临床免疫检验仪器.ppt

第十一章第十一章 临床免疫检验仪器临床免疫检验仪器学习要求学习要求 掌握临床免疫检验常用仪器的特点掌握临床免疫检验常用仪器的特点; ; 熟悉临床免疫检验常用仪器的分析原理熟悉临床免疫检验常用仪器的分析原理; ; 了解临床免疫检验常用仪器的使用与维护了解临床免疫检验常用仪器的使用与维护主主 要要 内内 容容 酶免疫分析仪酶免疫分析仪 发光免疫分析仪发光免疫分析仪放射免疫分仪析仪放射免疫分仪析仪免疫浊度分析仪免疫浊度分析仪 时间分辨荧光免疫分析仪时间分辨荧光免疫分析仪 第第 一一 节节 酶免疫分酶免疫分析仪析仪一、酶免疫技术的分类一、酶免疫技术的分类二、酶免疫分析仪的类型、工作原理及结构二、酶免疫分析仪的类型、工作原理及结构三、酶免疫分析仪的性能评价及维护保养三、酶免疫分析仪的性能评价及维护保养四、酶免疫分析仪的临床应用四、酶免疫分析仪的临床应用•根据是否需要分离结合与游离的酶标记物，根据是否需要分离结合与游离的酶标记物，可分为可分为: : 酶扩大免疫测定酶扩大免疫测定 非均相酶免疫测定非均相酶免疫测定 克隆酶供体免疫测定克隆酶供体免疫测定 液相酶免疫法液相酶免疫法 均相酶免疫测定均相酶免疫测定 固相酶免疫法固相酶免疫法 (ELISA(ELISA）） 一、酶免疫技术的分类一、酶免疫技术的分类基本概念基本概念二、酶免疫分析仪的类型、工作原理及基本结构二、酶免疫分析仪的类型、工作原理及基本结构•酶标仪酶标仪• 一般简单的酶标仪只有读数、数据处一般简单的酶标仪只有读数、数据处理的功能，还需要配置孵育箱，洗板机，理的功能，还需要配置孵育箱，洗板机，人工操作步骤繁琐。

人工操作步骤繁琐• 全自动酶联免疫系统全自动酶联免疫系统集加样品、加试剂、集加样品、加试剂、孵育、震荡、洗板和酶标仪功能于一体孵育、震荡、洗板和酶标仪功能于一体 （一）酶免疫分析仪的类型（一）酶免疫分析仪的类型-1微孔板固相酶免疫测定仪器微孔板固相酶免疫测定仪器( (酶标仪酶标仪) )半自动微孔板半自动微孔板ELISAELISA分析仪分析仪全自动微孔板全自动微孔板ELISAELISA分析仪分析仪管式固相酶免疫测定仪器管式固相酶免疫测定仪器小珠固相酶免疫测定仪器小珠固相酶免疫测定仪器磁微粒固相酶免疫测定仪器等磁微粒固相酶免疫测定仪器等 （一）酶免疫分析仪的类型（一）酶免疫分析仪的类型-21.1.微孔板固相酶免疫测定仪器微孔板固相酶免疫测定仪器( (酶标仪酶标仪) ) 有单通道和多通道两种类型有单通道和多通道两种类型 工作原理与主要结构和光电比色计相同工作原理与主要结构和光电比色计相同和不同之处在于和不同之处在于： 比色液的容器是塑料微孔板比色液的容器是塑料微孔板 以垂直光束通过待测液以垂直光束通过待测液 酶标仪酶标仪的工作原理图的工作原理图2.2.自动化酶免疫分析系统自动化酶免疫分析系统在酶标仪的基础上再加上配置在酶标仪的基础上再加上配置: : 加样系统加样系统 温育系统温育系统 洗板系统洗板系统 判读系统判读系统 机械臂系统机械臂系统 液路动力系统液路动力系统 软件控制系统软件控制系统 系统优势系统优势-1•自动化程度高自动化程度高： 前后处理一体化设计，减少人与样品的接触前后处理一体化设计，减少人与样品的接触机会，降低污染。

能进行各种自动安全检测机会，降低污染能进行各种自动安全检测•稳稳 定定：只要避免人为操作错误，可连续数只要避免人为操作错误，可连续数 年良好工作年良好工作•准准 确确：不存在交叉污染，确保结果准确不存在交叉污染，确保结果准确 系统优势系统优势-2•高高 速速：加注、读板速度快加注、读板速度快•扩展性扩展性：软件可升级，样本量增加，可联软件可升级，样本量增加，可联 • 机使用机使用•用户做主更多用户做主更多：开放式试剂；开放式试剂；WINDOWWINDOW操操作系统；中作系统；中/ /英英/ /日自选操作界面；自定义日自选操作界面；自定义编程；自动编程；自动/ /自定义时间表；无限存档自定义时间表；无限存档三、酶免疫分析仪的性能评价及维护保养三、酶免疫分析仪的性能评价及维护保养（一）性能评价（一）性能评价1 1．滤光片波长精度检查及其峰值测定；．滤光片波长精度检查及其峰值测定； 2 2．灵敏度和准确度；．灵敏度和准确度； 3 3．通道差与孔间差检测；．通道差与孔间差检测； 4 4．零点漂移；．零点漂移； 5 5．精密度评价；．精密度评价； 6 6．线性测定；．线性测定； 7 7．双波长评价；．双波长评价；三、酶免疫分析仪的性能评价及维护保养三、酶免疫分析仪的性能评价及维护保养（二）维护保养（二）维护保养重点：光学部分重点：光学部分 1 1．滤光片波长精度检查．滤光片波长精度检查 2 2．通道差与孔间差检测．通道差与孔间差检测四、酶免疫分析仪的临床应用 １１. .病原体及其抗体的检测病原体及其抗体的检测 2.2.各种免疫球蛋白和细胞因子、补体各种免疫球蛋白和细胞因子、补体 3.3.肿瘤标志物肿瘤标志物 4.4.多种激素多种激素 5.5.药物和毒品等。

药物和毒品等第二节第二节 发光免疫分析仪发光免疫分析仪 将发光反应与免疫反应相结合的免将发光反应与免疫反应相结合的免疫分析方法疫分析方法•采用微量倍增技术，敏感性度，特异性好，采用微量倍增技术，敏感性度，特异性好，所用试剂安全、稳定；所用试剂安全、稳定；•检测范围广泛，从传统的蛋白、激素、酶检测范围广泛，从传统的蛋白、激素、酶乃至药物均可检测乃至药物均可检测•发展迅速，各种仪器不断出现，自动化程发展迅速，各种仪器不断出现，自动化程度越来越高度越来越高一、发光免疫的分类一、发光免疫的分类-1-1酶促化学发光：酶促化学发光： 辣根过氧化物酶系统辣根过氧化物酶系统 碱性磷酸酶系统碱性磷酸酶系统 黄嘌呤氧化酶系统黄嘌呤氧化酶系统非酶促化学发光：非酶促化学发光： 吖啶酯系统吖啶酯系统 草酸酯系统草酸酯系统 三价铁三价铁- -鲁米诺系统鲁米诺系统闪光（闪光（FlashFlash）） 发光时间在数秒内，如吖啶酯发光时间在数秒内，如吖啶酯发光时间在数秒内，如吖啶酯发光时间在数秒内，如吖啶酯 以原位进样以原位进样以原位进样以原位进样(In Situ Injector) (In Situ Injector) 和时间积分法测量和时间积分法测量和时间积分法测量和时间积分法测量辉光（辉光（GlowGlow）） 发光时间在数十分钟以上，如：发光时间在数十分钟以上，如：发光时间在数十分钟以上，如：发光时间在数十分钟以上，如： -HRP-Luminol-HRP-Luminol系统系统系统系统 -AP-AMPPD-AP-AMPPD系统系统系统系统 - -黄嘌呤氧化酶系统黄嘌呤氧化酶系统黄嘌呤氧化酶系统黄嘌呤氧化酶系统 无须原位进样、无须原位进样、无须原位进样、无须原位进样、 以速率法测量。

以速率法测量以速率法测量以速率法测量按发光持续时间按发光持续时间一一. .发光免疫的分类发光免疫的分类-2-2时间时间时间时间发光信号发光信号发光信号发光信号辉光坪区辉光坪区辉光坪区辉光坪区速率法测量速率法测量速率法测量速率法测量原位进样原位进样原位进样原位进样积分法测量积分法测量积分法测量积分法测量闪光尖峰闪光尖峰闪光尖峰闪光尖峰闪光闪光- -辉光测量方式差别辉光测量方式差别²消除放射性危害消除放射性危害²无半衰期限制，试剂稳定性、有效期延长无半衰期限制，试剂稳定性、有效期延长²实现连续、动态、重复测定实现连续、动态、重复测定优越性优越性-1-1闪光闪光- -辉光测量方式差别辉光测量方式差别•适合于复合标记系统多指标测定适合于复合标记系统多指标测定•操作简单，反应快，易实现自动化操作简单，反应快，易实现自动化•灵敏度和线性范围超过以往技术灵敏度和线性范围超过以往技术优越性优越性-2-2闪光闪光- -辉光测量方式差别辉光测量方式差别三三. .发光免疫技术分类发光免疫技术分类根据示踪物检测的不同而分为：根据示踪物检测的不同而分为： 荧光免疫测定荧光免疫测定 电化学发光免疫测定电化学发光免疫测定 化学发光免疫化学发光免疫------再根据标记物的不同又分：再根据标记物的不同又分： - -化学发光免疫分析化学发光免疫分析 - -微粒子化学发光免疫分析微粒子化学发光免疫分析 - -电化学发光免疫分析电化学发光免疫分析 - -化学发光酶免疫分析化学发光酶免疫分析 - -生物发光免疫分析生物发光免疫分析 临床以前三者较为常用。

临床以前三者较为常用三三. .发光免疫分析的基本测定方法发光免疫分析的基本测定方法根据发光反应检测方式的不同可分为根据发光反应检测方式的不同可分为 1 1．液相法．液相法 反应在液相中进行，经离心或反应在液相中进行，经离心或分离措施后，再进行测定发光强度分离措施后，再进行测定发光强度 2 2．固相法．固相法 将抗原抗体复合物结合在固相将抗原抗体复合物结合在固相载体载体( (如聚苯乙烯管如聚苯乙烯管) )或分离介质上或分离介质上( (如磁性微如磁性微粒球等粒球等) )，再进行测定发光强度，再进行测定发光强度 3 3．均相法．均相法 同均相酶免疫法，不需要经过同均相酶免疫法，不需要经过离心或分离步骤，即可直接进行发光强度检测离心或分离步骤，即可直接进行发光强度检测夹心法特点夹心法特点分析灵敏度分析灵敏度（最低检测限）（（最低检测限）（95%95%可信度）：可信度）： S0+2SDS0+2SD在该曲线上所对应的浓度值在该曲线上所对应的浓度值功能灵敏度：功能灵敏度： 测定误差（变异）测定误差（变异）≤≤20%20%的最低可检测浓度。

的最低可检测浓度线性范围：线性范围： 功能灵敏度功能灵敏度------变异变异≤≤20%20%的最高检测浓度的最高检测浓度相关系数：相关系数：≥≥0.990.99的曲线范围的曲线范围四、发光免疫分析仪的种类、工作原理和基本结构四、发光免疫分析仪的种类、工作原理和基本结构( (一一) )全自动化学发光免疫分析系统全自动化学发光免疫分析系统 采用化学发光技术和磁性微粒子分离技术相采用化学发光技术和磁性微粒子分离技术相结合的免疫分析系统结合的免疫分析系统( (一一) )全自动化学发光免疫分析系统全自动化学发光免疫分析系统1 1．仪器测定原理．仪器测定原理 该类分析技术有两种方法：该类分析技术有两种方法：- -竞争法竞争法 测定小分子抗原物质测定小分子抗原物质- -夹心法夹心法 测定大分子抗原物质测定大分子抗原物质竞争法特点竞争法特点分析灵敏度分析灵敏度（最低检测限）（（最低检测限）（95%95%可信度）：可信度）： S0-2SDS0-2SD在该曲线上所对应的浓度值在该曲线上所对应的浓度值功能灵敏度功能灵敏度：： （变异）（变异）≤≤20%20%的最低可检测浓度。

的最低可检测浓度线性范围：线性范围：　　　　功能灵敏度功能灵敏度- -变异变异≤≤20%20%的最高检测浓度的最高检测浓度相关系数：相关系数：≥≥0.990.99的曲线范围的曲线范围( (一一) )全自动化学发光免疫分析系统全自动化学发光免疫分析系统•一般由主机和微机两部分组成：一般由主机和微机两部分组成：•（（1 1）主机部分：包括）主机部分：包括 原材料配备部分：原材料配备部分：反应杯、样品盘、试剂盘、纯反应杯、样品盘、试剂盘、纯净水、清洗液、废水在机器上的贮存和处理装置净水、清洗液、废水在机器上的贮存和处理装置 液路部分：液路部分：过滤器、密封圈、真空泵、管道、样过滤器、密封圈、真空泵、管道、样 品及试剂探针品及试剂探针 机械传动部分：机械传动部分：传感器、运输轨道传感器、运输轨道 光路检测部分：光路检测部分：光电倍增管和线路控制板光电倍增管和线路控制板2 2．仪器组成．仪器组成全全自自动动化化学学发发光光免免疫疫分分析析系系统统66IMMUNOLOGY( (一一) )全自动化学发光免疫分析系统全自动化学发光免疫分析系统2 2．仪器组成．仪器组成（（2 2）微机系统）微机系统 程控操作程控操作 指示判定指示判定 数据处理数据处理 故障诊断故障诊断 自动监视自动监视（二（二) )全自动微粒子化学发光免疫分析系统全自动微粒子化学发光免疫分析系统 采用微粒子化学发光技术对人体内的采用微粒子化学发光技术对人体内的微量物质以及药物浓度进行定量测定微量物质以及药物浓度进行定量测定• 具有高度的特异性、高度的敏感性和具有高度的特异性、高度的敏感性和高度的稳定性等特点高度的稳定性等特点 （二（二) )全自动微粒子化学发光免疫分析系统全自动微粒子化学发光免疫分析系统1.1.分析方法分析方法 采用磁性微粒作为固相载体，以碱性磷采用磁性微粒作为固相载体，以碱性磷酸酶作为发光剂，扩大测定的范围。

酸酶作为发光剂，扩大测定的范围 以免疫测定方法为基础：以免疫测定方法为基础： - -竞争法竞争法 - -夹心法夹心法 - -抗体检测等抗体检测等 （二（二) )全自动微粒子化学发光免疫分析系统全自动微粒子化学发光免疫分析系统2.2.分析过程分析过程 抗原抗体结合；抗原抗体结合； 加入碱性磷酸酶标记的抗体；加入碱性磷酸酶标记的抗体； 形成固相包被复合物；形成固相包被复合物； 在电磁场中进行在电磁场中进行2 2~3 3次洗涤分离；次洗涤分离； 加入底物；加入底物； 通过光量子阅读系统记录发光强度；通过光量子阅读系统记录发光强度； 在标准曲线上计算出待测抗原的浓度在标准曲线上计算出待测抗原的浓度（二（二) )全自动微粒子化学发光免疫分析系统全自动微粒子化学发光免疫分析系统3.3.仪器组成仪器组成 微电脑控制微电脑控制 样品处理系统样品处理系统 实验运行系统实验运行系统 中心供给和控制系统中心供给和控制系统( (三三) )全自动电化学发光免疫分析仪全自动电化学发光免疫分析仪•电化学发光免疫分析技术在新一代实验室电化学发光免疫分析技术在新一代实验室免疫检测技术中很有特点，它在免疫检测技术中很有特点，它在2020世纪如世纪如年代一问世就引起广泛的关注年代一问世就引起广泛的关注•德国公司在链酶亲和素德国公司在链酶亲和素—生物素包被技术生物素包被技术基础上，引用电化学发光免疫分析技术并基础上，引用电化学发光免疫分析技术并开发出相应的全自动电化学发光免疫检测开发出相应的全自动电化学发光免疫检测系统系统 1.1.测定原理及过程测定原理及过程•待测标本与包被了抗体的顺磁性微粒和发光剂标待测标本与包被了抗体的顺磁性微粒和发光剂标记的抗体共同温育（形成磁性微珠包被抗体记的抗体共同温育（形成磁性微珠包被抗体—抗抗原原—发光剂标记抗体复合物）发光剂标记抗体复合物）• 吸人流动室，缓冲液冲洗吸人流动室，缓冲液冲洗• 磁性微粒流经电极表面时，被电极下的磁铁吸引，磁性微粒流经电极表面时，被电极下的磁铁吸引，而游离的发光剂标记抗体被冲洗走而游离的发光剂标记抗体被冲洗走• 同时在电极加电压，启动电化学发光反应，使发同时在电极加电压，启动电化学发光反应，使发光试剂标记物三氯联吡啶钉光试剂标记物三氯联吡啶钉[Ru(bpy)3]2+TPA[Ru(bpy)3]2+TPA在电在电极表面进行电子转移，产生电化学发光极表面进行电子转移，产生电化学发光•光的强度与待测抗原的浓度成正光的强度与待测抗原的浓度成正比比( (三三) )全自动电化学发光免疫分析仪全自动电化学发光免疫分析仪( (三三) )全自动电化学发光免疫分析仪全自动电化学发光免疫分析仪2.2.仪器组成及特点仪器组成及特点•由样品盘、试剂盒、温育反应盘、电化学由样品盘、试剂盒、温育反应盘、电化学检测系统及计算机控制系统组成检测系统及计算机控制系统组成•应用三种抗原抗体反应方法：应用三种抗原抗体反应方法： - -抑制免疫法抑制免疫法 检测小分子量蛋白抗原检测小分子量蛋白抗原 - -夹心免疫法夹心免疫法 检测大分子量物质检测大分子量物质 - -桥联免疫法桥联免疫法 检测抗体如检测抗体如IgGIgG、、IgMIgM 另：钉标记用于另：钉标记用于DNADNA／／RNARNA探针分析探针分析（四）发光免疫分析仪的临床应用（四）发光免疫分析仪的临床应用主要应用于以下几方面检测：主要应用于以下几方面检测：•1 1．甲状腺系统．甲状腺系统•2 2．性腺系统．性腺系统•3 3．血液系统．血液系统 •4 4．肿瘤标记物．肿瘤标记物 •5 5．心血管系统．心血管系统 •6 6．血药浓度．血药浓度 •7 7．感染性疾病．感染性疾病•8 8．其他检测．其他检测 （（IgIg、血清皮质醇、尿皮质醇、尿游离脱、血清皮质醇、尿皮质醇、尿游离脱氧吡啶等）氧吡啶等）第三节第三节 放射免疫分析仪放射免疫分析仪（（（（radio immunoassay ,RIAradio immunoassay ,RIAradio immunoassay ,RIAradio immunoassay ,RIA）））） 放射性核素分析的高灵敏度与抗原抗体反应的高特放射性核素分析的高灵敏度与抗原抗体反应的高特异性结合异性结合•放射免疫技术主要包括：放射免疫技术主要包括： - -放射免疫分析放射免疫分析(radio immunoassay, (radio immunoassay, RIA)RIA) - -免疫放射分析或免疫放射度量分析免疫放射分析或免疫放射度量分析 ( immunoradiometric assay( immunoradiometric assay，，IRMA)IRMA)一、一、 放射性核素的种类特点和检测仪的基本结构放射性核素的种类特点和检测仪的基本结构（一）放射性核素的种类和特点（一）放射性核素的种类和特点 放射性核素依衰变方式分放射性核素依衰变方式分αα、、ββ、、γγ三种，三种，用于放射性标记的有用于放射性标记的有ββ和和γγ两类两类; ;分别用液体分别用液体闪烁及闪烁及γγ计数器测定。

目前常用的是计数器测定目前常用的是γγ型放射型放射性核素，如性核素，如125125I I、、131131I I、、5757CrCr和和6060CoCo，以，以125125I I最常最常用；用；ββ型放射性核素有型放射性核素有3 3H H、、1414C C和和3232P P，以，以3 3H H最常最常用用 一、一、 放射性核素的种类特点和检测仪的基本结构放射性核素的种类特点和检测仪的基本结构（二）检测的基本结构及其探测原理（二）检测的基本结构及其探测原理 将射线（放射能）与闪烁体的作用转换成将射线（放射能）与闪烁体的作用转换成光脉冲（光能），然后用光电倍增管将光脉冲光脉冲（光能），然后用光电倍增管将光脉冲转换成电脉冲（电能）转换成电脉冲（电能） 电脉冲在单位时间内出现的次数（即仪器电脉冲在单位时间内出现的次数（即仪器记录的记录的cmpcmp值）反映了发出射线的频率值）反映了发出射线的频率 电脉冲的电压幅度则反映了射线能量的高电脉冲的电压幅度则反映了射线能量的高低二、晶体闪烁计数器组成和工作原理二、晶体闪烁计数器组成和工作原理（一）仪器组成及工作原理（一）仪器组成及工作原理 1 1．闪烁体．闪烁体 2 2．光电倍增管．光电倍增管 （（1 1）光阴极）光阴极 （（2 2）打拿极）打拿极 （（3 3）阳极）阳极 3 3．多道脉冲分析器．多道脉冲分析器 二、晶体闪烁计数器组成和工作原理二、晶体闪烁计数器组成和工作原理 多道分析器（多道分析器（MCAMCA）是进行能谱分析的重要）是进行能谱分析的重要仪器。

现代的仪器现代的MCAMCA与通用微型计算机有许多共同与通用微型计算机有许多共同特性，是现代核探测分析及放射影像装置的重特性，是现代核探测分析及放射影像装置的重要组成部分要组成部分二、晶体闪烁计数器组成和工作原理二、晶体闪烁计数器组成和工作原理（二）（二）γ-γ-辐射计数器辐射计数器整机可分为：整机可分为： 采样部分采样部分------探头、换样装置、高低压电探头、换样装置、高低压电源、放大器及单道组成源、放大器及单道组成 数据处理部分数据处理部分------接口、计算机、输入输接口、计算机、输入输出装置出装置三三. .放射免疫分析仪的应用放射免疫分析仪的应用常用于测定：常用于测定： 激素激素 微量蛋白质微量蛋白质 肿瘤标志物肿瘤标志物 药物药物第四节第四节 免疫比浊分析仪免疫比浊分析仪• 现在临床上测定微量蛋白现在临床上测定微量蛋白( (如如IgIg等等) ) 已发已发展到现代自动免疫分析技术，其灵敏度逐展到现代自动免疫分析技术，其灵敏度逐步提高，检测水平由微克到纳克，甚至皮步提高，检测水平由微克到纳克，甚至皮克水平。

克水平• 微量蛋白免疫分析随着自动化程度不断微量蛋白免疫分析随着自动化程度不断提高，在临床上得到广泛应用，其自动化提高，在临床上得到广泛应用，其自动化检测方法主要为检测方法主要为免疫比浊法免疫比浊法免疫比浊法免疫比浊法 免疫透射浊度测定法免疫透射比浊法免疫透射比浊法 免疫胶乳浊度测定法 终点散射比浊法免疫散射比浊法免疫散射比浊法 速率散射比浊法 第四节第四节 免疫比浊分析仪免疫比浊分析仪光路示意图如下：光路示意图如下：第四节第四节 免疫比浊分析仪免疫比浊分析仪第四节第四节 免疫比浊分析仪免疫比浊分析仪免疫分析比浊技术的主要优势免疫分析比浊技术的主要优势(1)(1)稳定性好，敏感性高稳定性好，敏感性高(2)(2)分析简便、快速分析简便、快速(3)(3)避免标本之间及标本对人的污染避免标本之间及标本对人的污染(4)(4)标本用量少标本用量少一、一、 免疫比浊测定的基本原理免疫比浊测定的基本原理（一）免疫透射比浊测定（一）免疫透射比浊测定 免疫透射比浊度测定免疫透射比浊度测定(turbidimetry)(turbidimetry) 免疫透射比浊测定免疫透射比浊测定 免疫胶乳浊度测定免疫胶乳浊度测定 光路示意见下图光路示意见下图 ：：（一）免疫透射比浊测定（一）免疫透射比浊测定1.1.免疫透射比浊测定原理免疫透射比浊测定原理 抗原抗体在缓冲液中快速形成抗原抗体复抗原抗体在缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。

合物，使反应液出现浊度 当反应液中保持抗体过剩时，形成的复合当反应液中保持抗体过剩时，形成的复合物随抗原增加而增加，反应液的浊度亦随之物随抗原增加而增加，反应液的浊度亦随之增加（一）免疫透射比浊测定（一）免疫透射比浊测定2.2.免疫胶乳浊度测定法原理免疫胶乳浊度测定法原理 选择均匀一致的胶乳颗粒吸附抗体，当选择均匀一致的胶乳颗粒吸附抗体，当遇到相应抗原时，发生凝集；遇到相应抗原时，发生凝集； 单个胶乳颗粒在入射光波长之内，光线单个胶乳颗粒在入射光波长之内，光线可透过当两个胶乳颗粒凝集时，则使透可透过当两个胶乳颗粒凝集时，则使透过光减少，减少的程度与胶乳凝聚成正比过光减少，减少的程度与胶乳凝聚成正比（二）激光散射浊度测定（二）激光散射浊度测定激光散射浊度测定激光散射浊度测定(nephelometry)(nephelometry)分为分为： - -终点散射比浊法终点散射比浊法(end nephelometry)(end nephelometry) - -速率散射比浊法速率散射比浊法(rate nephelometry)(rate nephelometry)（二）激光散射浊度测定（二）激光散射浊度测定基本原理：基本原理： 激光散射光系沿水平轴照射，碰到抗原激光散射光系沿水平轴照射，碰到抗原—抗体复合物时，导致光线被折射，发生抗体复合物时，导致光线被折射，发生偏转偏转0 0o o ～～ 90 90 o o，其偏转角度因光线波长、，其偏转角度因光线波长、离子大小不同而有所区别。

散射光的强度离子大小不同而有所区别散射光的强度与抗原与抗原- -抗体复合物的含量成正比，和散射抗体复合物的含量成正比，和散射夹角成正比，和波长成反比夹角成正比，和波长成反比 （二）激光散射浊度测定（二）激光散射浊度测定基本原理：基本原理：（二）激光散射浊度测定（二）激光散射浊度测定1.1.终点散射比浊法终点散射比浊法 抗原抗原—抗体反应达到平衡时（通常为抗体反应达到平衡时（通常为3030～～6060分钟），复合物浊度不再受时间的影分钟），复合物浊度不再受时间的影响，在聚合产生絮状沉淀之前进行浊度测响，在聚合产生絮状沉淀之前进行浊度测定 散射比浊法是测定抗原与抗体结合完成散射比浊法是测定抗原与抗体结合完成后测定其复合物的量后测定其复合物的量（二）激光散射浊度测定（二）激光散射浊度测定2.2.速率散射比浊法速率散射比浊法 速率是指抗原速率是指抗原—抗体结合反应过程中，抗体结合反应过程中，在单位时间内两者结合的速度在单位时间内两者结合的速度 速率散射比浊法是在抗原与抗体反应的速率散射比浊法是在抗原与抗体反应的最高峰最高峰( (约在约在1 1分钟内分钟内) )测定其复合物形成的测定其复合物形成的量，该法具有快速、准确的特点。

量，该法具有快速、准确的特点 （二）激光散射浊度测定（二）激光散射浊度测定3.3.激光散射浊度测定仪激光散射浊度测定仪(1) ARRAY(1) ARRAY特种蛋白分析测定系统特种蛋白分析测定系统 由微电脑控制，可以定量检测体液中微量由微电脑控制，可以定量检测体液中微量蛋白的全自动组合仪器蛋白的全自动组合仪器仪器主要部件仪器主要部件（（1 1）散射测浊仪）散射测浊仪 光源采用双光源碘化硅晶光源采用双光源碘化硅晶 灯泡灯泡(400-620nm)(400-620nm)；； （（2 2）加液系统）加液系统 具有液体感知装置，控具有液体感知装置，控 制加液体积的准确性；制加液体积的准确性；（（3 3）试剂和样品盘）试剂和样品盘 （（4 4）阅读器）阅读器 读取卡片内贮存的参数读取卡片内贮存的参数 （二）激光散射浊度测定（二）激光散射浊度测定（二）激光散射浊度测定（二）激光散射浊度测定仪器主要特点：仪器主要特点： ICIC悬浮颗粒所产生的散射光速率变化强弱与抗悬浮颗粒所产生的散射光速率变化强弱与抗原浓度成正比；原浓度成正比； 速率峰值经微电脑处理转换成抗原浓度；速率峰值经微电脑处理转换成抗原浓度； 测到所需的速率峰值后，仪器通过峰值鉴定程测到所需的速率峰值后，仪器通过峰值鉴定程序再对此峰值进行确证；序再对此峰值进行确证； 抗原过剩的监测抗原过剩的监测 在抗原过剩的情况下，仪器在抗原过剩的情况下，仪器重新对标本进行稀释，然后再次测定；重新对标本进行稀释，然后再次测定； 使用抗体、标准血清、抗体卡片和校正卡片。

使用抗体、标准血清、抗体卡片和校正卡片（二）DBl00特种蛋白分析测定系统• DB 100 DB 100特种蛋白分析测定系统，由分析仪、特种蛋白分析测定系统，由分析仪、计算机打印机、条码读取器四部分组成计算机打印机、条码读取器四部分组成分析仪是该系统的主要部分，包括：分析仪是该系统的主要部分，包括：•（（1 1）散射测浊仪）散射测浊仪 光源采用发光二极管光源采用发光二极管•（（2 2）加液系统）加液系统 •（（3 3）支架运输装置）支架运输装置•（（4 4）比色杯装置）比色杯装置（二）DBl00特种蛋白分析测定系统•仪器主要特点：仪器主要特点：•固定时间测定：固定时间测定： 利用两个时间光散射检测之间的差异，在免疫反应利用两个时间光散射检测之间的差异，在免疫反应混合物预备混合物预备1010秒钟测定第一次光散射的值秒钟测定第一次光散射的值t1)t1)，然后，然后在反应在反应6 6分钟后测定第二次光散射的值分钟后测定第二次光散射的值(t2)(t2) 终点检测法：终点检测法： 检测预温检测预温3030分钟后光散射的值分钟后光散射的值(t1)(t1)。

通过终点光通过终点光散射强度与贮存在计算机内校准曲线进行比较，即散射强度与贮存在计算机内校准曲线进行比较，即可得出该物质的浓度可得出该物质的浓度 三、免疫比浊分析的临床应用三、免疫比浊分析的临床应用1 1．免疫功能监测；．免疫功能监测； 2 2．心血管疾病检测；．心血管疾病检测；3 3．炎症状况监测；．炎症状况监测； 4 4．类风湿性关节炎的检测；．类风湿性关节炎的检测；5 5．肾脏功能监测；．肾脏功能监测；6 6．营养状态监测；．营养状态监测；7 7．新生儿体检；．新生儿体检；8 8．凝血及出血性疾病的检测；．凝血及出血性疾病的检测； 9 9．贫血监测；．贫血监测；1010．血脑屏障监测．血脑屏障监测• 时间分辨荧光免疫测定基本原理是以镧系元时间分辨荧光免疫测定基本原理是以镧系元素铕（素铕（Eu）螯合物作荧光标记物，利用这类）螯合物作荧光标记物，利用这类荧光物质有长荧光寿命的特点，延长荧光测荧光物质有长荧光寿命的特点，延长荧光测量时间，待短寿命的自然本底荧光完全衰退量时间，待短寿命的自然本底荧光完全衰退后再行测定，所得信号完全为长寿命镧系螯后再行测定，所得信号完全为长寿命镧系螯合物的荧光，从而有效地消除非特异性本底合物的荧光，从而有效地消除非特异性本底荧光的干扰。

荧光的干扰第五节第五节 时间分辨荧光免疫分析仪时间分辨荧光免疫分析仪（timeresolvedfluorescenceimmunoassay，TR-FIA）测定原理测定原理 第五节第五节 时间分辨荧光免疫分析仪时间分辨荧光免疫分析仪第五节第五节 时间分辨荧光免疫分析仪时间分辨荧光免疫分析仪•Ab*+Ag→Ab*Ag+Ab Ab*+Ag→Ab*Ag+Ab •抗原抗体反应后，先把抗原抗体反应后，先把Ab*AgAb*Ag与与Ab*Ab*分离，分离，•然后测定然后测定Ab*AgAb*Ag或或Ab*Ab*中的标记物的量，中的标记物的量，•从而推算出标本中的从而推算出标本中的AgAg量，量，•该方法称为非均相荧光免疫测定法该方法称为非均相荧光免疫测定法基本反应式如下：基本反应式如下：一、时间分辨荧光免疫检测原理一、时间分辨荧光免疫检测原理•用镧系三价稀土离子及其螯合物作为示踪物标用镧系三价稀土离子及其螯合物作为示踪物标记抗原、抗体、核酸探针等物质记抗原、抗体、核酸探针等物质一、时间分辨荧光免疫检测原理一、时间分辨荧光免疫检测原理 当免疫反应发生后，根据稀土离子螯合物的当免疫反应发生后，根据稀土离子螯合物的荧光光谱的特点，用时间分辨荧光分析仪延缓测荧光光谱的特点，用时间分辨荧光分析仪延缓测量时间，排除标本中非特异性荧光的干扰，所得量时间，排除标本中非特异性荧光的干扰，所得信号完全是稀土元素螯合物发射的特异荧光，测信号完全是稀土元素螯合物发射的特异荧光，测定免疫反应最后产物的特异性荧光信号。

定免疫反应最后产物的特异性荧光信号一、时间分辨荧光免疫检测原理一、时间分辨荧光免疫检测原理二、时间分辨荧光免疫分析的特点二、时间分辨荧光免疫分析的特点•特异性强特异性强 •灵敏度高灵敏度高 •标记物稳定标记物稳定 •线性范围更宽，重复性更好线性范围更宽，重复性更好 •检测动态范围宽，可达检测动态范围宽，可达4 4～～5 5个数量级个数量级 •标记物制备简单，稳定性好，使用时间长标记物制备简单，稳定性好，使用时间长三、时间分辨荧光免疫分析的应用三、时间分辨荧光免疫分析的应用（一）蛋白质和多肽激素分析（一）蛋白质和多肽激素分析（二）半抗原分析：（二）半抗原分析： （三）病原体抗原（三）病原体抗原/ /抗体分析抗体分析（四）肿瘤标志物分析（四）肿瘤标志物分析（五）干血斑样品分析（五）干血斑样品分析（六）核酸分析（六）核酸分析（七）测定天然杀伤细胞的活力（七）测定天然杀伤细胞的活力。