盐提法提取波纹巴非蛤全脏器中糖蛋白的工艺条件研究.docx

盐提法提取波纹巴非蛤全脏器中糖蛋白的工艺条件研究 周国杰 黄晓玲 范秀萍摘要对波纹巴非蛤全脏器中的糖蛋白的分离提取条件进行研究,结果表明:以0.5moL/L的NaCl溶液为浸提液,料液比为1∶12,75℃水浴浸提90min,提取液经透析浓缩,再以60%乙醇终浓度沉淀,得到糖蛋白粗品,其得率为1.64%,总糖与可溶性蛋白含量分别为38.3%和17.1%关键词波纹巴非蛤;糖蛋白;分离提取;工艺条件TS254.1;TQ936.22+3A 1007-5739(2009)21-0260-02糖蛋白(glycoprotein)是一类由糖类与多肽或蛋白质以共价键连接而形成的结合蛋白,是生物体内重要的一类大分子,种类繁多,分布广泛,具有多种重要功能目前已有报道证实从海洋软体动物海兔、虾夷扇贝、管角螺中提取的糖蛋白有明显的抗肿瘤、增强免疫活性自由基是人体生命活动中生物化学反应的中间产物,许多疾病的发生、发展与自由基对组织的损伤有密切关系,自由基可加快机体的衰老过程,可诱发癌症、心血管疾病等该研究采用盐提法提取波纹巴非蛤(Paphia undulata)全脏器中的糖蛋白,对其工艺条件进行初步探讨,以供参考。

1材料与方法1.1试验材料波纹巴非蛤采自湛江市东风市场,去壳后,于-18℃冷冻备用1.2试验方法1.2.1糖蛋白分离提取方法原料→匀浆→加浸提液→浸提→冷却→纱布过滤→滤液浓缩至体积的1/4→醇沉→离心→沉淀物用乙醇、丙酮交替洗涤3次→恒温干燥→糖蛋白粗品1.2.2检测方法总糖含量测定采用苯酚-硫酸法;蛋白含量测定采用考马斯亮蓝法2结果与分析2.1不同浸提液浓度对糖蛋白提取效果的影响分别以蒸馏水(0moL/L NaCl)、0.5moL/L NaCl、1.0moL/L NaCl、1.5 moL/L NaCl等4种溶液作为浸提剂,料液比为1∶10,80℃下浸提60min检测浸提液中的总糖含量与总蛋白含量,结果如图1所示4种浸提剂提取液中总糖含量明显高于蛋白含量,蛋白含量为0moL/L NaCl>0.5moL/L NaCl>1.0moL/L NaCl>1.5moL/L NaCl,总糖含量为0.5moL/L NaCl>0moL/L NaCl>1.5 moL/L NaCl >1.0moL/L NaCl,其中以0.5moL/L NaCl溶液的浸提液中总糖与蛋白含量均为最高,分别可达到2.63%和0.94%。

2.2不同料液比对糖蛋白提取效果的影响采用0.5moL/L NaCl溶液为浸提剂,比较不同的料液比对其提取效果的影响,结果见图2随着料液比的增大,浸提液中总糖含量与可溶性蛋白含量均先上升后下降,在1∶10料液比中达到最大,分别达到3.92%和0.62%2.3不同温度对糖蛋白提取效果的影响以1∶10(W/V)比例加入0.5moL/L NaCl溶液,分别在50℃、60℃、70℃、80℃、90℃条件下浸提,比较不同温度对糖蛋白提取的影响,结果见图3随着温度的升高浸提液中的蛋白含量呈上升趋势;而总糖含量呈先上升后下降趋势,在70℃时含量最高考虑到在高温条件下浸提液中变性蛋白的含量增多,因此选择浸液中总糖含量最高时的温度70℃作为提取温度2.4不同浸提时间对糖蛋白提取效果的影响以1∶10(W/V)比例加入0.5moL/L NaCl溶液,在70℃条件下分别浸提30min、60min、90min、120min,比较不同浸提时间对糖蛋白提取效果的影响,结果见图4随着浸提时间的延长,浸提液中总糖含量明显高于蛋白含量,在90min时分别为1.71%和1.12%2.5正交试验设计与结果在单因素试验结果的基础上,以盐浓度、料液比、浸提温度与时间为4因素,设计正交试验表(见表1);以浸提液中总糖与总蛋白含量为指标检测糖蛋白的提取效果,结果见表2。

通过R可知4个因素中对波纹巴非蛤中糖蛋白的提取率影响大小次序为:C>A>B>D,最佳的提取条件的水平组合为A2B3C3D2,即:采用0.5moL/L NaCl溶液为浸提剂,料液比1∶12, 75℃浸提90min2.6乙醇沉淀分离将95%乙醇在搅拌下缓慢加入浓缩液中,使乙醇终浓度分别至50%、60%、70%、80%,结果见图5当乙醇终浓度为60%时得到的糖蛋白中的总糖含量、蛋白含量和得率均达到最大,分别为38.3%、17.1%和1.64%3结论波纹巴非蛤糖蛋白的分离提取工艺条件为:采用0.5 moL/L NaCl溶液为浸提剂,料液比1∶12,75℃浸提90min浸提液经透析脱盐,60%的乙醇终浓度沉淀得波纹巴非蛤糖蛋白,得率为1.64%,总糖与可溶性蛋白含量分别为38.3%和17.1%4参考文献[1] KISUGI J,OHYE H.Biopolymers from marine invertebrates X, Mode of action of an antibacterial glycoprotein E, from eggs of a sea hare Aplysia kurodai[J].Chem Pharm Bull,1989,37(11):3050-3055.[2] 顾谦群,方玉春,辛现良,等.栉孔扇贝糖蛋白的肿瘤抑制活性和对免疫功能的影响[J].营养学报,2001,23(3):200-202.[3] 傅余强,顾谦群,刘睿,等.管角螺肌肉中性糖蛋白的化学组成及抗肿瘤活性研究[J].中国海洋药物,2002(6):20-24.[4] 张惟杰.糖复合物生化研究技术[M].杭州:浙江大学出版社,1999. [5] 方旭波,陈小娥,余辉,等.鱿鱼硫酸轨骨素糖蛋白的分离纯化和鉴定[J].中国食品学报,2009(4):103-109.[6] 胡雪琼,吴红棉,胡俊辉,等.超声波辅助提取迈江牡蛎糖蛋白的工艺优化[J].食品工业科技,2009(7):235-237,240.[7] 范秀萍,吴红棉,王娅楠,等.波纹巴非蛤糖蛋白的分离提取及体外清除羟自由基活性的研究[J].食品与发酵工业,2008(1):138-140.[8] 任国艳,李八方,赵雪,等.海蜇头糖蛋白超声辅助提取工艺研究[J].农业工程学报,2008(2):255-259.[9] 章建设,雷晓凌.鱿鱼内脏糖蛋白提取工艺及其免疫活性初步研究[J].现代食品科技,2008(2):167-169,166.[10] 曾婷婷,徐明生,蒋艳.超声波提取河蚬糖蛋白[J].江西农业大学学报,2008(1):144-148.现代农业科技2009年21期现代农业科技的其它文章不同贮藏温度下油栉采后生理变化及其与耐贮性的关系美国薄壳山核桃的理化特性及栽培技术原花青素对衰老机体抗氧化能力研究进展糯玉米漂浮育苗技术依托图书馆行业协会实现信息资源的共建共享探析优质无公害苹果生产技术 -全文完-。