氧化铝柱层析精制三七总皂苷工艺研究.docx

氧化铝柱层析精制三七总皂苷工艺研究 陈立江段洪云张胜郝爱军刘洋摘要目标研究氧化铝柱层析精制三七总皂苷工艺方法采取HPLC法测定三七总皂苷的含量，考察洗脱剂的浓度、洗脱剂的用量和吸附剂用量对工艺的影响结果确定最好精制工艺为：洗脱剂的浓度为55%乙醇，洗脱剂的用量为10倍吸附剂的用量，吸附剂用量为5倍三七总皂苷的用量结论经过氧化铝柱层析精制后，三七总皂苷的收率大于70%，含量大于80%，说明此精制工艺是可行的关键词三七总皂苷氧化铝高效液相法三七为五加科植物三七Panaxnotoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根及根茎[1]，三七总皂苷是中药三七的有效部位，关键含有三七皂苷R1，人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1等达玛烷型三萜皂苷类化合物[2]当代药理研究证实：三七总皂苷含有多方面的生物活性，关键表现在扩张冠状动脉、增加冠脉血流量、改进心肌代谢、抗自由基、抗凝、钙拮抗等方面[3]现在三七总皂苷的富集和纯化通常采取大孔吸附树脂来完成[4]，纯化后三七总皂苷的含量达成60%以上为了提升药品的安全性和有效性，提升其成药原料药的纯度本试验拟采取氧化铝柱层析对三七总皂苷的纯化物进行精制[5]，并对工艺进行了考察，为深入的制剂学研究打下基础。

1仪器和试药1.1仪器和设备RE5299旋转蒸器（上海亚荣生化仪器厂）；DKS22型电热恒温水浴锅（上海精宏试验设备有限企业）；JA1003型电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限企业）；电热鼓风干燥箱（上海博迅实业有限医疗设备厂）；美国Tsp高效液相色谱仪；TspP2021泵、TspUV1000UVVIS检测器；TspPC1000色谱工作站；色谱柱：ODSC18柱（250×4.6mm,5μm,大连依利特科学仪器有限企业）1.2材料和试剂三七总皂苷提取物（云南玉溪天然药品有限企业）；三七总皂苷对照品：三七皂苷R1（0745202108）、人参皂苷Rg1（0703202115）、人参皂苷Rb1（0704202115）对照品（药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯，水为二次蒸馏水2方法和结果2.1色谱条件色谱柱：ODSC18柱（250×4.6mm,5μm）；流动相：A为乙腈，B为水；流速：1.0mL·min1；采取梯度洗脱法，0～8分钟（26:74），8:10～40:40分钟（34:66）；检测波长203nm；柱温：30℃；进样量20μL2.2线性范围关系的考察分别精密称取三七总皂苷对照品三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1各约6.0mg、2.5mg和2.5mg置25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸收此溶液3、4、5、6、7mL置50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。

精密吸收上述对照品溶液各注入液相色谱仪，统计色谱图，量取峰面积，以峰面积(A)对进样量(μg)进行线性回归，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1回归方程分别为：A=327127.8W－681.2（r=0.9991）；A=406964.1W+787.9（r=0.9991）；A=262563.9W－5498.7（r=0.9996），三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂Rb1分别在进样量0.2981～0.6956μg、1.2768～2.9792μg和1.1539～2.6925μg范围内时，峰面积和进样量含有良好的线性关系2.3精密度试验取含量测定项下对照品溶液，连续进样六次，统计色谱图，量取峰面积，计算平均值及相对标准偏差，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的峰面积平均值分别为151792、802039.7和476940.7，RSD分别为0.81%、1.73%和1.62%，结果表明，本方法精密度良好2.4供试品溶液的制备取上柱流出液浓缩至干，精密称定干粉一定量，用甲醇溶解并转溶至10mL量瓶，滤过精密量取续滤液1mL置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得2.5工艺参数的考察2.5.1洗脱剂浓度的考察取三七总皂苷原料3份，每份10g。

分别用50%乙醇适量溶解，分别转移至氧化铝柱（中性氧化铝50g，内径4cm，干法装柱），然后分别用35%、55%和75%乙醇洗脱，分别搜集洗脱液，减压回收乙醇，真空干燥，按HPLC法测定总皂苷含量和收率从以上结果可知，当用75%乙醇洗脱时，总皂苷含量最高，但收率太低，而用55%乙醇洗脱时即使收率比用35%乙醇洗脱时略低，但总皂苷含量高6%左右，所以，洗脱剂确定为55%乙醇2.5.2洗脱剂用量考察取三七总皂苷原料3份，每份10g分别用50%乙醇适量溶解，分别转移至氧化铝柱（中性氧化铝50g，内径4cm，干法装柱），然后用55%乙醇洗脱，分别搜集洗脱液，减压回收乙醇，真空干燥，按HPLC法测定总苷含量和收率　　 从以上结果可知，伴随洗脱剂用量的增加，得到总皂苷的含量逐步下降，考虑收率，以10倍量55%的乙醇洗脱比较适宜2.5.3吸附剂用量考察取三七总皂苷原料3份，每份10g分别用50%乙醇适量溶解，分别转移至氧化铝柱（柱1：中性氧化铝25g，内径2cm；柱2：中性氧化铝50g，内径4cm；柱3：中性氧化铝100g，内径5cm），然后用10倍量55%乙醇洗脱，分别搜集洗脱液，减压回收乙醇，真空干燥，按HPLC法测定总苷含量和收率。

从以上结果可知，伴随吸附剂氧化铝用量的增加，收率逐步降低，而含量呈上升趋势，氧化铝用量为5倍和10倍相比较，前者即使总皂苷含量略低，但已经大于80%，而且收率较高，所以吸附剂氧化铝的用量确定为5倍2.6中试验证结果取三七总皂苷原料3份，精密称取质量分别为44.4g，42.8g和47.9g，分别用50%乙醇适量溶解，分别转移至氧化铝柱，中性氧化铝用量为三七总皂苷的5倍，然后用10倍量55%乙醇洗脱，分别搜集洗脱液，在60℃以下减压回收乙醇，真空干燥，按HPLC测定方法，分别测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量从以上三批中试结果可知，按选定的精制工艺能够制备总皂苷含量大于80%的三七总皂苷原料，且收率大于70%，说明此精制工艺是可行的3结论3.1氧化铝柱层析精制三七总皂苷的最好工艺为：洗脱剂的浓度为55%乙醇，洗脱剂的用量为10倍量吸附剂的用量，吸附剂用量为5倍三七总皂苷的用量3.2本试验提出了一个新的三七总皂苷的精制方法—氧化铝柱层析，含有分离效果好、工艺简单、投资少、处理量较大等优点有文件报道[6]，大孔吸附树脂法含有选择性好、吸附容量大、安全无毒、再生轻易等优点，但因为应用时间相对较短，还存在着部分问题，所以，在纯化中药有效成份的工艺过程中，两种纯化方法能够相互结合，取长补短，共同促进中药制剂的不停发展。

参考文件[1]中国药典委员会.中国药典2021年版二部[S].北京：化学工业出版社，2021:9.[2]甘烦远.三七的化学成份研究概况[J].药学杂志，1992，27(3):128.[3]ChanP,TomlinsonB.AntioxidantefectsofChinesetraditionalmedicine:focusontrilinoleinisolatedfromtheChineseherbsanchi(Panaxpseudoginseng)[J].JClinPharmacol,2021,40(5):457.[4]孙建平，崔淑霞，等.大孔吸附树脂富集三七总皂苷的工艺研究[J].黑龙江医药，2021，3(20):232233.[5]柳叶.氧化铝柱层析分离纯化磷脂的工艺优化[D].浙江大学硕士学位论文.杭州：浙江大学，2021.[6]胡军，周跃华，等.大孔吸附树脂在中药成份精制纯化中的应用[J].中成药，2021，24(2):127130.　　。