微生物学检验重点知识总结.docx

微生物学检验重点学问总结绪论1.微生物的定义与特点;微生物的分类一, 微生物的概念与特点 1.微生物（microorganism） 是一群个体微小，结构简洁，肉眼不能干脆望见，必需借助于光学显微镜或电子显微镜放大数百倍至数万倍才能视察到的微小生物的总称 2.微生物的特点 个体微小，结构简洁 比表面积大，吸取多，转化快 繁殖快，代谢强 适应强，易变异 种类多，分布广 1.微生物类型 依据微生物大小, 结构和组成不同分为三类型2.病原微生物的定义病原微生物：是指能引起动物, 植物或人类产生疾病的微生物3.医学微生物学的发展简史微生物的发觉与探讨（1）列文虎克独创显微镜，最早视察到微生物；微生物学探讨的创始人：巴斯德, 科赫, 李斯特第一章 细菌的基本性状第一节 细菌的形态与结构1.细菌细胞壁的结构和功能，肽聚糖结构和其化学组成；革兰阳性与革兰阴性细菌细胞壁的主要区分（一）细胞壁化学组成与结构，革兰染色 共有组分： 肽聚糖特殊组分：G+ 菌, G-菌不同革兰阳性菌细胞壁特殊组分：磷壁酸革兰阴性菌细胞壁特殊组分：外膜革兰阴性菌细胞壁肽聚糖:聚糖骨架, 四肽侧链2.细胞壁的功能：（1）维持细菌固有形态和抗拒低渗作用。

2）物质交换作用3）屏障作用4）免疫作用5）致病作用6）与细菌药物敏感性有关 G+菌与G-菌细胞壁结构比较• 细菌细胞膜的结构与真核细胞基本相同，由磷脂和多种蛋白质组成，但不含胆固醇• 细菌细胞膜可形成一种特有的结构，称中介体2.细菌荚膜, 鞭毛和菌毛的功能荚膜：功能：有抗吞噬和抗拒杀菌物质的杀菌作用，增加细菌的侵袭力，构成细菌致病力的重要因素之一②具有免疫原性③鉴别细菌和血清学分型鞭毛：功能：细菌的运动器官菌毛一般菌毛：具有黏附性，与细菌致病性有关性菌毛：与细菌的遗传变异相关3.芽胞结构特点, 意义, 与消毒灭菌的关系；细菌L型的形态特征, 检验要点芽 胞：某些细菌（主要为革兰阳性杆菌）在确定条件下，细胞质浓缩脱水而形成一个折光性很强，具有多层膜状结构, 通透性很低的圆形或卵圆形的小体L型细菌：细胞壁缺陷的细菌常发生在作用于细胞壁的抗菌药物治疗过程中依据细胞壁缺陷程度分：原生质体（完全失去细胞壁，见于G+菌，仅在高渗环境中存活)原生质球（细胞壁部分缺损，见于G-菌，在高渗或非高渗环境中均能存活）4.G+菌和G-菌细胞壁结构的差异和其意义第二节 细菌的生理细菌的生长条件,生长周期和各期的特点;IMViC试验的组成和机制;细菌分解和合成代谢产物的种类和意义。

细菌的生长繁殖（一）细菌生长繁殖的条件1. 足够的养分物质 包括：水, 碳源, 氮源, 生长因子等2. 适宜的酸碱度 多为pH7.2～7.63. 合适的温度 多数病原菌为35℃～37℃4. 必要的气体环境 主要是O2和CO2按细菌对O2的须要与否，将细菌分为：细菌生长繁殖的规律细菌的繁殖方式：无性二分裂细菌的繁殖速度：大多数细菌20～30分钟即可分裂一次2.细菌的养分类型和养分机制，自氧菌与异氧菌的概念3.细菌的生长曲线和其特点一）能量代谢细菌获得能量的途径 —— 生物氧化细菌能量代谢的主要类型：（二）分解代谢检测细菌糖分解产物的常用试验：糖发酵试验, 甲基红试验, VP试验等检测细菌蛋白质和氨基酸分解产物的常用试验：吲哚（靛基质）试验, 硫化氢试验, 苯丙氨酸脱氨酶试验等其他检测细菌分解产物的常用试验：尿素分解试验, 枸橼酸盐利用试验等第三节 细菌与环境1正常菌群的概念和生理功能；条件致病菌的概念2.正常菌群的生理功能；条件致病菌的概念3.消毒, 灭菌, 无菌, 无菌操作等概念；高温消毒灭菌法和其应用二, 细菌的限制（一）基本概念：消毒 杀死物体或介质中病原微生物的方法。

灭菌 杀灭物体或介质中全部微生物的方法 无菌 无活菌存在的状态无菌操作 防止微生物进入机体或物体的操作技术防腐 防止或抑制细菌生长繁殖的方法4.常用物理和化学消毒灭菌方法和其应用；噬菌体与宿主的相互关系第二章 真菌的基本性状真菌的概念真菌的分类真菌孢子与细菌芽胞的区分第三章 病毒的基本性状病毒的大小病毒的结构病毒的增殖病毒的复制周期第四章 微生物与感染细菌致病三大因素细菌内外毒素的区分毒血症, 菌血症, 败血症, 脓毒血症的概念全身感染的类型第二篇 微生物检验的基本技术第五章 细菌的检验技术第一节 细菌形态检验技术细菌染色的一般程序染色标本检查的一般程序革兰氏染色法, 抗酸染色法的原理, 方法2.革兰染色法【方法】第二节 细菌的接种与培育技术调配—溶化—调Ph—过滤澄清—分装—灭菌—检定—保存细菌在各种培育基上的生长现象和视察要点培育基的概念培育基的分类第三节 细菌的生化鉴定技术糖(醇,苷)类发酵试验, O/F试验, MR试验, VP试验的原理, 操作, 结果判定要点和其应用；I试验, C试验, 氧化酶, 触酶, 血浆凝固酶氢氧化钾拉丝试验和KIA和TSI的试验原理, 操作要领, 视察结果要点和其应用。

一, 碳水化合物的代谢试验1、 糖（醇, 苷）类发酵试验 原理：多糖→单糖→丙酮酸→酸性产物(或产气)→pH↓ →呈酸性变色(或出现气泡2, O/F试验原理：依据细菌在分解葡萄糖的代谢过程中对氧分子需求的不同，将细菌分为氧化, 发酵和产碱型三类 3, 甲基红试验原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，进一步分解生成大量混合酸，使培育pH下降至4.4以下，加入甲基红后，呈现红色反应为甲基红试验阳性4, V-P试验原理：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中，乙酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与胍基化合物结合，生成红色化合物，是为V-P试验阳性5, β-半乳糖苷酶试验（ONPG）原理：有的细菌可产生β-半乳糖苷酶，能分解邻硝基酚β-D半乳糖苷(ONPG)而生成黄色的邻硝基苯酚，该试验也称为ONPG试验 6, 七叶苷水解试验 原理：某些细菌能分解七叶苷产生葡萄糖与七叶素，七叶素与培育基中的Fe2+结合后，形成黑色的化合物，使培育基变黑 二, 蛋白质和氨基酸的代谢2, 硫化氢试验原理：细菌产生酶，分解含硫氨基酸生成硫化氢，硫化氢与培育基中的亚铁盐或铅盐结合生成黑色化合物。

3, 尿素酶试验原理：细菌产生脲酶，水解尿素生成氨和二氧化碳，培育基呈碱性反应4, 苯丙氨酸脱氨酶试验原理：细菌产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱氨形成苯丙酮酸，苯丙酮酸与三氯化铁作用，形成绿色化合物三, 碳源利用试验 枸橼酸盐利用试验原理：有的细菌能利用培育基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源，细菌在生长过程中分解枸橼酸盐产生碳酸盐，使培育基呈碱性反应四, 酶类试验 1, 氧化酶（细胞色素氧化酶）试验原理：某些细菌具有氧化酶（细胞色素氧化酶），能将二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺氧化生成红色的醌类化合物2, 触酶试验原理：细菌产生的触酶（过氧化氢酶）能催化过氧化氢放出初生态氧，继而形成氧分子出现气泡3, 凝固酶试验（试管法） 原理：金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆中的纤维蛋白原转变为不溶性的纤维蛋白 4, 凝固酶试验（玻片法） 原理：金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆中的纤维蛋白原转变为不溶性的纤维蛋白5, 硝酸盐还原试验 原理：某些细菌能还原培育基中的硝酸盐为亚硝酸盐，亚硝酸盐与醋酸作用，生成亚硝酸，亚硝酸与试剂中的对氨基苯磺酸作用生成重氮磺酸，再与α-萘胺结合，生成N-α-萘胺偶氮苯磺酸(红色化合物第六章 真菌检验技术真菌感染性疾病的微生物学检查原则第七章 病毒检验技术病毒标本的采集和运输留意事项；第八章 细菌对抗菌药物敏感试验药物敏感试验的基本概念, 常用方法抗菌药物敏感试验方法 纸片扩散法 稀释法 E-test法需氧菌和兼性厌氧菌的药物敏感试验（K-B法和稀释法的原理, 方法, 结果推断和正确发报告）。

第三篇 常见微生物鉴定技术第十章 需氧和兼性厌氧球菌葡萄球菌, 链球菌, 肺炎链球菌, 淋病奈瑟菌的主要形态特征, 培育特性, 分类依据和分类；病原性球菌标本采集种类, 检验鉴定程序, 鉴定要点, 检验鉴定依据和报告要点第十一章 革兰阴性需氧和兼性厌氧杆菌第一节肠杆菌科概述肠杆菌科细菌：1.G-杆菌，多数有鞭毛, 菌毛2.发酵葡萄糖，兼性厌氧3.氧化酶阴性4.还原硝酸盐为亚硝酸盐5.触酶（＋）肠道选择性培育基：麦康凯琼脂, 伊红美蓝琼脂, SS琼脂等肠杆菌科抗原：O抗原（菌体抗原），K抗原（荚膜抗原），H抗原（鞭毛抗原）等肠杆菌科鉴定依据： 1.革兰染色 2. 触媒, 氧化酶, 硝酸盐还原 3.KIA, MIU, IMViC ,其他生化反应 4.血清玻片凝集（鉴定到种, 型或血清型）IMViC试验：吲哚（I）, 甲基红（M）, VP（V）, 枸橼酸盐利用（C）四种试验，常用于鉴定肠道杆菌二, 埃希菌属形态染色： 1.短杆菌2.革兰染色阴性3.有鞭毛4.有菌毛培育特性 ： 符合肠杆菌特点 EMB——紫黑色有金属光泽乳糖发酵菌落 S-S——桃红色乳糖发酵菌落 生化反应： IMViC（++--）大肠杆菌KIA： A A＋－血清型表示法：O：K：H ETEC肠毒素：耐热肠毒素（ST） 不耐热肠毒素（LT），65oC30min被破坏引起腹泻的大肠埃希菌：肠产毒性大肠埃希菌ETEC肠致病性大肠埃希菌EPEC肠侵袭性大肠埃希菌EIEC肠出血性大肠埃希菌EHEC肠凝合性大肠埃希菌EAECEIEC毒力测定试验：豚鼠眼结膜试验卫生学标准：每ml饮水中细菌总数≤100个，每1000ml水中大肠杆菌菌群数≤3个，每100 ml 瓶装汽水, 果汁中，大肠杆菌菌群数≤5 个。

三, 沙门菌属对人类有致病性：肠热症 ；食物中毒；败血症形态染色：G-杆菌 ；周身鞭毛 培育和生化反应：不分解乳糖分解葡萄糖；分解蛋白质，产生H2S伤寒沙门菌菌落特征（EMB, MAC）：无色透亮菌落伤寒沙门菌菌落特征（SS）：无色透亮或半透亮，中心黑色菌落伤寒沙门菌KIA： K A－＋标本实行：第1-2W，血, 骨髓；第2-3W，粪便, 尿；全程取骨髓肥达反应: 用已知伤寒沙门菌O, H和甲型副伤寒沙门菌和乙型副伤寒沙门菌H抗原与病人血清做定量凝集试验，用以帮助诊断肠热症TO≥1：80，TH≥1：160；PA, PB均≥1：80才有意义动态视察：双份血清抗体四倍上升有诊断意义四, 志贺菌属形态染色：符合肠杆菌特征，有菌毛，无鞭。