免疫标记技术及分析应用课件.ppt

•第一节￿免疫标记技术•第二节￿免疫荧光技术•第三节￿免疫酶技术•第四节￿放射免疫技术•第五节￿免疫胶体金标记技术第七章第七章￿ ￿免疫标记技术及分析应用免疫标记技术及分析应用1免疫标记技术及分析应用 用荧光素、放射性同位素、酶、发光剂、胶体金或电子致密物质等作为示踪剂，标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应第一节第一节 免疫标记技术免疫标记技术2免疫标记技术及分析应用荧光显微镜，射线测量仪，酶标检测仪，电子显微镜和发光免疫测定仪等精密仪器，对实验结果直接镜检观察或进行自动化测定3免疫标记技术及分析应用免疫标记技术分类：免疫酶技术(ng)、放射免疫技术(pg)、免疫荧光技术、免疫电镜技术、免疫胶体金技术、发光免疫测定特点：高度灵敏、特异、快速，定性、定量、定位4免疫标记技术及分析应用反应类型反应类型实验技术实验技术结果判断结果判断标记免疫反应标记免疫反应 荧光免疫技术荧光免疫技术检测荧光现象检测荧光现象放射免疫技术放射免疫技术检测放射性强度检测放射性强度酶免疫技术酶免疫技术检测酶底物显色检测酶底物显色发光免疫技术发光免疫技术检测发光强度检测发光强度金免疫技术金免疫技术检测金颗粒沉淀检测金颗粒沉淀免疫标记技术5免疫标记技术及分析应用 用用标记物标记抗体或抗原标记物标记抗体或抗原进行抗原抗体反应借以提高免进行抗原抗体反应借以提高免疫学诊断的敏感性疫学诊断的敏感性荧光素荧光素 ：：异硫氰酸荧光素（黄绿异硫氰酸荧光素（黄绿色荧光）、藻红蛋白、色荧光）、藻红蛋白、 罗丹明罗丹明（红色荧光）（红色荧光）放射性同位素：放射性同位素： 125125I I、、131131I I酶：辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶免疫荧光检测法（免疫荧光检测法（IFAIFA））放射免疫检测法（放射免疫检测法（RIARIA））酶免疫检测法（酶免疫检测法（EIAEIA））免疫标记技术免疫标记技术液相（液相（ELISAELISA）、固相（免疫组化技术））、固相（免疫组化技术）6免疫标记技术及分析应用第二节第二节 7免疫标记技术及分析应用 将抗体或抗原标记以荧光素，然后与相应抗原或抗体结合，形成的免疫复合物在一定波长光的激发下可产生荧光，借助荧光检测仪测定或定位被检抗原或抗体。

当出当出现荧光光时，表明，表明标记抗体存在，抗体存在，相相应的抗原也存在的抗原也存在8免疫标记技术及分析应用9免疫标记技术及分析应用抗体的抗体的荧光素光素标记v标标记记原原理理：：利利用用抗抗体体蛋蛋白白的的自自由由氨氨基基与与FITC的的异异硫硫氰氰基基在在碱碱性性溶溶液液中中形形成成硫硫碳碳酰酰胺胺键键，，使使抗抗体体与与FITC结合成荧光抗体结合成荧光抗体v标记方法标记方法: 搅拌法：搅拌法：适于标记体积较大、蛋白含量较高的抗体适于标记体积较大、蛋白含量较高的抗体标记时间短，荧光素用量少，但有非特异性染色标记时间短，荧光素用量少，但有非特异性染色 透析法：透析法：适于标记样品量少，蛋白含量低的抗体适于标记样品量少，蛋白含量低的抗体标记比较匀，标记比较匀， 非特异染色较低非特异染色较低FITC 异硫氰酸荧光素异硫氰酸荧光素10免疫标记技术及分析应用常常用用的的荧荧光光素素返回11免疫标记技术及分析应用12免疫标记技术及分析应用v去除游离去除游离荧光素及其降解光素及其降解产物：物：透析或凝胶透析或凝胶过滤v去除去除荧光素未光素未结合和合和结合合过度的抗体：度的抗体：阴离子阴离子交交换层析法析法v去除交叉反去除交叉反应或非期望抗体：或非期望抗体：动物肝粉吸收或物肝粉吸收或固相抗原吸收固相抗原吸收荧光抗体的光抗体的纯化化13免疫标记技术及分析应用荧光检测仪荧光检测仪 （1）荧光显微镜 （2）荧光分光光度计（3）流式细胞仪（4）荧光偏振光分析仪 14免疫标记技术及分析应用荧光光显微微镜 利用一定波利用一定波长的激的激发光光对样品品进行激行激发，，产生一定波生一定波长的的荧光，光，对样品品结构或其构或其组分分进行行定性、定位、定量定性、定位、定量观察察检测。

￿15免疫标记技术及分析应用￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿荧光显微镜的种类￿￿￿￿￿￿透射式￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿落射式16免疫标记技术及分析应用荧光显微镜的构造荧光显微镜的构造吸收滤色镜吸收滤色镜吸收滤色镜吸收滤色镜激发滤色镜激发滤色镜激发滤色镜激发滤色镜分色镜分色镜分色镜分色镜汞灯汞灯汞灯汞灯17免疫标记技术及分析应用流式细胞仪流式细胞仪18免疫标记技术及分析应用荧光酶标仪荧光酶标仪19免疫标记技术及分析应用（（1 1）直接荧光染色法）直接荧光染色法将荧光素标记在特异性抗体上，直接检测抗原•优点：简单、快速、特异性高•缺点：敏感性差 20免疫标记技术及分析应用直接法直接法 间接法接法 21免疫标记技术及分析应用22免疫标记技术及分析应用23免疫标记技术及分析应用（（2 2）间接荧光染色法）间接荧光染色法 将荧光素标记在第二抗体（抗抗体）上或标记在SPA上，检测与抗原结合的特异性抗体24免疫标记技术及分析应用直接法直接法 间接法接法 25免疫标记技术及分析应用26免疫标记技术及分析应用（（3 3）补体荧光染色法）补体荧光染色法 将荧光素标记在补体的抗体上（抗C3抗体），检测抗原抗体复合物。

27免疫标记技术及分析应用•优点：可检测所有的抗原抗体系统，具通用性；敏感性高•缺点：操作流程长、干扰因素多、非特异性荧光多，补体易失活、需新鲜制备不方便28免疫标记技术及分析应用29免疫标记技术及分析应用30免疫标记技术及分析应用Enzyme￿ImmunoassayEnzyme￿Immunoassay（（EIAEIA））第三节第三节31免疫标记技术及分析应用就是将抗原和抗体的特异性免疫反应与酶的催化反应相结合而建立的一种免疫检测技术32免疫标记技术及分析应用•抗原抗体反应＋酶催化反应•肉眼、光学显微镜、电子显微镜、分光光度计•特异、敏感•可以在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在µg、甚至ng水平上对其进行定量33免疫标记技术及分析应用 将酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，酶标记抗体可与存在于组织细胞或吸附于固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合 滴加底物溶液后，底物可在酶作用下催化底物水解、氧化或还原等反应，产生有颜色的物质酶降解底物的量与呈现的颜色成正比34免疫标记技术及分析应用优点：①①灵敏度高，特异性强；②②可定性、定量检测可溶性抗原和抗体，适用于普查；③③试剂来源广，稳定，保存时间长，且无同位素污染；④④结果可肉眼半定量，也可用仪器定量检测，且仪器价格较低廉，可在大多数实验室开展；⑤⑤操作简便，易于掌握和使用，且重复性好；⑥⑥可用于定位组织细胞上的抗原或抗体成分。

35免疫标记技术及分析应用缺点：标记反应较难掌握，在操作过程中容易引起酶、抗原或抗体的失活 36免疫标记技术及分析应用一、常用的酶及其底物一、常用的酶及其底物•酶活性高；具有抗原抗体共价结合的基团；标记后不影响酶活性及抗原、抗体反应性；产物易判定或测定；酶活性不受样品中其他成分的影响（用于均相测定的酶标抗原与抗体结合后酶活性出现抑制或激活）；无害；稳定，价廉、易得常用酶常用酶 底物底物 显色显色辣根过氧化物酶辣根过氧化物酶 邻苯二胺、邻苯二胺、H2O2 橙黄色橙黄色 四甲基联苯胺、四甲基联苯胺、 H2O2 蓝色蓝色碱性磷酸酶碱性磷酸酶 对硝基苯磷酸酯对硝基苯磷酸酯 黄色黄色37免疫标记技术及分析应用38免疫标记技术及分析应用二、二、￿ ￿标记方法标记方法•酶结合物•技术简单、产率高；不影响酶和抗体（抗原）的生物活性；所得酶标记物稳定；较少形成酶与酶、抗体与抗体、抗原与抗原的聚合物。

39免疫标记技术及分析应用•戊二醛交联法：抗原-戊二醛-酶• 改良过碘酸钠标记法：过碘酸钠氧化酶的羟基为醛基，再与抗体蛋白的氨基结合HRP-CH2-NH-IgG 40免疫标记技术及分析应用三、酶标记物的纯化及鉴定三、酶标记物的纯化及鉴定1、纯化游离酶：增加非特异染色游离抗原（抗体）：竞争降低特异性染色葡聚糖凝胶层析法50%饱和硫酸铵沉淀提纯法41免疫标记技术及分析应用2、鉴定•免疫活性鉴定：免疫电泳/双扩/ELISA•酶标记率测定：分光光度法42免疫标记技术及分析应用四、酶标仪（四、酶标仪（酶联免疫检测仪）•比色•测定波长、吸光度范围、光学系统、检测速度、震板功能、温度控制、定性和定量的软件，自动洗板、温育、加样•450nm、492nm、620nm、630nm、650nm、405nm43免疫标记技术及分析应用返回44免疫标记技术及分析应用45免疫标记技术及分析应用46免疫标记技术及分析应用47免疫标记技术及分析应用免疫标记技术放射物标记技术酶标技术免疫荧光技术其他标记技术酶联免疫吸附技术酶联免疫吸附技术酶免疫组化技术双抗体夹心法双抗体夹心法竞 争 法双抗原夹心法间 接 法双位一点法ELISA48免疫标记技术及分析应用ELISAEnzyme-Linked Immunosorbent Assay49免疫标记技术及分析应用ELISAELISA基本实验过程基本实验过程•包被：将已知抗原或抗体通过物理吸附到固相载体表面，使抗原或抗体固相化•抗原抗体反应：先后加入被检标本和酶结合物，使之与固相抗原或抗体发生免疫反应而被结合固定•酶促反应：在反应体系中加入酶作用的底物，使发生酶促反应而显色50免疫标记技术及分析应用ELISAELISA原理图原理图 ①①固相的抗原或抗体（固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）免疫吸附剂） ②②酶标记的抗原或抗体（酶标记的抗原或抗体（标记物）标记物）③③酶作用的底物（酶作用的底物（显色剂）显色剂）②②酶标记的抗原或抗体（酶标记的抗原或抗体（标记物）标记物）51免疫标记技术及分析应用固相抗原或抗体固相抗原或抗体1. 固相载体的性状：聚苯乙烯等固相载体2. 试剂的配制：所有试剂的配制都用双蒸水3. 包被：(1)包被缓冲液：pH 9.6 碳酸盐缓冲液 (2)包被的浓度: 10µg/ml(3)包被的时间：4℃过夜或37℃1-3h (4)包被的量：100µl52免疫标记技术及分析应用酶酶 底底 物物显色反显色反应应 测定波长测定波长 辣根过氧化物酶辣根过氧化物酶 邻苯二胺邻苯二胺四甲替联苯胺四甲替联苯胺氨基水杨酸氨基水杨酸邻联苯甲胺邻联苯甲胺2,2‘-连胺基连胺基-2(3-乙基乙基-并噻唑啉磺酸并噻唑啉磺酸-6)铵盐铵盐 橘红色橘红色黄色黄色棕色棕色兰色兰色蓝绿色蓝绿色492460449425642碱性磷酸酶碱性磷酸酶 4-硝基酚磷酸盐硝基酚磷酸盐(PNP)萘酚萘酚-AS-Mx磷酸盐磷酸盐+重氮盐重氮盐 黄色黄色红色红色 400500 葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶 ABTS+HRP+葡萄糖葡萄糖葡萄糖葡萄糖+甲硫酚嗪甲硫酚嗪+噻唑兰噻唑兰 黄色黄色深蓝色深蓝色 405420 β-Ｄ－半乳糖苷酶Ｄ－半乳糖苷酶 甲基伞酮基半乳糖苷甲基伞酮基半乳糖苷(4MuG)硝基酚半乳糖苷硝基酚半乳糖苷(ONPG) 荧光荧光黄色黄色 360,450420 酶及其底物酶及其底物53免疫标记技术及分析应用DNM-9602GDNM-9602G酶标分析仪酶标分析仪DNM-9602 DNM-9602 标配酶标分析仪标配酶标分析仪 DNM-9602ADNM-9602A酶标分析仪酶标分析仪酶标分析仪测定酶标分析仪测定OD值值54免疫标记技术及分析应用•1. 直接法•2. 间接法•3. 夹心法•4. 竞争法•5. 捕获法ELISAELISA种类种类55免疫标记技术及分析应用1.1.直接直接 法法56免疫标记技术及分析应用direct ELISA—for Agdirect ELISA—for Ag57免疫标记技术及分析应用direct ELISA—for Abdirect ELISA—for Ab返回58免疫标记技术及分析应用2.￿2.￿间接法间接法+++　　 间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。

称为间接法59免疫标记技术及分析应用60免疫标记技术及分析应用61免疫标记技术及分析应用包被固相载体包被固相载体: 用已知抗原包被用已知抗原包被固相载体固相载体 加待检标本加待检标本: 使相应抗体与固相抗原结合使相应抗体与固相抗原结合洗涤，除去无关的物质洗涤，除去无关的物质 加酶标抗抗体加酶标抗抗体:与固相载体上抗原抗体与固相载体上抗原抗体复合物结合；洗涤，除去复合物结合；洗涤，除去未结合的酶标抗抗体未结合的酶标抗抗体 加底物加底物显色显色 根据颜色反应的程度进行根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量测定该抗原的定性或定量测定间接法间接法ELISA过程过程62免疫标记技术及分析应用3.￿夹心法：+++双抗体夹心法双抗体夹心法双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法63免疫标记技术及分析应用64免疫标记技术及分析应用获得待分析物的未标定抗体获得待分析物的未标定抗体将特异性抗体与固相将特异性抗体与固相载体连接形成固相抗体载体连接形成固相抗体 洗涤除去未结合的洗涤除去未结合的抗体及杂质抗体及杂质 加入封闭蛋白溶液以封闭载体加入封闭蛋白溶液以封闭载体表面残留的蛋白结合位点表面残留的蛋白结合位点洗涤并除去未结合的封闭蛋白洗涤并除去未结合的封闭蛋白加受检标本（抗原）形成加受检标本（抗原）形成固相抗体－抗原复合物固相抗体－抗原复合物 洗涤除去其他洗涤除去其他未结合的物质未结合的物质 加酶标抗体生成加酶标抗体生成抗体抗体—待测抗原待测抗原—酶标记抗体酶标记抗体的复合物的复合物 彻底洗涤彻底洗涤未结合的未结合的 酶标抗体酶标抗体 加底物进行加底物进行酶催化反应酶催化反应 根据颜色反应的根据颜色反应的程度进行该抗原程度进行该抗原的定性或定量测定的定性或定量测定双抗体夹心法双抗体夹心法65免疫标记技术及分析应用双抗原双抗原夹心法原理心法原理包被体包被体包被体包被体待待待待测测抗体抗体抗体抗体包被抗原包被抗原包被抗原包被抗原标记标记抗原抗原抗原抗原66免疫标记技术及分析应用双双夹夹心心法法返回67免疫标记技术及分析应用4. 竞争法竞争法68免疫标记技术及分析应用69免疫标记技术及分析应用竞争法的原理竞争法的原理固相支持物表面固相支持物表面固相支持物表面固相支持物表面待待待待测测物物物物包被抗体包被抗体包被抗体包被抗体标记标记抗原抗原抗原抗原 此法可此法可用于抗原和用于抗原和半抗原的定半抗原的定量测定，也量测定，也可用于测定可用于测定抗体抗体 。

70免疫标记技术及分析应用用已知特异性用已知特异性抗体包被抗体包被固相载体固相载体 测定管加待测抗原和测定管加待测抗原和一定量的酶标抗原使二者与一定量的酶标抗原使二者与固相抗体竞争结合固相抗体竞争结合 对照管只加一定量酶标抗原对照管只加一定量酶标抗原与固相抗体直接结合与固相抗体直接结合 分别洗涤分别洗涤除去未结合除去未结合的成分的成分 加底物显色加底物显色分别测定两管的吸光度值，分别测定两管的吸光度值，根据对照管与测定管吸光度值之比，根据对照管与测定管吸光度值之比， 计算标本中待测抗原含量计算标本中待测抗原含量71免疫标记技术及分析应用俘俘俘俘获获抗体抗体抗体抗体（二抗）（二抗）（二抗）（二抗）待待待待测测抗体抗体抗体抗体标记标记抗原抗原抗原抗原包被体包被体包被体包被体5. 捕获法血清中针对某些抗原的特异性血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性常和特异性IgG同时存在，同时存在，后者会干扰后者会干扰IgM抗体的测定因此测定抗体的测定因此测定IgM抗本多用捕获法抗本多用捕获法 72免疫标记技术及分析应用包被体包被体包被体包被体待待待待测测抗原抗原抗原抗原包被包被包被包被连连接物接物接物接物标记标记抗体抗体抗体抗体俘俘俘俘获获抗体抗体抗体抗体特点：所有特点：所有特点：所有特点：所有试剂试剂盒均采用同一包被物和包被工盒均采用同一包被物和包被工盒均采用同一包被物和包被工盒均采用同一包被物和包被工艺艺73免疫标记技术及分析应用（1）将抗人IgM抗体连接在固相载体上，形成固相抗人IgM。

洗涤2）加入稀释的血清标本：保温反应后血清中的IgM抗体被固相抗体捕获洗涤除去其他免疫球蛋白和血清中的杂质成分3）加入特异性抗原试剂：它只与固相上的特异性IgM结合4）加入针对特异性的酶标抗体：使之与结合在固相上的抗原反应结合5）加底物显色：如有颜色显示，则表示血清标本中的特异性IgM抗体存在，是为阳性反应捕获法操作过程捕获法操作过程74免疫标记技术及分析应用食品中盐酸克伦特罗的测定食品中盐酸克伦特罗的测定 食品中毒素的测定（主要包括黄曲霉毒素，食品中毒素的测定（主要包括黄曲霉毒素， 赭曲霉毒素赭曲霉毒素 ）） 食品中有害微生物的快速筛检食品中有害微生物的快速筛检 （如沙门氏（如沙门氏菌菌 ）） 甲胺磷残留分析甲胺磷残留分析 甲基对硫磷残留分析甲基对硫磷残留分析 呋喃丹残留分析呋喃丹残留分析 ELISA在食品安全检测中的应用在食品安全检测中的应用ELISA用于农药残留的检测用于农药残留的检测75免疫标记技术及分析应用河豚毒素河豚毒素 植物毒素如罌粟硷、吗啡、藻类毒素植物毒素如罌粟硷、吗啡、藻类毒素 苯并芘苯并芘 主要有除草剂与杀虫剂两大类主要有除草剂与杀虫剂两大类 例如杀暝松（例如杀暝松（ FN FN ）、）、 甲氟磷酸异已酶（甲氟磷酸异已酶（ SOMAN SOMAN ）、）、 草不绿（草不绿（ Alachor Alachor ）、）、 西维因（西维因（ Carbaryl Carbaryl ）、）、 多菌灵及克菌丹（多菌灵及克菌丹（ Captan Captan ）等。

等农药的检测农药的检测：：76免疫标记技术及分析应用 ELISA ELISA检测检测 “非典型肺炎非典型肺炎”冠状病毒冠状病毒 ELISA ELISA在结缔组织病早期诊断中的应用在结缔组织病早期诊断中的应用检测抗异质性胞核核糖蛋白检测抗异质性胞核核糖蛋白A2A2（（hnRNPA2hnRNPA2））/ /类风湿性关节炎类风湿性关节炎（（PtAPtA））3333抗体抗体ELISAELISA在疾病诊断中的作用在疾病诊断中的作用 ELISA ELISA法检测幽门螺杆菌抗体法检测幽门螺杆菌抗体77免疫标记技术及分析应用ELISA试剂盒试剂盒78免疫标记技术及分析应用（（radio immunoassay，，RIA））第四节79免疫标记技术及分析应用{利用放射性同位素标记技术检测抗原的技术{灵敏度高，用于检测激素等血清中微量物质80免疫标记技术及分析应用Rosalyn￿Yalow￿（美国）（1977年获诺贝尔生理和医学奖） “for the development of radioimmunoassays of peptide hormones”Veterans Administration Hospital Bronx, NY, USA b. 19211959年，Yalow和Berson首次应用放射免疫分析法测定胰岛素81免疫标记技术及分析应用• 与此同时，Ekins利用竞争性蛋白结合分析技术测定甲状腺素获得成功 开创了生物活性物质微量测定技术的新时代，是微量分析方法学上的一个突破。

82免疫标记技术及分析应用放射免疫技术•优点：① 特异性强，即抗原抗体的特异性反应；② 灵敏度高，结果精确，检测范围10-910-12g；③ 操作流程简单易行，加样程序简单，测量和 数据处理自动化；④ 样品用量少、一般无需复杂的提纯步骤；⑤ 应用范围广泛，尤其是测量小分子半抗原•缺点： 需要昂贵的检测仪器；同位素污染83免疫标记技术及分析应用结合相游离相84免疫标记技术及分析应用第五节第五节85免疫标记技术及分析应用胶体金标记技术胶体金标记技术 以胶体金作为示踪标记物，应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术 胶体金颗粒表面带有较多电荷，用胶体金颗粒标记抗体，检测组织或细胞标本中的抗原 86免疫标记技术及分析应用　　 胶体金是由氯金酸在还原剂如白磷、抗坏胶体金是由氯金酸在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠和鞣酸等作用下，聚合成特定血酸、枸橼酸钠和鞣酸等作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，故称为胶体金的胶体状态，故称为胶体金 利用它在碱性环境中带负电荷的性质，与利用它在碱性环境中带负电荷的性质，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电吸引而形成牢蛋白质分子的正电荷基团藉静电吸引而形成牢固结合，除抗体蛋白外，胶体金还可与其他多固结合，除抗体蛋白外，胶体金还可与其他多种生物大分子结合。

种生物大分子结合87免疫标记技术及分析应用吸附在胶体金表面的抗原或抗体能定向将胶体金颗粒运载到组织或细胞内、固相载体上的相应抗体、抗原的位置由于金颗粒具有高电子密度的特性，这些标记物在抗原抗体反应处聚集达到一定密度时（即金颗粒107个/mm2），出现肉眼可见的粉红色斑点88免疫标记技术及分析应用                                            胶胶体体金金标标记记技技术术89免疫标记技术及分析应用胶体金纸条的不同种类胶体金纸条的不同种类90免疫标记技术及分析应用层析法技术优势：简单层析法技术优势：简单\ \现场现场\ \快速快速91免疫标记技术及分析应用试纸条组成结构试纸条组成结构￿￿￿￿￿￿控制控制线（（C线））92免疫标记技术及分析应用与常规诊断方法相比：优优 点点缺缺 点点快速：全部检测过程仅需快速：全部检测过程仅需 5-30分钟简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，无需专简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，无需专业人员，携带方便，可随时随地进行业人员，携带方便，可随时随地进行廉价：单个测试条成本极低廉价：单个测试条成本极低可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，可立可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，可立刻拿到结果，不必等待。

刻拿到结果，不必等待稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存检测标本种类多：在临床检测中，样品可能有尿、血液、检测标本种类多：在临床检测中，样品可能有尿、血液、血清、唾液或其他体液在非临床检测中，样本可能是由血清、唾液或其他体液在非临床检测中，样本可能是由土壤、粉尘、植物或者食品制备的微量溶液土壤、粉尘、植物或者食品制备的微量溶液定量问题定量问题灵敏度问题灵敏度问题93免疫标记技术及分析应用应用领域类别类别应用领域应用领域检测的物质检测的物质人人 类类医学医学各各级级医医院院，，血血站站，，CDC，，防防疫疫站站，，诊诊断断中中心心；；家家庭庭自自检检；；商商检检系系统统；；边边检检口岸；公安系统口岸；公安系统传染病（乙肝五项传染病（乙肝五项，，HIV, SARS等）等）标志物（标志物（AFP、肌钙蛋白、粪便血红蛋白等）、肌钙蛋白、粪便血红蛋白等）女性妊娠（女性妊娠（hCG(早孕早孕)，，LH，，FSH)毒品（吗啡毒品（吗啡、、K粉、摇头丸、冰毒）粉、摇头丸、冰毒）农农 牧牧业业畜畜牧牧兽兽医医站站, 商商检检系系统统,边边检检口口岸岸，，农农牧牧类类院院系系和和研究所研究所传染病（禽流感传染病（禽流感，兽瘟疫等），兽瘟疫等）病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等）病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等）环境环境环保监测部门环保监测部门,研究机构研究机构有害物质超标有害物质超标食食 品品安全安全食食品品安安全全检检测测中中心心，，各各监监管部门管部门农农兽兽药药残残留留（（磺磺胺胺类类、、瘦瘦肉肉精精等等）），，大大肠肠杆杆菌菌,黄黄曲曲霉素霉素94免疫标记技术及分析应用常用方法：常用方法： 胶体金斑点渗滤试验胶体金斑点渗滤试验 胶体金斑点免疫层析试验胶体金斑点免疫层析试验95免疫标记技术及分析应用96免疫标记技术及分析应用BDCTA97免疫标记技术及分析应用免疫层析法检测原理分类介绍免疫层析法检测原理分类介绍（双抗体夹心）（双抗体夹心）（以HCG检测为例）98免疫标记技术及分析应用免疫层析法检测原理分类介绍免疫层析法检测原理分类介绍（竞争反应）（竞争反应）（以吗啡检测为例）Y2 为固相化的吗啡偶联物为固相化的吗啡偶联物99免疫标记技术及分析应用相关仪器设备BIODOT XYZ3050 点膜喷金机仪器参数仪器参数仪器尺寸为： 430mmx410mmX360mm平台大小: 450mmX70mm 平台移动速度: 0-330mm/sec X、Y、Z轴移动误差: <50um 定位精度: ±10um in 1 axis;±25um in 2 axis 喷点方式 BJQ3000: 非接触喷点AJQ3000: 非接触喷点 划线宽度 BJQ3000:0.50mm/line （喷点0.20mm/drop）AJQ3000: 0.5-5mm 最小喷量 BJQ3000:10nl/dropAJQ3000:1ul/cm 划线精密度BJQ3000:±1%AJQ3000: ±2% 100免疫标记技术及分析应用切条机￿仪器参数仪器参数:进料宽度：≤100 mm进料长度：不限,可连续进料切割切割宽度：≥1 mm, 宽度连续可调切割宽度设定位数：0.01 mm切割精度：±0.1 mm切割速度：230次/分钟, 速度连续可调切条计数：单次工作和总工作分别计数刀片: 日本进口, 耐磨高碳钢材料抗静电装置：建议选配电源：220VAC重量：20KG尺寸：430(L)×330(W)×260(H) mm101免疫标记技术及分析应用胶体金结果判读方法：胶体金结果判读方法： 1. 色卡法 将反应好的试纸条T线颜色与制作的色卡比较，看颜色属于那一个档次，则在数据记录时候填写该档次标识。

最后做灵敏度比较2. 图形扫描法 将反应好的试纸条放在扫描仪器内，选择灰度扫描，获得灰度线条图象然后打开分析软件，将该灰度图象导入，自动分析出灵敏度，本底情况3. 读条仪法 很多厂家都开发了对应的读条仪，大部分都是采用简单的30万象素数码摄像头做一个拍摄，然后用软件分析102免疫标记技术及分析应用此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！103免疫标记技术及分析应用。