,值,,构,,型,,甲 苷,,,,D-葡萄糖,D-甘露糖,L-鼠李糖,α,170,166,168,β,159,156,158,18,,3、二维NMR法,,利用NOE相关峰即可确定苷键的构型,19,,。