EP5.0微生物检测翻译(精品).doc
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EP5.0微生物检测翻译版本 bhm~Ii 下为EP5.0微生物检测2.6.12和2.6.13的中译本，不足之处请各位大侠指正 U9p.Dh~)vG K^qUlyv b;;Kxi:7$} 未消毒产品的微生物检测 *rFbehfH 以下所要描述的试验可定量检测出有氧条件下嗜温性细菌及菌类的数目 DoB3_=yJ+ 这个试验首先旨在于确定专题论文中的物质是否符合药典中关于微生物的要求当用于此目的时可参考下面的说明，包括取样的数目及以结果的解释如下这个测试还可用于药典中抗菌剂保存的功效（5.1.3）他们可以用于进一步监测原料质量或用于制备药品的微生物质量（5.1.4）的相关项目当用于这些目的时，例如制造者用于监测原料或成品或工艺验证，测试的产品包括取样的数目，结果的解释等都需要制造者与有能力的权威机构达成共识 wp GnS 在避免产品偶然污染的条件下进行检测避免污染的进行的预防措施不能影响到试验中显示出的微生物如果要检测的产品有抗菌微生物的活动必须使其中立如果灭活剂用于此目的他们的功效及无毒性对抗微生物就会显现出来 $y.#1 通过膜过滤方法确定活菌总数目，或用药典中所描述中平板计数法。
207oE O] 当没有其它方法用于计算细菌数目时，可用最大或然数法方法的选择基于几个因素，例如产品的性质，微生物的期待值选择任何方法都要经过适当的验证 aDv/kFfn 当联合就用5.1.3和5.1.4时，平板计数法，表面铺展法和膜过滤法可能用到 nJH% pBc 样品的制备 0-f - 取样计划 产品取样必须依照一个较好定义的取样计划取样计划主要取决于例如批量，与不可接受高污染产品的健康危害因素，产品的物性及污染的预期水平等因素除另有描述，考虑到以上预防措施一般用制备或取10g或10ml物质做试验如果必要的话，也可取其它量,用足够数量的容器将这样品混匀，取决于待检测物质的性质适用于同种性质的产品的取样计划与微生物的分布是一个问题，是三级取样计划在这种情况下每批取五个样品并分别调查这三级分别是： (HKm2JuFG 1. 可接受样品，例如，样品每克或每毫升包含的少于m集落形成单位,m表示相关专著中规定的限度 ur7a%NH 2. 边际样品，例如 多于mCFU,但每克或每毫升少于10mCFU )\G#[Pc7 3. 缺陷试样,例如包含多于10mCFU gk%ye&:f 水溶性产品 在pH=7.0缓冲氯化钠胨中或其它恰当液体中溶解或稀释10g或10ml产品.一般十个稀释液中制备一个。
尽管如此，产品的特性或必要的敏感性也可做成其它的比例的如果已知此产品有抗微生物活性，可加入灭活剂到稀释液中如果需要调节pH值，可进一步制备同等10倍的液体 b\mN^P~>A 不溶于的非脂肪产品 9'M({/7y 在pH=7.0缓冲氯化钠胨中或其它恰当液体中悬浮10g或10ml产品一般十个稀释液中制备一个尽管如此，产品的特性或必要的敏感性也可加大体积一种恰当的表面活性剂，例如可加入1g/l聚山梨酯80帮助较差湿度物质悬浮其中如果已知此产品有抗微生物活性，可加入灭活剂到稀释液中如果需要调节pH值，可进一步制备同等10倍的液体 V-57BKeDz 脂肪产品10g或10ml的待测的同类产品要有不超过其重量一半的已消毒的聚山梨酯80或其它的恰当的表面活性剂，如果必要的话加热不超过40℃，如果特例的话不超过45℃，小心混合如果有必要保持温度的话要在水浴中或细菌培养器中加入足够的预热好的氯化钠胨缓冲液pH=7.0制备原来十个产品的一个小心混合在乳状物形成的最短时间内保持温度,在任何情况下都不要超过30分钟，进一步用pH=7.0缓冲氯化钠胨制备十倍的溶液含有适当浓度消毒的聚山梨酯80或其它浓度的表面活性剂 。
EP @=i 控释贴片用消毒的产钳去掉十个制备好的透皮的贴片,有粘性的一面往上，放到消毒的玻璃或塑料盘上，用消毒的纱布盖住粘性面（或编织过滤型单丝联合体格子）如果必要的话将这十个贴片放到最小体积500mlpH=7.0缓冲氯化钠胨中并有恰当的灭活剂象聚山梨酯80或蛋黄素用力振荡此制备品至少三十分钟（制备品A）以相同方式制备另外十个贴片，将其放在500ml肉汤介质D中，并用力振荡此制备品至少三十分钟（制备品B） t C&Xm}: 产品的检测 C>LkU |[ 薄膜过滤用薄膜过滤有名义上的孔径不超过0.45um且其可保持细菌的有效性已经建立选择过滤材料的类型以这样一种方式进行，保持细菌的有效性不受调查样品组成的影响纤维素硝酸盐过滤膜，例如可用于水性，油性，弱酒精性溶液 纤维素醋酸盐膜例如可用于强酒精性溶液过滤装置的设计允许将过滤转移至培养介质中 U,/>p=s 将制备样品一段中所描述的制备好的样品取适当数量（最好一种产品取一克代表，如果集落形成单位要求较大的话也可少取些）每个用两层膜迅速过滤用三等量，每次大概100ml的适当液体象pH=7.0缓冲氯化钠胨洗过滤，向溶液中加入表面活性剂聚山梨酯80或抗微生物的灭活剂。
如果通过验证，可用三批洗过的转移一层过滤膜，首先对细菌计数，在表面上放一层适当的琼脂，例如介质B或其它，如果为了真菌计数在表面上也放一层适当的琼脂例如介质C,琼脂B的培养器在30-35℃琼脂C的培养器在20-25℃五天，除非在短时间内就可得到可靠数量选择平板最大数目不少于100集落并且计算每克或每毫升产品的集落数 7D4P= $UJp 当检测释放贴片时，分别用两个消毒的过滤膜过滤50ml制备品A一个膜放上琼脂B用来测总存活数，另一个用琼脂C测真菌数 Qb6s]QZEV 平板计数法 UV$v: >K# a倾倒式平板法，用9CM皮氏培养皿，每个均加入制备阶段制备好的样品1ml，15-20ml适于培养细菌液状琼脂（象介质B）或15-20ml适于培养真菌液状琼脂（象介质C）不超过45℃，如果用大的皮氏培养皿琼脂量也要相应的增加，每种等级的溶液制备每种介质至少要有两个皮氏培养皿培养平板在30-35℃五天（真菌是20-25℃），除非在短时间内就可得到可靠数目对应一个溶液选择平板，显示的最大集落数要小于300（真菌是100），计算出每克或每毫升的平均数目及集落数目 )k{zRq:d b表面扩散法，用9CM皮氏培养皿，加入15-20ml适于培养细菌液状琼脂（象介质B）或15-20ml适于培养真菌液状琼脂（象介质C）在45℃允许固体化，如果用大的皮氏培养皿琼脂量也要相应的增加，将平板干燥,例如在LAF椅上或培养器。
将制备阶段制备好的样品不超过0.1ml的样品在介质表面扩散开，每种等级的溶液制备每种介质至少要有两个皮氏培养皿用倾倒平板法中所说的方法培养并计算集落数 ,~p 'p) 最大或然率方法 )
真菌生长实验是隔离在适当的琼脂介质（例如无抗生素的介质C）对于假丝酵母在20-25℃48小时，黑曲菌要在20-25℃7天 6apK]PT 小表 /Xa_Xg7 用pH=7.0缓冲氯化钠胨使参考的悬浮液每毫升有100个菌落,分别用每个微生物的悬浮液作为一种控制计数方法,在有无产品的情况下都要检测.当用膜过滤法或平板计数法测试时,任何微生物测试数目的差异不多于得到接种体根据其数目计算出的值.当用最大或然率方法时,从接种体计算出的数值结果可信度达95%.为了测试培养基的无菌状态和稀释液和操作的无菌,用无菌的pH=7.0缓冲氯化钠胨来准备测验.一定要确保没有滋生微生物. ={_.} 结果的解释 $gKMVgD" 在琼脂B上发现的平均菌落数目与细菌数目认为是相同的.认为真菌的数目和琼脂C上单位的菌落是相同的.所有存活的细菌的总数是上述所说的细菌和真菌的总和.如果有证据证明在这两种培养基上有相同的微生物,则是正确的.如果数目用最大或然率计算,则结果为细菌数目. C2GF N1i 专题文献中提到的限度解释如下: O_8ERxj g] 100微生物:最大可接受限度500 " @!z+x[8 1000微生物:最大可接受限度5000 xq_%|p}y 以此类推 p D!IB`cA4 如果取样计划象例子中说的用的三级取样的话,程序如下: s~ Wjh7' 每五个样品计算一下总的存活数.如果满足如下条件的话,物质或制备就可通过测验: b?7?iV 4 1所有的单个的存活数目均未超过描述限度(例如没有不可接受的样品) r/=v;4.W 2.同时不多于两个的活数目均未超过描述限度且在十倍的限度之间(例如不超过两个边界样品)方法及培养基详见2.6.13 &H,5f # 2.6.13专有微生物测试 {YWj` K 在这种常用的方法中,通常是有选择性的应用一定的介质.对于所有的介质来说有一共同点那就是亚致死量伤害微生物是无法检测到的.因为它与产品的质量有关,复生需要依靠选择的介质进行试验规程 f!ehq\K1k 如果被检测的产品有抗菌活动,这个产品必须足够的中和. #rMMOu9r2 肠道菌和一定的革兰氏阴性菌 ~[Mk QJxe 尽管设计的试验是用于检测肠道菌属的细菌,其它菌(气单胞菌属, 假单胞菌属)也许也可以发现 QX ish Hk& 细菌的检测. Xw`vf7z* 准备产品按2.6.12,但是用肉汤D代替pH=7.0缓冲氯化钠胨,均一化在35-37度培养一段时间使细菌复活但不要充足的激活他们使其繁殖,( 通常2小时到5小时),振荡容器,将产品与富足的培养基按1比100的比例,在35-37度培养18-48h.如果在任何盘上均没有葛兰氏阴性菌.产品通过测试. uT8/xNB! 定量评价 M
